人类肠道病毒的研究进展

自1908年脊髓灰质炎病毒被鉴定以来,已发现超百种肠道病毒致病血清型,可引起手足口病、新生儿败血症样疾病、无菌性脑炎、急性弛缓性脊髓炎、呼吸系统疾病、急性出血性结膜炎等多种疾病。近年来,诸如EV-A71和EVD68等肠道病毒趋于全球化周期性流行,已成为公共卫生领域不可忽视的重要挑战之一。然而,当前针对肠道病毒的防控手段仍然非常有限,迫切需要深入探究肠道病毒致病的分子机制,为开发高效、安全、广谱的抗肠道病毒药物提供新靶点与新思路。本文通过对肠道病毒的分类、流行病学、结构、生命周期、病毒蛋白与宿主因子相互作用、并发症致病机制与临床治疗以及动物感染模型的确立与应用等方面进行系统的综述,旨在为肠道病毒防治提供理论参考依据,为肠道病毒的药物研发与疫苗储备库建设提供新的思路。

Th9细胞与肿瘤免疫的研究进展

CD4＋辅助性T细胞（Th）是重要的效应细胞,通过分泌特异性的细胞因子调节免疫应答。不同的Th细胞亚群由不同的抗原刺激,在特定的细胞因子环境下分化发育,在调控免疫应答和维持免疫平衡中发挥重要作用。除传统的Th1和Th2细胞外,最近发现了许多新的亚群,如Th9、Th17、Th22和滤泡辅助性T细胞（TFH）等。

靶向肿瘤相关巨噬细胞的肿瘤治疗研究进展

肿瘤相关巨噬细胞(TAM)是肿瘤微环境的重要组成成分,是一个具有高度可塑性的异质性群体。TAM在肿瘤的发生、发展中起重要作用,是极具吸引力的肿瘤免疫治疗靶标。靶向TAM的肿瘤免疫治疗是近年肿瘤研究的热点之一。目前在针对TAM的肿瘤免疫治疗策略方面,包括清除TAM和抑制TAM的促肿瘤功能等,已取得显著进展。本文将对这些研究加以综述。

纳米药物在肿瘤免疫治疗与移植免疫耐受中的研究进展

随着近年来科技的发展,纳米技术已经广泛应用于医学、药学和生物学等领域,特别是纳米药物在多种疾病的诊断和治疗中发挥了重要作用。纳米药物是指以纳米颗粒作为药物载体,其直径大小在10~1 000 nm范围内,多由天然或合成高分子材料制成。纳米药物通过将药物分子包裹在其中或吸附在表面实现高效地携载包括小分子药物、多肽、

利用NOD小鼠构建I型糖尿病模型的研究进展

I型糖尿病（Type I diabetes,TID）是由遗传因素和环境因素共同介导产生的自身免疫性疾病,以自体激活的T淋巴细胞对分泌胰岛素的胰岛β细胞的进行性破坏为特征,最终导致胰岛素不足、血糖调节异常、持续高血糖状态和相关并发症出现,是一种复杂的代谢性疾病。流行病学研究表明,TID占糖尿病患者总数的10%左右,每年全球增长率约为3%。

免疫检查点在肿瘤微环境中对DC成熟和功能调控的研究进展

树突状细胞(DC)是体内功能强大的抗原提呈细胞(APC),在机体抗肿瘤免疫反应的过程中起着关键的作用。成熟DC具有激活T淋巴细胞并激活抗肿瘤免疫反应的功能,以DC为基础的抗肿瘤免疫疗法显示出良好的应用前景。免疫检查点疗法是肿瘤免疫治疗的另一强有力手段,以PD-1和CTLA-4为代表的免疫检查点分子在肿瘤微环境中起着免疫调节的作用,同时也对DC的成熟和功能起着重要的调控作用。肿瘤微环境中的未成熟DC和免疫检查点分子是肿瘤免疫逃逸的重要因素。因此探究免疫检查点分子对DC成熟及功能的调控机制对于抗肿瘤治疗的研究具有非常重要的意义。本文从DC的视角,阐述了肿瘤微环境中免疫检查点分子对DC成熟及功能的调控机制以及免疫检查点靶向药物联合DC疫苗应用于肿瘤临床实验的最新研究进展。

支气管哮喘患儿血清骨膜蛋白水平变化及其意义

目的:探讨支气管哮喘患儿血清中骨膜蛋白水平的变化,阐明其在哮喘中的作用。方法:随机选取支气管哮喘患儿65例作为观察组,健康儿童50人作为对照组,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测受试者外周血中骨膜蛋白、IgE和嗜酸细胞阳离子蛋白(ECP)水平及嗜酸性粒细胞计数,并检测呼出气一氧化氮(FeNO)、一秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV1%pred)、用力肺活量(FVC)和FEV1/FVC比值。结果:与对照组比较,观察组患儿外周血中骨膜蛋白、IgE和ECP水平、嗜酸性粒细胞计数和FeNO均明显升高(P<0.05),FEV1%pred和FEV1/FVC比值均明显降低(P<0.05);采用血清骨膜蛋白水平诊断哮喘,受试者工作特征曲线(ROC曲线)下面积(AUC)为0.668(P=0.02),骨膜蛋白水平诊断哮喘界点为80.89μg·L^(-1)(95%CI:0.570~0.766),灵敏度为29.23%,特异度为92.00%;骨膜蛋白水平与嗜酸性粒细胞计数和FeNO呈正相关关系(r=0.519,P=0.019;r=0.602,P=0.008)。结论:哮喘患儿血清中骨膜蛋白水平升高,骨膜蛋白可以作为初步排查儿童哮喘的指标,抑制Th2介导的炎性反应过程是治疗哮喘的靶点。

卵清蛋白诱导的兔类风湿关节炎模型的建立及评估

目的建立并评估卵清蛋白(OVA)诱导的兔类风湿关节炎(RA)模型。方法于家兔肩胛间区的5个部位进行皮下注射OVA,每周1次,连续3 w,对RA组进行致敏,注射2 w后,在兔双侧关节腔内注射OVA建立RA模型。对照组以同样方法注射等量的生理盐水。建模后每周分别用千分游标卡尺和电子体温计测量关节直径和关节表面皮肤温度;第1、4、8周采用ELISA试剂盒检测各组家兔外周血清中的IL-1、TNF-α和抗OVA IgG水平;于建模后第1、4、8周处死家兔,取腹股沟淋巴结,用不同浓度OVA刺激淋巴细胞增殖,检测淋巴细胞对特异性抗原的反应;HE染色观察膝关节滑膜增生、软骨破坏程度及缺损周围组织炎性细胞浸润情况。结果 RA组家兔关节腔注射OVA后1 w,关节直径明显增大,表面皮肤温度明显升高,随后逐渐降低至稳定的水平,但仍明显高于对照组;在关节腔注射抗原后第1、4、8周,RA组血清中IL-1、TNF-α和抗OVA IgG水平较对照组均显著升高(P<0.01);RA组淋巴细胞增殖实验与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);RA组家兔关节滑膜大量增生,第8周时软骨破坏明显;组织切片可见滑膜组织大量增生,炎症细胞浸润,软骨层破坏。结论 OVA诱导的兔RA模型能够很好地模拟人RA病理过程,可成为研究RA的理想的动物模型。

大规模新型冠状病毒核酸检测需求下城市检测基地的流程设计及改进

新型冠状病毒(简称“新冠病毒”)肺炎疫情发生以来,党中央、国务院多次对提高病毒核酸检测能力做出明确指示和战略部署。2021年1月21日,国务院联防联控机制综合组吉林工作组和吉林省卫生健康委员会紧急抽调经验丰富的检验人员,赴通化地区协助检测基地60名检验人员开展大规模人群筛查。本文总结了大规模新冠病毒核酸检测工作中,城市检测基地的仪器配置、人员配置及工作流程设计思路,为国内其他城市检测基地在可能出现的突发公共卫生事件下进行大规模核酸筛查提供参考。

穿心莲内酯对人肾细胞癌786-0细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的:研究穿心莲内酯(Andro)对肾细胞癌(RCC)786-0细胞的增殖、迁移和克隆形成能力的抑制作用及诱导其程序性凋亡的作用,并探讨其相关作用机制。方法:取对数生长期786-0细胞,加入不同浓度(5、10、20、40和80μmol·L-1)Andro作为实验组,以0μmol·L-1 Andro组作为空白对照组,MTS法检测各组细胞增殖率。取对数生长期786-0细胞,加入不同浓度(0.50、1.25和2.50μmol·L-1)Andro作为实验组,以0μmol·L-1 Andro组作为空白对照组,采用克隆形成实验检测各组细胞克隆形成能力。取对数生长期786-0细胞,加入不同浓度(10、20和40μmol·L-1)Andro作为实验组,以0μmol·L-1 Andro组作为空白对照组,采用划痕实验检测各组细胞迁移能力,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中凋亡相关蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,10、20、40和80μmol·L-1 Andro组细胞增殖率明显降低(P<0.05或P<0.01)。与空白对照组比较,0.50和1.25μmol·L-1 Andro组细胞克隆形成率明显降低(P<0.05或P<0.01)。与空白对照组比较,10、20和40μmol·L-1 Andro组细胞划痕愈合率均明显降低(P<0.01),20和40μmol·L-1 Andro组细胞凋亡率均明显升高(P<0.01)。与空白对照组比较,40μmol·L-1 Andro组细胞中DNA损伤蛋白γ-H2AX表达水平明显升高(P<0.01),Caspase-8表达水平明显降低(P<0.05),Caspase-8剪切体表达水平明显升高(P<0.01)。结论:Andro能够有效地抑制RCC细胞的增殖、迁移和克隆形成能力,并诱导其凋亡,其诱导凋亡作用的机制与诱导DNA损伤及JNK/H2AX和Caspase-8介导的细胞程序性凋亡途径有关。

DNA-PKcs协同自身免疫调节因子调控小鼠腹腔巨噬细胞Toll样受体的表达及其意义

目的:探讨小鼠腹腔巨噬细胞内DNA-PKcs协同自身免疫调节因子调控Toll样受体(TLRs)的表达水平,阐明外周免疫系统中自身免疫调节因子的调控作用及其意义。方法:小鼠腹腔巨噬细胞分为pEGFPC1/mAire转染组、pEGFPC1/mAire与negative control siRNA共转染组、pEGFPC1/mAire与DNA-PKcssiRNA共转染组、pEGFPC1转染组、pEGFPC1与negative control siRNA共转染组和pEGFPC1与DNA-PKcssiRNA共转染组,采用RT-PCR方法检测各组小鼠腹腔巨噬细胞内TLR1～9的表达水平;采用脂质体转染重组质粒pEGFPC1/mAire和空载质粒pEGFPC1至小鼠腹腔巨噬细胞,采用RT-qPCR方法检测2组细胞TLR1～9的表达水平;采用RT-qPCR方法检测2组转染细胞沉默DNA-PKcs前后TLRs的表达水平。结果:小鼠腹腔巨噬细胞能表达TLR1～9;与转染pEGFPC1/mAire组细胞比较,转染自身免疫调节因子后巨噬细胞TLR1、3和8的表达水平增加(P<0.05),其他组TLRs表达水平无明显变化(P>0.05);DNA-PKcs沉默后,转染pEGFPC1/mAire组细胞TLR1、3和8的表达水平较未沉默组明显下降(P<0.05),而在转染pEGFPC1的细胞内DNA-PKcs沉默前后TLR1-9表达水平均无明显变化(P>0.05)。结论:在小鼠腹腔巨噬细胞内,自身免疫调节因子能够调控TLR1、3和8的表达,其机制可能与DNA-PKcs协同作用有关。

日本刺沙蚕纤溶酶对局灶性脑缺血大鼠的神经保护作用

目的:观察日本刺沙蚕纤溶酶(NJF)对大鼠局灶性脑缺血的神经保护作用,并探讨其作用机制。方法:60只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、NJF组(0.25、0.50和1.00mg.kg-1)和尿激酶组(UK,15 000U.kg-1),每组10只。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型。术后24h,对大鼠进行神经功能损害评分,TTC染色计算脑梗死范围,湿重干重法测量脑含水量,化学比色法检测大鼠海马组织中丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:与模型组比较,NJF各给药组大鼠神经功能损害评分明显降低(P<0.05);脑梗死范围显著降低(P<0.001),脑含水量下降(P<0.05或P<0.01),且脑缺血海马组织中MDA水平降低(P<0.001),同时SOD活性升高(P<0.05或P<0.01),具有明显的剂量依赖性。NJF0.50mg.kg-1组大鼠脑梗死范围和脑含水量变化与UK 15 000U.kg-1组比较差异无统计学意义。结论:NJF对大鼠缺血再灌注损伤大脑有潜在的神经保护作用,其机制可能与抑制脂质过氧化及提高内源性抗氧化酶活性有关。

替莫唑胺联合丙戊酸钠对人脑胶质瘤细胞生物学行为的影响

目的观察替莫唑胺(TMZ)与丙戊酸钠(VPA)联用对人脑胶质瘤细胞SHG-44和U251生物学行为的影响。方法将细胞分为对照组、VPA单用组、TMZ单用组和VPA-TMZ联用组。分别采用MTT法检测细胞增殖;流式细胞术AnnexinV-FLUOS染色法检测细胞凋亡;DAPI染色法观察凋亡细胞形态学变化;Transwell小室检测细胞侵袭能力。结果 VPA-TMZ联用较TMZ/VPA单独用药,能有效抑制人胶质瘤细胞SHG-44和U251的增殖,促进其凋亡且减弱其侵袭能力。结论 VPA可提高人脑胶质瘤细胞对TMZ的敏感性,为临床合理用药提供参考。

灵长类动物限制性因子SAMHD1的生物学功能分析

目的:探讨不同灵长类动物限制因子不育-α-基序结构域和组氨酸/天冬氨酸残基双联体结构域包涵蛋白1 (SAMHD1)的抗病毒、抑制逆转录转座子LINE-1和减弱干扰素(IFN)产生信号通路等作用,为灵长类动物SAMHD1的研究提供依据。方法:构建稳定表达不同灵长类动物SAMHD1蛋白的U937细胞系,以空载体构建的细胞作为阴性对照组,以稳定表达不同灵长类动物SAMHD1蛋白的U937细胞系为实验组。经佛波酯(PMA)刺激分化成巨噬样细胞后,流式细胞术分析各组HIV-1病毒感染率。以单独转染SAMHD1表达质粒的HEK293T细胞为对照组,共同转染SAMHD1与HIV-2/SIV Vpx表达质粒的细胞为实验组,转染后48h收获细胞,采用Western blotting法检测SAMHD1蛋白表达水平,免疫荧光检测法观察不同SAMHD1蛋白的细胞内定位。以单独转染LINE-1-GFP报告质粒的HEK293T细胞作为对照组,以共同转染LINE-1-GFP与SAMHD1表达质粒的细胞为实验组,采用流式细胞术检测GFP阳性细胞率,代表SAMHD1对LINE-1转座子的活性。以单独转染IFN-luc报告质粒的HEK293T细胞为对照组,共同转染IFN-luc和SAMHD1表达质粒的细胞为实验组,采用化学发光仪检测HEK293T细胞中荧光素酶的表达水平。结果:与阴性对照组比较,灵长类动物SAMHD1稳定表达的实验组HIV-1病毒感染率明显降低(P<0.01)。与对照组比较,实验组灵长类动物SAMHD1蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。免疫荧光检测,灵长类动物SAMHD1蛋白均定位于细胞核中。与对照组比较,实验组GFP阳性细胞率明显降低,即SAMHD1对LINE-1转座子活性降低(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,实验组灵长类动物HEK293T细胞中荧光素酶表达水平明显降低(P<0.05)。结论:不同灵长类动物SAMHD1蛋白具有抵抗HIV-1病毒感染、抑制逆转录转座子LINE-1以及拮抗天然免疫系统产生IFN的作用。

探索静水高压在研制黑色素瘤疫苗方面的应用

目的:探索静水高压在研制黑色素瘤疫苗方面的应用。方法:使用静水高压、液氮反复冻融两种方式破碎鼠源性B16黑色素瘤细胞。将破碎后的细胞悬液与弗氏佐剂混合后制成疫苗用于免疫小鼠,免疫完成后,行尾静脉注射与皮下注射接种肿瘤。通过比较每组小鼠生存时间、皮下肿瘤体积大小、DTH实验、小鼠体内肿瘤荧光成像来比较每种疫苗的免疫效果。结果:相比于液氮冻融及对照组,静水高压组小鼠生存时间长,皮下肿瘤体积小,DTH实验与肿瘤荧光成像均有明显差别。结论:静水高压破碎细胞相比于液氮反复冻融破碎在研制肿瘤疫苗方面有优势。

PRPS2表达特点及其与乳腺癌预后关系的生物信息学分析

目的:研究磷酸核糖焦磷酸合成酶2(PRPS2)在不同亚型乳腺癌中的表达及其与乳腺癌预后关系。方法:采用GEPIA数据库研究泛乳腺癌和正常乳腺组织中PRPS2 mRNA表达水平;使用UALCAN数据库基于患者年龄、是否绝经、乳腺癌不同分子亚型、不同组织亚型、病理分级和是否存在淋巴结转移等层面分析PRPS2在乳腺癌和正常乳腺组织中的表达;采用miRTarBase数据库预测与PRPS23'UTR结合的miRNAs。应用Kaplan-Meierplotter数据库研究与PRPS2和PRPS23'UTR结合的miRNAs与乳腺癌预后的关系。结果:与正常乳腺组织比较,在不同亚型乳腺癌组织中PRPS2 mRNA表达水平明显升高(P<0.05);PRPS2 mRNA表达水平越高,乳腺癌患者的生存期越短。与正常乳腺组织比较,在不同亚型乳腺癌中PRPS23'UTR结合的hsa-miR-215-5p和hsa-miR-26b-5p表达水平均明显降低(P<0.05),hsa-miR-215和hsa-miR-26b表达水平越低,乳腺癌患者的生存期越短。结论:PRPS2具有泛乳腺癌特征性基因表达特点,乳腺癌中可能存在miR-PRPS2-乳腺癌预后的调控轴。

CD47敲除对小鼠颅脑创伤后血管生成的影响及其分子机制

目的:研究整合素相关蛋白(IAP)CD47敲除对小鼠颅脑创伤(TBI)后血管生成的影响,阐明其可能的分子机制。方法:体内实验,采用液压颅脑打击仪制备成年C57BL/6小鼠TBI模型,将小鼠随机分为假手术组和TBI组。TBI后24 h取小鼠脑组织测定脑组织含水量,采用伊文思蓝(EB)注射法检测小鼠血脑屏障通透性(即EB水平),HE染色观察小鼠脑组织病理形态表现,免疫荧光染色法检测小鼠脑组织中血管内皮细胞生长因子受体1(VEGFR1)和血小板-内皮细胞黏附分子CD31蛋白表达水平。体外实验,选用CD47敲除同时内源性表达绿色荧光蛋白(GFP)的C57BL/6小鼠(CD47KO-GFP组)和野生型C57BL/6小鼠(野生型组),采用液压颅脑打击仪分别制备TBI模型,分离脑组织中微血管内皮细胞,并混合培养,荧光显微镜下观察TBI后小鼠脑组织中微血管内皮细胞的再生和血管生成能力,采用免疫荧光染色法检测小鼠损伤部位脑组织微血管内皮细胞中核因子κB(NF-κB)的活化情况。结果:与假手术组比较,TBI组小鼠脑组织含水量和EB水平明显增加(P<0.05或P<0.01)。HE染色,与假手术组比较,TBI组小鼠脑组织结构无法辨认,出血点明显。免疫荧光染色,TBI组小鼠脑组织中VEGFR1和CD31蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。荧光显微镜下观察,与野生型组比较,CD47KO-GFP组小鼠脑组织中参与血管生成的微血管内皮细胞百分率明显增加(P<0.05)。免疫荧光检测,与野生型组比较,CD47KO-GFP组小鼠脑组织微血管内皮细胞中NF-κB活化状态明显降低。结论:TBI后小鼠血脑屏障通透性明显增加,损伤脑组织的血管生成增强,CD47敲除有利于TBI后血管新生。

套细胞淋巴瘤细胞Toll样受体9的表达及意义

目的观察套细胞淋巴瘤细胞Toll样受体(TLR)9的表达及意义。方法采用PCR检测TLR9基因的表达,采用流式细胞术检测TLR9蛋白的表达,采用免疫组化检测淋巴瘤患者淋巴结TLR的表达。采用Annexin V/PI双染检测CpG诱导套细胞淋巴瘤细胞的凋亡情况。结果在套细胞淋巴瘤细胞系,TLR9基因水平和蛋白水平均高表达。套细胞淋巴瘤患者的淋巴结TLR9也有明显的表达。CpG-B刺激套细胞淋巴瘤细胞系后凋亡比例明显上升,并且具有时间和浓度依赖性。结论 TLR9在套细胞淋巴瘤细胞系高表达,CpG-B能够诱导套细胞淋巴瘤细胞凋亡。

嘌呤核苷酸对海洛因成瘾大鼠垂体FSH、LH基因表达及内分泌细胞超微结构的影响

目的:研究嘌呤核苷酸对海洛因依赖及戒断大鼠腺垂体卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)/间质细胞刺激素(ICSH)基因表达情况及远侧部生长激素细胞和促性腺激素细胞超微结构的影响。方法:采用逐渐递增剂量法腹腔注射海洛因,建立海洛因依赖及戒断大鼠模型,92只Wistar大鼠随机分成对照组(生理盐水)、核苷酸组(不给海洛因)、海洛因组、海洛因+核苷酸组(同时给药)、戒断3 d组、戒断9 d组、核苷酸3 d组(海洛因停药后给核苷酸3 d)及核苷酸9 d组(海洛因停药后给核苷酸9 d),RT-PCR法半定量分析各组大鼠垂体FSH及LHmRNA表达的变化,电镜观察腺垂体远侧部生长激素细胞和促性腺激素细胞超微结构的变化。结果:与对照组大鼠垂体FSH mRNA的相对表达量(0.045±0.009)比较,核苷酸组(0.099±0.018)、海洛因+核苷酸组(0.177±0.046)、核苷酸3 d组(0.151±0.030)和核苷酸9 d组(0.184±0.028)明显升高(P<0.01);与对照组大鼠垂体LHmRNA的相对表达量(0.700±0.099)比较,海洛因+核苷酸组(0.950±0.169)、核苷酸3 d组(0.990±0.171)和核苷酸9 d组(0.960±0.147)明显升高(P<0.01)。与对照组相比,海洛因组腺垂体远侧部生长激素细胞和促性腺激素细胞核呈不规则形,核膜不清,核基质略致密,核内异染色质趋边、凝集。胞质内粗面内质网扩张,线粒体肿胀、嵴断裂且呈空泡化,分泌颗粒明显减少,部分细胞内可见髓样小体。海洛因+核苷酸组生长激素细胞和促性腺激素细胞与对照组相比无明显变化。结论:短期应用海洛因对大鼠垂体FSH和LH的基因表达影响不明显,与海洛因同时给予嘌呤核苷酸、或海洛因撤药后给予嘌呤核苷酸则明显促进了FSH、LH基因的表达。海洛因可造成大鼠腺垂体远侧部生长激素细胞和促性腺激素细胞超微结构的损伤;嘌呤核苷酸能一定程度地减轻或抑制海洛因对腺垂体远侧部生长激素细胞和促性腺激素细胞超微结构的损害。

NV蛋白酶冻干工艺的相关技术参数

目的:研究NV蛋白酶冻干流程,为冻干工艺的确定提供相关技术参数。方法:制备NV蛋白酶溶液,测定不同温度、不同pH值条件下NV蛋白酶的圆二色谱;以偶氮酪蛋白方法检测NV蛋白酶的活性;采用双阶段冻干法冻干NV蛋白酶;测定Tween 80作为NV蛋白酶冻干变性防护剂的权宜浓度和权宜冷冻速率。结果:NV蛋白酶复溶活性和溶解度随平均冷冻速率升高而降低。Tween 80作为NV蛋白酶冻干变性防护剂平衡NV蛋白酶复溶活性和溶解度的权宜浓度为0.01%。降低冻干药品生产时间成本的权宜冷冻速率参数为2.0℃·min-1。结论:NV蛋白酶具有一定的抵抗冻干过程中温度和pH值降低的能力,平均冷冻速率影响NV蛋白酶复溶活性和溶解度;0.01%Tween 80和2.0℃·min-1平均冷冻速率是NV蛋白酶生产性冻干的有效技术选择。