不同病毒逃逸OAS/RNase L通路抗病毒作用机制的研究进展

2'-5'寡聚腺苷酸合成酶/RNA酶L(OAS/RNase L)通路是先天性免疫系统的重要组成之一,在抑制病毒增殖和诱导细胞凋亡方面发挥重要作用。OAS/RNase L系统对西尼罗病毒、轮状病毒和骨髓灰质炎病毒等多种病毒具有拮抗作用。但随着研究的不断深入,多种病毒已被发现会通过各自独特的逃逸机制抵抗OAS/RNase L通路的抗病毒作用。作为最早发现的抗病毒通路之一,OAS蛋白家族各成员和RNase L抗病毒作用机制已经有很多综述报道。不同病毒对OAS/RNase L通路抗病毒作用的逃逸机制均不相同,其中甲型流感病毒和牛痘病毒等通过阻遏OAS激活的方式逃逸OAS/RNase L通路的抗病毒作用,轮状病毒和小鼠肝炎病毒等通过降解2',5'寡聚腺苷酸(2-5A)的方式逃逸OAS/RNase L通路的抗病毒作用,丙型肝炎病毒和骨髓灰质炎病毒等则通过抑制RNase L活性的方式逃逸OAS/RNase L通路的抗病毒作用。现对多种病毒同宿主抗病毒通路相互作用机制进行综述,分析OAS/RNase L通路在天然免疫抗病毒作用中的重要性,同时为抗病毒治疗提供新的思路。

含缬酪肽蛋白促进单链RNA和双链DNA病毒复制或释放机制的研究进展

含缬酪肽蛋白(VCP)作为一种具有广泛功能的ATPase,在哺乳动物细胞内质网相关降解和泛素-蛋白酶体途径中发挥重要功能。VCP不仅参与真核细胞核酸的重建、膜损伤和细胞周期调控等生命活动,还在病毒对宿主细胞的感染、复制和释放过程中发挥调控作用。VCP能够促进西尼罗河病毒(WNV)、丙型肝炎病毒(HCV)、脊髓灰质炎病毒(PV)、肠道病毒71型(EV71)、冠状病毒(CoV)、基孔肯雅病毒(CHIKV)、辛德毕斯病毒(SINV)和裂谷热病毒等单链RNA病毒的复制或释放,还能促进加州苜蓿多核核型多角体病毒(AcMNPV)和人类巨细胞病毒(HCMV)等双链DNA病毒的复制。VCP通过其ATPase酶活性及参与的内质网相关降解(ERAD)和泛素-蛋白酶体等途径促进单链RNA和双链DNA病毒的复制或释放。现从VCP促进多种单股正链RNA、双链DNA病毒的复制和病毒粒子释放等3个方面综述近年来VCP同病毒感染相关的研究进展,为抗病毒治疗提供新的思路。

土槿皮乙酸B增加活性氧水平诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡和衰老的研究

本研究旨在研究土槿皮乙酸B(PAB)诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡和衰老与活性氧的关系。在相差显微镜下观察4μmol/L PAB在36 h诱导细胞凋亡小体的出现;LDH方法显示PAB时间依赖性的增加凋亡比率;SA-β-半乳糖苷酶显示4μmol/L PAB作用3 d后,去药再作用5 d,96%的细胞蓝染,细胞变大且扁平;流式细胞仪检测用DCFH-DA染色后4μmol/L PAB时间依赖性增加细胞内活性氧水平。所以4μmol/L PAB通过增加细胞内活性氧水平促进细胞凋亡和衰老。

包膜蛋白在痘苗病毒形态发生过程中作用的研究进展

痘苗病毒(vaccinia virus,VACV)是正痘病毒属(Orthopoxvirus)成员之一,具有正痘病毒的典型特征,可作为该种属的模式病毒应用于各类研究中。VACV基因组大小约为200000 bp,包含1个高度保守的中心编码序列(central coding region sequence,CRS)区域,可编码病毒形态发生各时期的关键蛋白,其中与形态发生相关的主要包膜蛋白A13L、A17L、A27L、A28L和A36R在VACV形态发生过程中发挥重要作用。本文就包膜蛋白在VACV膜附着和膜融合、病毒粒子组装、成熟病毒粒子(intracellular mature virus,IMV)胞内运动、细胞外囊膜病毒(extracellular enveloped virus,EEV)在细胞间传播等形态发生过程中作用的研究进展作一综述,以期为进一步探讨VACV及其他正痘病毒[如猴痘病毒(monkeypox virus,MPXV)]的致病机理、研发抗病毒药物及有效预防病毒感染提供理论依据。

土槿皮乙酸抗肝癌机制研究

目的:在细胞水平研究土槿皮乙酸(PAB)抗人肝癌细胞(Hep G2)的机制。方法:以4μmol·L-1PAB分别处理12、24、36、48 h后,通过细胞计数法确定PAB的抑制率;通过细胞形态学观察确定PAB是否诱导细胞死亡;划痕实验观察PAB对肝癌细胞转移的影响;荧光染色法检测PAB处理后Hep G2细胞中微管聚集情况;Realtime PCR检测PAB对P53基因转录的影响;Western blot检测相关蛋白表达。结果:PAB时间依赖性地抑制Hep G2细胞的生长,并且诱导Hep G2细胞的死亡;有效降低肝癌细胞的转移;促进细胞骨架蛋白聚集;降低P53基因转录,并调控P53蛋白和P27蛋白表达。结论:PAB对体外培养的Hep G2细胞生长有明显的抑制作用,并且通过调控微管分布来抑制细胞转移。

检测水痘-带状疱疹病毒糖蛋白水平双抗体夹心ELISA法的建立和验证

目的:建立可快速检测水痘-带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白抗原水平的双抗体夹心ELISA法,并验证其特异性、线性、准确性和精密性。方法:采用抗VZV糖蛋白基因工程抗体建立双抗体夹心ELISA法,检测VZV糖蛋白抗原水平。优化抗体组合、抗体工作浓度、包被条件、封闭条件、酶标抗体反应条件和显色条件,并对建立的方法进行特异性、线性、准确性及精密性验证。结果:捕获抗体VZV-mAb-03和酶标抗体VZV-mAb-HRP-02的组合为最优双抗组合,其最适浓度分别为450.0和0.1μg·L^-1,最适包被条件为0.05 mol·L^-1 Tris-HCl(pH值为8.7±0.1)在4℃条件下包被过夜(18 h),最适封闭条件为1%牛血清白蛋白(BSA)在37℃条件下封闭2 h,最适样品稀释液为磷酸盐吐温缓冲液(PBST),抗原夹心与酶标抗体最适反应条件均为37℃、1 h,最适显色条件为37℃、15 min。经验证,该方法与其他人用疫苗及辅料成分无交叉反应;线性范围为500~2600 PFU·mL^-1,回归系数(R2)>0.95;批内回收率82.2%~115.7%,变异系数(CV)<10.2%;批间回收率80.5%~118.6%,板内CV<17.4%,板间CV<14.9%。结论:建立了一种基于检测双抗体夹心的VZV糖蛋白抗原水平的ELISA检测方法,符合定量检测需要,可用于VZV疫苗的研发和生产过程中的抗原水平检测。

土槿皮乙酸B通过活性氧和有丝分裂原蛋白激酶诱导MCF-7细胞凋亡的研究

土槿皮乙酸B(PAB)通过活性氧诱导肿瘤细胞MCF-7凋亡,同时也通过调控有丝分裂原蛋白激酶(MAPK)家族蛋白来调控凋亡,但活性氧和MAPK的关系还不清楚,本研究探讨活性氧和MAPK家族蛋白的关系。4μmol/L PAB在36h诱导细胞死亡,活性氧清除剂抑制PAB的作用,并降低PAB的抑制率;同时,PAB促进JNK磷酸化,抑制ERK的磷酸化,此作用被活性氧清除剂抑制。

人骨髓基质干细胞抗原2在肿瘤发生发展中作用的研究进展

人骨髓基质干细胞抗原2(BST-2)是一种干扰素诱导的跨膜蛋白,最早作为B细胞终末分化的标记物而被发现,之后被鉴定为重要的可对抗艾滋病病毒(HIV)等包膜病毒的天然抗病毒因子。临床病理学分析、统计学数据和体内外实验研究表明BST-2同时具有促进肿瘤发生发展的能力。BST-2蛋白在乳腺癌、肺癌和鼻咽癌等多种癌症组织中高表达,其表达水平与患者生存期有关联。BST-2可促进癌细胞的迁移和侵袭,影响肿瘤的发生发展。BST-2促肿瘤进程的分子机制包括调控细胞DNA甲基化形式、对转化生长因子(TGF-β)的负调控作用、对细胞因子的诱导作用、对核因子κB(NF-κB)信号通路的激活以及促抗凋亡基因的表达等途径。破坏BST-2的分子结构、阻断其表达以及BST-2中和抗体的使用等已经在癌症治疗上体现出巨大价值。现综述BST-2对乳腺癌、肺癌、胃肠癌和鼻咽癌等不同癌症发生发展的影响,同时归纳其表达、转录后修饰及参与信号通路对其调控肿瘤发生发展的不同分子机制,揭示其作为肿瘤治疗潜在靶标的可能性。

阿龙山病毒感染者肝功能和凝血功能临床特点分析

目的分析阿龙山病毒(ALSV)感染者肝功能和凝血功能临床特点。方法收集2018年5月-2019年9月内蒙古林业总医院收治的27例ALSV感染者的临床资料,其中男18例,女9例。提取、建立相关病例报告数据库,用描述性流行病学方法分析其肝功能和凝血指标的临床特征,分析ALSV感染引起的肝功能损伤特点。结果27例患者中ALT、AST、ALP、GGT、CHE、TBA的异常率分别是25.9%、33.3%、25.9%、40.7%、8%、8%,其水平超过2倍正常值上限的分别为ALT 4例(14.8%)、AST 3例(11.1%)、ALP 1例(3.7%)和GGT 5例(18.5%),27例患者中有胆红素检查结果的患者25例(男17例,女8例),其中1例TBil水平下降,为3.30μmol/L,3例TBil水平升高,分别为23.7、26.2和32.0μmol/L。凝血指标的国际标准化比值、部分凝血活酶、纤维蛋白原异常率分别为3.7%、11.1%和22.2%。结论ALSV感染者中有一定程度的肝损伤,但一般症状较轻。

艾滋病治疗面临的挑战和进展

自1981年首个艾滋病病例被发现以来,因其流行与传播的严峻形势,已成为威胁人类的全球性战略问题.1987年联合国将艾滋病的预防与控制确定为全球卫生战略目标;1996年,联合国成立了艾滋病联合规划署,是至今其附属的唯一与人类疾病相关的实体机构.目前全球艾滋病死亡人数达3900万人,仅2016年全球新增患病人数210万,新增死亡人数110万.在我国,根据中国疾病预防控制中心2016年数据统计,艾滋病在法定传染病中死亡人数比例高达77.26％,是对人类危害最严重的疾病之一.

宿主抗病毒因子BST-2抑制HBV释放的研究进展

BST-2(Bone marrow stromal antigen 2,BST-2)一种宿主内天然抗病毒因子,自2008年首次报道其具有抗人类免疫缺陷病毒(HIV-1)释放的功能,一直认为BST-2主要在细胞膜上限制病毒释放。最近发现BST-2对在细胞内部组装的乙型肝炎病毒(HBV),同样具有抑制作用,扩大了BST-2抗病毒作用的范围。并且BST-2在多囊泡体(MVB)中抑制HBV的释放与抑制HIV-1在细胞膜中释放的作用机制相似。同时发现HBV能够拮抗BST-2的限制作用,而HBV病毒中发挥作用的拮抗因子,目前有两个观点,一是HBV在肝细胞的特定条件下利用调节蛋白HBx拮抗BST-2的限制作用,另一观点认为包膜蛋白HBs对BST-2存在拮抗作用。本文重点概述和讨论了BST-2限制HBV病毒的最新研究进展。

长链非编码RNA在病毒与宿主相互作用中功能的研究进展

长链非编码RNA(long non-coding RNA,IncRNA)在细胞生命活动中扮演着重要的角色,在病毒与宿主相互作用中也发挥多种调控作用。病毒的感染能诱导细胞内多种IncRNA的差异表达,而差异表达的IncRNA又可通过各种方式来对侵染的病毒起到或抑制或协助的作用。本文主要列举了不同种类的病毒所诱导的差异表达的IncRNA,以及病毒与这些IncRNA之间的相互作用机制。

宿主抗病毒因子BST-2／tetherin的免疫学功能研究进展

人体具有多种固有免疫机制，其中一类具有抗病毒作用的蛋白质叫作宿主限制因子，在病毒复制周期的各阶段抵抗病毒，而病毒通常具有相应的拮抗机制对抗宿主限制因子的抑制作用。目前发现的HIV-1宿主限制因子包括：在病毒逆转录过程中导致致死突变的 APOBEC3（ apolipoprotein B mRNA-editing catalytic polypeptide like 3）家族［1］；抑制病毒核衣壳解聚的TRIM5α（ the α-isoform of the tripartite motif-con-taining protein 5）［2］；降解dNTPs抑制病毒逆转录的SAMHD1（SAM domain and HD domain-containing protein 1）［3］；抑制病毒基因组入核的MX2（ myxovirus resistance gene 2）［4］；将新生病毒阻滞在细胞膜上的BST-2（ bone marrow stromal cell anti-gen 2）／tetherin［5-6］。

SERINC家族蛋白抗病毒作用的研究进展

丝氨酸整合因子（serine incorporator，SERINC）是一种多跨膜的载体蛋白家族，在物种间具有高度保守性，能够帮助丝氨酸（serine）整合到脂质双分子层中，从而有效地合成磷脂酰丝氨酸（phosphatidylserine，PS）和鞘脂（sphingolipids）。最近研究发现，SERINC蛋白家族，尤其是SERINC3和SERINC5，可作用于多种病毒，如引起艾滋病的人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV），抑制病毒的复制和增殖，达到抗病毒作用。病毒与宿主细胞相互作用机制的研究一直是领域内的研究热点，其具有重要的科学意义。本研究就SERINC蛋白家族的结构特点、主要生物学功能，以及在抗病毒过程中与病毒相互作用进行总结，以期为宿主与病毒相互作用相关研究提供重要信息。

人类鸟苷酸结合蛋白抗病毒机制研究进展

人类鸟苷酸结合蛋白(Human guanylate binding proteins,hGBPs)是一种干扰素诱导型细胞因子,属于鸟苷酸结合蛋白家族(Guanosine triphosphatases,GTPases)。GBPs能够介导经典与非经典炎症激活途径,诱导先天性和适应性免疫应答,还可以诱导自噬和控制囊泡运输,在宿主抵御细菌、病毒和其他病原微生物时发挥重要作用。本文主要介绍了hGBPs的发现和结构,并对7种hGBPs的抗病毒机制进行概述。

柯萨奇病毒A组16型感染性滴度检测用国家参考品的制备及标定

目的 制备柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus A16,CA16）感染性滴度检测用国家参考品,为CA16疫苗生产过程中的病毒滴度控制和CA16疫苗的免疫效果评价提供国家参考品.方法 将验证合格的CA16（C1亚型）培养液分装（0.5 ml/支）制成候选参考品.3个独立实验室分别对候选参考品进行协作标定,用细胞培养法检测CA16感染性滴度,用Behrens-K（a）rber法计算半数细胞感染量（50％ cell culture infective does,CCID50）.同时,将CA16参考品分别置于-20、4、22～25（室温）和37℃条件下或反复冻融,进行热稳定性、长期稳定性和冻存稳定性研究.结果 制备的CA16参考品的病毒滴度为（6.80±0.95） lgCCID50/ml.CA16参考品于-60℃保存12个月、-20℃保存6个月和4℃保存28 d后的病毒滴度无显著下降,表明稳定性较好;在22～25℃（室温）和37℃条件下,CA16参考品每天的病毒滴度损失率分别为3.4％和4.4％,而且分别保存27和21 d后病毒滴度无明显下降;对CA16参考品反复冻融的病毒滴度损失率为4.8％/次.结论 成功制备了CA16感染性滴度检测用候选国家参考品,将CA16参考品赋值确定为（6.80±0.95） lgCCID50/ml.

科学基金资助RNA病毒相关项目统计分析

国家自然科学基金资助RNA病毒相关基础研究,主要包括病毒溯源、结构与功能、遗传与演化、以及与宿主相互作用等方面,以揭示病毒产生、传播与致病的物质基础与作用机制,为相关疾病的诊断、预防和治疗提供理论基础。本文主要从项目类型、资助经费、人才培养、资助成果等方面,统计了国家自然科学基金RNA病毒相关获资助项目情况,分析本领域项目资助存在的问题,尝试提出未来发展建议。

SOCS家族蛋白在病毒感染中发挥的作用

SOCS(Suppressor of cytokine signaling),是一种细胞因子信号通路抑制蛋白,目前认为该蛋白家族可以调节LIF(Leukemia inhibitory factor)、G-CSF(Granulocyte colony-stimulating factor)、IL-6(Interleukin-6)、IL-10(Interleukin-10)、IFN-λ(interferon-λ)等30多种细胞因子,而这些因子是机体抵抗入侵的外来病原体的主要免疫防御反应。病毒在感染宿主的过程中通过劫持宿主中的SOCS蛋白,从而对细胞中的JAK/STAT、NF-κB等与抗病毒因子调控相关的信号通路以及对T细胞的分化的调控调节病毒感染。近年来,大量的文献证实SOCS蛋白的变化与病毒感染的程度以及愈后的器官损伤具有紧密的联系,使得SOCS蛋白作为抗病毒靶点的研究尤为重要。本文主要讨论SOCS蛋白通过调控JAK-STAT、NF-κB等信号通路,在病毒感染过程中发挥的作用和作用机制。

狂犬病病毒滴度直接免疫荧光检测法的建立及验证

目的建立狂犬病病毒滴度的直接免疫荧光检测法,并进行验证。方法将狂犬病病毒Pitman-Moore株(PM株)病毒液进行5倍系列稀释后,感染MRC-5细胞,37℃培养24~30 h;用FITC标记的抗狂犬病病毒特异性抗体进行染色,通过计数病毒感染细胞的荧光灶数计算病毒滴度,并验证方法的重复性、中间精密度及线性范围。采用小鼠脑内滴定法及建立的直接免疫荧光法同时检测20批PM株病毒液,并分析两者间的相关性。结果重复性及中间精密度验证结果的变异系数(CV)均﹤2%;病毒稀释倍数在5^(0)~5^(-7)范围内,与病毒滴度呈良好的线性关系,线性回归方程为Y=-0.7392 X+8.031,R^(2)=0.9866。两种方法检测结果趋势相同(R-Square=0.905),呈良好的正相关性。结论本实验建立了狂犬病病毒滴度的直接免疫荧光检测法,且具有良好的重复性及中间精密度,可应用于狂犬病疫苗生产过程中的质量控制。

基于分子网络模型的中药调控骨重建的评价方法

中医药在防治骨质疏松方面具有明显优势和特色。许多抗骨质疏松中药能够对骨质疏松的关键病理环节——骨重建发挥多方面的整合调节。研究揭示中药调控骨重建的多成分、多靶点、整合作用机制,有待探索新的研究模式和方法。本文从骨重建的骨形成途径、骨吸收途径以及它们之间的相互作用角度,分析骨重建的发生发展过程,探讨体外构建骨重建的生物网络、疾病网络模型,进而构建成分—靶点网络模型,为中药调控骨重建研究提供新思路。通过建立中药成分—靶点对接的方法,阐明中药调控骨重建的多靶点作用机制,为抗骨质疏松中药的多靶点整合机理研究提供方法借鉴。