Nutlins类似物NL-86诱导HeLa细胞凋亡的研究

目的 观察新型Nutlins类似物NL-86在体外诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用,并初步探讨其作用的分子机制.方法 采用MTT法检测NL-86化合物对HeLa细胞增殖的影响;用 FITC-Annexin V及碘化丙锭（PI）双染法,通过流式细胞仪（FCM）检测NL-86诱导HeLa细胞凋亡情况;用Western 印迹检测PARP[poly（ADP-ribose）polymerase]、pro-caspase 3、8、9的变化,并利用活力检测试剂盒检测caspase 3、8、9的活力,初步确定其诱导凋亡的通路.结果 不同浓度的NL-86 对于HeLa细胞的存活率均具有一定影响,并以浓度依赖的方式诱导HeLa细胞凋亡;随着NL-86浓度的增加,PARP被切割、HeLa 细胞pro-casepase 3、8的含量下降,但 pro-caspase 9无变化.活力测定结果显示caspase 3、8被激活,caspase 9无变化.结论 NL-86化合物能够有效地在体外诱导HeLa 细胞凋亡,且可能依赖于caspase 3、8相关的死亡受体凋亡途径,为进一步研发治疗宫颈癌等肿瘤疾病的药物奠定了实验基础.

Nutlins类似物NL-608诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的研究新型Nutlins类似物NL-608在体外诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡的作用，并初步探讨其可能的凋亡通路。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测NL-608化合物对MCF-7细胞增殖的影响；采用流式细胞仪（FCM）检测NL-608诱导MCF-7细胞凋亡情况；采用Westernblot方法检测多聚ADP-核糖聚合酶（PARP）、半胱天冬酶（pro-caspase3、pro-caspase8、pro-caspase9）以及Fas和Fas配体（FasL）的变化，并利用活力检测试剂盒检测caspase3、caspase8、caspase9的活力。结果NL-608对MCF-7细胞的增殖具有抑制作用，并呈浓度依赖性，100、33、11、3．7、1．2、0．4、0．14Ixmol／LNL-608作用后，MCF-7细胞的存活率分别为（6．70±1．27）％、（10．90±5．08）％、（24．31±3．77）％、（45．144±5．14）％、（79．16±10．01）％、（97．00±2．31）％和（99．90±0．01）％。随着NL-608浓度的增加，PARP被切割，pro-caspase3和pro—caspase8的Westernblot条带变淡，但pro-caspase9的条带无变化。活力测定结果进一步显示，easpase3和caspase8被激活，其相对活力与对照组相比分别为（3．76±0．35）倍和（2．71±0．27）倍；而caspase9的相对活力为（1．03±0．08）倍，即对easpase9无明显影响。Westernblot结果显示，Fas和FasL的表达量均随NL-608浓度的增加而增加。结论NL-608化合物能够有效地在体外诱导MCF-7细胞凋亡，且可能依赖于easpase3和caspase8相关的死亡受体凋亡途径，为进一步研发乳腺癌治疗药物奠定了实验基础。