穿心莲内酯对人肾细胞癌786-0细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的:研究穿心莲内酯(Andro)对肾细胞癌(RCC)786-0细胞的增殖、迁移和克隆形成能力的抑制作用及诱导其程序性凋亡的作用,并探讨其相关作用机制。方法:取对数生长期786-0细胞,加入不同浓度(5、10、20、40和80μmol·L-1)Andro作为实验组,以0μmol·L-1 Andro组作为空白对照组,MTS法检测各组细胞增殖率。取对数生长期786-0细胞,加入不同浓度(0.50、1.25和2.50μmol·L-1)Andro作为实验组,以0μmol·L-1 Andro组作为空白对照组,采用克隆形成实验检测各组细胞克隆形成能力。取对数生长期786-0细胞,加入不同浓度(10、20和40μmol·L-1)Andro作为实验组,以0μmol·L-1 Andro组作为空白对照组,采用划痕实验检测各组细胞迁移能力,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中凋亡相关蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,10、20、40和80μmol·L-1 Andro组细胞增殖率明显降低(P<0.05或P<0.01)。与空白对照组比较,0.50和1.25μmol·L-1 Andro组细胞克隆形成率明显降低(P<0.05或P<0.01)。与空白对照组比较,10、20和40μmol·L-1 Andro组细胞划痕愈合率均明显降低(P<0.01),20和40μmol·L-1 Andro组细胞凋亡率均明显升高(P<0.01)。与空白对照组比较,40μmol·L-1 Andro组细胞中DNA损伤蛋白γ-H2AX表达水平明显升高(P<0.01),Caspase-8表达水平明显降低(P<0.05),Caspase-8剪切体表达水平明显升高(P<0.01)。结论:Andro能够有效地抑制RCC细胞的增殖、迁移和克隆形成能力,并诱导其凋亡,其诱导凋亡作用的机制与诱导DNA损伤及JNK/H2AX和Caspase-8介导的细胞程序性凋亡途径有关。

灵长类动物限制性因子SAMHD1的生物学功能分析

目的:探讨不同灵长类动物限制因子不育-α-基序结构域和组氨酸/天冬氨酸残基双联体结构域包涵蛋白1 (SAMHD1)的抗病毒、抑制逆转录转座子LINE-1和减弱干扰素(IFN)产生信号通路等作用,为灵长类动物SAMHD1的研究提供依据。方法:构建稳定表达不同灵长类动物SAMHD1蛋白的U937细胞系,以空载体构建的细胞作为阴性对照组,以稳定表达不同灵长类动物SAMHD1蛋白的U937细胞系为实验组。经佛波酯(PMA)刺激分化成巨噬样细胞后,流式细胞术分析各组HIV-1病毒感染率。以单独转染SAMHD1表达质粒的HEK293T细胞为对照组,共同转染SAMHD1与HIV-2/SIV Vpx表达质粒的细胞为实验组,转染后48h收获细胞,采用Western blotting法检测SAMHD1蛋白表达水平,免疫荧光检测法观察不同SAMHD1蛋白的细胞内定位。以单独转染LINE-1-GFP报告质粒的HEK293T细胞作为对照组,以共同转染LINE-1-GFP与SAMHD1表达质粒的细胞为实验组,采用流式细胞术检测GFP阳性细胞率,代表SAMHD1对LINE-1转座子的活性。以单独转染IFN-luc报告质粒的HEK293T细胞为对照组,共同转染IFN-luc和SAMHD1表达质粒的细胞为实验组,采用化学发光仪检测HEK293T细胞中荧光素酶的表达水平。结果:与阴性对照组比较,灵长类动物SAMHD1稳定表达的实验组HIV-1病毒感染率明显降低(P<0.01)。与对照组比较,实验组灵长类动物SAMHD1蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。免疫荧光检测,灵长类动物SAMHD1蛋白均定位于细胞核中。与对照组比较,实验组GFP阳性细胞率明显降低,即SAMHD1对LINE-1转座子活性降低(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,实验组灵长类动物HEK293T细胞中荧光素酶表达水平明显降低(P<0.05)。结论:不同灵长类动物SAMHD1蛋白具有抵抗HIV-1病毒感染、抑制逆转录转座子LINE-1以及拮抗天然免疫系统产生IFN的作用。

Ⅰ型人免疫缺陷病毒调控蛋白顺式转录激活因子的功能及其与疾病的相关性

获得性免疫缺陷综合征(acquired immune deficiency syndrome,AIDS),又称艾滋病,一直是全球范围内公共卫生关注的重大传染病之一。Ⅰ型人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)是导致AIDS的病原体,即使目前广泛采用的高效抗逆转录病毒疗法(鸡尾酒疗法)可有效抑制HIV-1的感染和复制,感染者依然会罹患其他疾病,如HIV-1相关的神经认知紊乱症(HIV-associated neurocognitive disorder,HAND)。本文主要探讨HIV-1中重要的调控蛋白顺式转录激活因子(trans-activator of transcription,Tat)的功能,以及其与HIV-1复制及HAND的相关性,以明确研发靶向Tat蛋白的抗AIDS药物的重要性。

病毒蛋白调控逆转录元件Ⅰ型长弥散核元件活性的影响及其意义

型长弥散核元件(long interspersed element-1,LINE-1)是已知人类细胞中唯一具有活性的、可自主转座的逆转录元件(retroelements),与自身免疫性疾病相关,对细胞的抗病毒天然免疫,特别是对细胞干扰素(interferon,IFN)水平起到重要的激活、调控作用。本文阐述了包括人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)、乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)等病毒的几种非结构蛋白参与调控LINE-1活性的机制。这些机制既保证了病毒基因组的正常表达,又参与调控细胞天然免疫水平,对相关机制的抑制可能为治疗病毒感染引起的疾病提供新的方法。