胡桃楸提取物抗弓形虫作用的体外实验和超微研究

目的了解胡桃楸提取物(JMME)在体外杀灭弓形虫速殖子的作用效果及其机制。方法收集感染弓形虫小鼠腹水并稀释至含虫1×107个/ml,加入胡桃楸提取物使其终浓度为60μg/ml、30μg/ml、15μg/ml、7.5μg/ml、3.25μg/ml、1.625μg/ml;乙酰螺旋霉素为阳性对照组,终浓度25μg/ml,同时设培养液阴性对照组。用MTT法测定胡桃楸提取物及其含药血清对虫体增殖情况的影响。应用透射电镜观察药物作用24h虫体超微结构的变化并拍照。结果胡桃楸提取物可明显抑制弓形虫增殖,且具有剂量依赖性,浓度大于30μg/ml的抑虫效果优于乙酰螺旋霉素组(P<0.05)。胡桃楸提取物含药血清对弓形虫具有明显的增殖抑制作用,且随含药血清浓度的增加作用效果增强,JMME浓度为0.278g/(kg.d)的含药血清抑虫效果优于SM组(P<0.05)。透射电镜下可观察到虫体电子密度增高、大量空泡形成、细胞器被破坏、细胞膜破裂、内容物溢出。结论胡桃楸提取物对弓形虫具有明显的增殖抑制和破坏作用。

动脉导管三角的应用解剖学研究

目的研究动脉导管三角区，为动脉导管未闭手术提供解剖学依据。方法解剖30具（男性22具，女性8具）成人尸体标本，在动脉导管三角区进行解剖、观察和测量。结果①在动脉导管三角内，左膈神经的长度为（7．30±0．85）cm，左迷走神经的长度为（6．08±0．50）cm；左肺动脉的长度为（2.31±0．9）cm；α角为（18±0．6）°；动脉导管三角的面积为（6．8±0．7）cm^2。②动脉韧带长度为（14．0±5．6）mm，宽度为（4．5±0．8）mm。③左喉返神经跨过主动脉弓前方时发出，继而绕此动脉下后方上行，返回颈部，其在迷走神经的返折点平对T3椎体2具（7．0％），T3／4椎间盘9具（30．0％），T4椎体12具（40．0％），T5椎体4具（13．0％），T6椎体3具（10．0％）。左喉返神经跨越动脉韧带主动脉侧1／3段者占58．1％（17例），中1／3段者占22．8％（7例），肺动脉侧1／3段者占19．1％（6例）。结论在动脉导管未闭手术中，手术暴露在T3／4椎间盘、T4椎体高度以上时比较安全，应注意避免损伤左喉返神经。

内质网应激与心肌缺血再灌注损伤的关系

内质网(ER)是真核细胞内重要的膜性细胞器,参与多种生理功能平衡的调节。内质网正常的功能紊乱时就会引发内质网应激(ERS)。为了恢复ER的功能,未折叠蛋白反应(UPR)被激活,但当应激过强或持续存在时,UPR信号的慢性激活会引发细胞凋亡。内质网应激在心肌缺血再灌注损伤中的过程中,处于中心地位。故研究两者的关系,将为临床开发有效治疗心肌缺血再灌注损伤药物提供新思路。

奶牛黏附分子MadCam-1基因的克隆及原核表达

原核表达MadCam-1基因、纯化MadCam-1黏附蛋白,并制备其多克隆抗体,为进一步功能研究奠定基础。根据MadCam-1的已知基因序列设计并合成1对引物,应用PCR技术扩增MadCam-1基因片段插入到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-MadCam-1,转化入E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导,对其产物进行SDS-PAGE分析和Western blotting鉴定,以纯化后的融合蛋白为抗原,免疫家兔,获得抗血清。结果表明,重组表达质粒pGEX-4T-1-MadCam-1经PCR及双酶切鉴定证明构建正确,测序结果与GenBank中登录的基因序列同源性为100%。表达产物经Western blotting鉴定,结果证实成功表达了分子质量约为50ku的蛋白质。纯化的蛋白质免疫家兔后,经ELISA检测多克隆抗体效价为1∶32000。因此,成功获得了奶牛MadCam-1多克隆抗体,为进一步研究奶牛黏附分子MadCam-1的功能奠定了基础。

医用活水蛭应当成为制药企业的新项目

近代名医张锡纯认为水蛭为活血的良药,他说：＂凡破血之药,多伤气分,惟水蛭味咸专入血分,于气分丝毫无损,而瘀血默消于无形,真良药也＂。水蛭,又名蚂蟥、肉钻子、马鳖、蛭蝚、至掌、虮、马蜞、马蛭、蜞、红蛭。为水蛭科软体动物蚂蟥的虫体。

鸡chUSP1 His594Ala突变使其去泛素化酶活性丧失

泛素特异性蛋白酶1(ubiquitin-specific proteases 1,USP1)是一种去泛素化酶,它在DNA损伤修复应答过程中发挥重要功能。已证明USP1与UAF1(USP1-associated factor 1)形成复合物后,其酶活性会得到极大的提升。chUSP1为在鸡细胞中发现的一种去泛素化酶,生物信息学分析发现它与人USP1同源性高达72%。本研究以本室扩增的chUSP1基因和chUAF1基因,使用bac-to-bac系统表达了chUSP1GG680,681AA单体及chUSP1GG680,681AA/chUAF1复合体。并根据人USP1预测将chUSP1一个可能的活性中心位点第594位组氨酸突变为丙氨酸,并纯化了此突变型的单体和复合体。应用底物Di-Ub/Ub2 WT Chains(K63-linked)及Di-Ub/Ub2 WT Chains(K48-linked)对chUSP1GG680,681AA和突变型chUSP1HGG594,680,681AA进行酶活性分析。试验结果表明chUSP1具有切割Ub链底物的酶活性,且第594位组氨酸残基突变影响chUSP1的去泛素化酶活性。而chUAF1可以与chUSP1相互作用形成复合体,并且明显提高chUSP1酶活性。