PPAR-γ激活对糖基化终末产物引起的大鼠肾系膜细胞TGF-β及CTGF mRNA表达的影响

目的观察过氧化物酶体增殖体激活受体-γ(PPAR-γ)激活对糖基化终末产物(AGEs)引起的大鼠肾系膜细胞TGF-β及CTGFmR-NA表达的影响。方法体外培养正常大鼠肾系膜细胞,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测不同浓度AGEs(0～400μg/ml-1)及不同浓度PPAP-γ)激活剂(罗格列酮)和PPAR-γ阻断剂(GW9662)对AGEs(100μg/ml-1)引起的TGF-β及CTGFmRNA表达的影响。结果给予PPAR-γ激活剂可明显减轻AGEs引起的大鼠系膜细胞TGF-β、CTGFmRNA的表达。结论PPAR-γ激活剂可以明显减轻AGEs对系膜细胞TGF-β、CTGFmRNA的表达影响,从而改善肾小球细胞外基质积聚,在糖尿病时起到肾脏保护作用。

NF-κB参与银杏叶提取物保护血管内皮细胞的作用

目的阐明银杏叶提取物(GBE)对H2O2介导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用。方法 HUVEC分为对照组、H2O2处理组、50 mg/L及100 mg/L GBE处理组。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖能力。Western印迹分析各组细胞(NF-κB P65)表达。结果H2O2处理组细胞增殖率明显低于对照组(P<0.01);GBE高、低剂量组细胞增殖能力明显高于H2O2处理组(P<0.01,P<0.05)。各组细胞细胞核NF-κB P65表达量差异有显著性,与H2O2处理组比较,GBE高、低剂量组NF-κB P65核/浆比明显升高(P<0.01)。结论 GBE通过NF-κB通路影响血管内皮细胞的增殖能力。

早期糖尿病肾病转化生长因子-β_1与尿白蛋白的相关性

目的探讨早期糖尿病肾病(DN)转化生长因子-β1(TGF-β1)与尿白蛋白的相关性。方法RT-PCR方法测定高糖刺激的系膜细胞内及2型糖尿病小鼠肾小球内TGF-β1mRNA的转录水平;ELISA方法检测DN患者尿TGF-β1和尿白蛋白排泄率(UAER)的变化。结果高糖刺激的系膜细胞内与肥胖db/db小鼠肾小球内TGF-β1mRNA转录水平与对照组比较均明显增高。糖尿病各组患者尿TGF-β1含量均显著高于正常对照组,且UAER增加呈递增趋势,两者呈正相关。结论TGF-β1与早期DN的发生与发展密切相关,是反映早期糖尿病肾损害的重要因子。

银杏叶提取物减轻糖基化终末产物对大鼠肾脏TGF-β及CTGF表达的影响

目的观察银杏叶提取物对糖基化终末产物(AGEs)引起的大鼠肾脏TGF-β及CTGF过表达的影响。方法每日给正常大鼠尾静脉注射AGE-修饰大鼠血清蛋白(AGEs组),部分大鼠同时灌胃给予银杏叶提取物(GBE组),注射天然大鼠血清蛋白(RSP组)和不施加处理的正常大鼠(空白对照组)作为对照。Elisa法检测肾皮质TGF-β及CTGF蛋白的表达,RT-PCR检测TGF-β及CTGF mRNA的表达。结果与RSP组及空白对照组比较,AGEs组大鼠尿蛋白含量明显增加(P<0.05),TGF-β及CTGF蛋白、mRNA的表达均增高(P<0.01),给予GBE后尿蛋白含量明显降低(P<0.01),TGF-β及CTGF蛋白含量及mRNA表达均明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论 GBE改善AGEs引起的肾功能变化,减轻AGEs诱导的大鼠肾皮质TGF-β及CTGF过表达。提示GBE可通过抑制AGEs引起的TGF-β及CTGF过表达而在糖尿病中起到肾脏保护作用。

银杏叶提取物对糖尿病大鼠肾脏组织型转谷氨酰胺酶表达的影响

目的观察银杏叶提取物对糖尿病大鼠肾脏组织型转谷氨酰胺酶(tTG)表达的影响。方法链脲佐菌素(STZ)复制糖尿病动物模型,将糖尿病动物随机分为,糖尿病组(DM),银杏叶提取物组(GBE);另设正常对照组(Con-trol)。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肾皮质tTG mRNA的表达、Western blot检测肾皮质tTG蛋白表达,PAS染色评估ECM含量。结果与正常对照组比较,糖尿病大鼠肾脏细胞外基质(ECM)积聚,tTG mRNA及蛋白表达均明显增高(P<0.01);给予银杏叶提取物可明显减轻ECM积聚,同时tTG表达量也明显降低(P<0.01)。结论银杏叶提取物可以明显减轻糖尿病大鼠肾脏ECM积聚,提示银杏叶提取物可能通过降低tTG的表达,改善糖尿病肾脏ECM积聚。

银杏叶提取物对内皮细胞的保护作用

目的探讨银杏叶提取物(GBE)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)致体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用。方法将处于对数生长期的HUVEC分为正常对照组、AngⅡ组及高、中、低3个GBE处理组,其中正常对照组用含0.5%小牛血清的DMEM培养基培养,AngⅡ组在正常对照组培养基基础上含AngⅡ10-8mol/L,GBE处理组在AngⅡ组基础上分别加GBE50、100、200mg/L做为GBE低、中、高组,采用MTT法测定培养细胞增殖能力。并应用Western印迹法检测各组细胞中磷酸化Akt表达。结果 MTT法检测结果表明,AngⅡ组细胞增殖能力明显高于正常对照组(P<0.05),除GBE低剂量组外,GBE高、中剂量组A值均明显高于AngⅡ组(P<0.05);Western印迹法检测各组培养细胞磷酸化Akt表达结果显示,与正常对照组比较,AngⅡ组磷酸化Akt蛋白表达量明显降低(P<0.05),GBE高剂量组磷酸化Akt表达明显高于AngⅡ组(P<0.05),且与正常对照组比较,差异无统计学意义,GBE中、低剂量组磷酸化Akt蛋白表达量明显降低(P<0.05),但仍显著高于AngⅡ组(P<0.05)。结论 AngⅡ导致血管内皮细胞增殖能力下降可能与其抑制磷酸化Akt表达量有关,GBE可通过上调Akt表达抵抗AngⅡ引起的细胞损伤。

尾加压素Ⅱ在大鼠心肌纤维化中的表达及作用

目的研究尾加压素Ⅱ(urotensinⅡ,UII)在大鼠心肌纤维化(myocardial fibrosis,MF)中的表达及作用。方法注射盐酸异丙肾上腺素(isoproterenol,Iso)15 mg.kg-1复制大鼠MF模型。Masson三色染色分析大鼠心肌细胞外基质沉积情况,免疫组化染色及RT-PCR评估UII基因和蛋白表达情况。结果与正常对照组比较,注射Iso后12 h,UIImRNA及蛋白表达即明显增加(P<0.01),其中mRNA表达1周后有所回落,但3周后仍未降至正常(P<0.05),而UII蛋白表达水平仍然随着纤维化程度的加重稳步增高。结论 UII的表达在缺血性坏死心肌中明显增加,提示UII的表达与纤维化程度有关联,可能参与了MF的过程。

辛伐他汀对氧化型低密度脂蛋白刺激SMC增殖的抑制作用

目的探讨辛伐他汀对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人主动脉平滑肌细胞(SMC)增殖的影响。方法人主动脉SMC分为对照组、模型组、辛伐他汀低、中、高剂量组,用MTT法检测各组细胞增殖能力,流式细胞术(FCM)检测细胞周期。结果 MTT结果发现,与ox-LDL模型组比较,辛伐他汀高、中、低剂量组细胞增殖能力均明显降低(P<0.05,P<0.01);FCM结果显示,与模型组比较,辛伐他汀高、中剂量组S期细胞所占比例明显降低(P<0.01)。结论辛伐他汀可明显抑制ox-LDL介导的人SMC S期DNA合成,从而抑制SMC过度增殖。

奥沙利铂通过调控miRNA-7-5p/RAF-1促进胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的探讨奥沙利铂如何调控MAPK通路,抑制胃癌细胞的增殖。方法NCBI检索文献,利用TargetScan、StarBase和miRBase数据库,进行GO分析与KEGG通路富集,找到相关miRNAs,预测靶基因。应用Real-time PCR、MTT、Hoechst33258、流式细胞术、细胞划痕实验、Western blot等方法分析人胃癌SGC-7901细胞的增殖、细胞周期、侵袭及蛋白表达情况。结果胃癌细胞中miR-7-5p显著低表达,RAF1与miR-7-5p存在互靶关系。miR-7-5p mimics与奥沙利铂均可促进SGC-7901细胞的凋亡,提高G1期细胞百分率(P<0.05),降低侵袭、迁移速度。caspase3、caspase9蛋白表达升高,Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05)。结论过表达miR-7-5p与奥沙利铂均可促进胃癌SGC-7901细胞的凋亡,提示奥沙利铂可能通过上调miRNA-7-5p促进SGC-7901细胞的凋亡,降低侵袭、迁移速度。

葫芦素B联合奥沙利铂对人结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的抑制作用及其机制

目的:探讨葫芦素B (CUB)联合奥沙利铂(OXA)对人结肠癌SW480细胞增殖及凋亡的影响,并阐明其作用机制。方法:将SW480细胞分为对照组,10、20和40μmol·L^-1 CUB组,OXA组(100μmol·L^-1)及联合组(40μmol·L^-1 CUB+100μmol·L^-1 OXA)。采用MTT法检测SW480细胞增殖率,Hoechst33258染色法观察SW480细胞形态表现,流式细胞术检测SW480细胞的细胞周期及细胞凋亡率,Western blotting法检测SW480细胞中半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3 (caspase-3)、活化后的caspase-3(cleaved caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2 (Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的蛋白表达水平。结果:MTT实验,与对照组比较,CUB组和OXA组细胞增殖率明显降低(P<0.05);与不同剂量CUB组和OXA组比较,联合组细胞增殖率明显降低(P<0.05)。Hoechst33258染色,与对照组比较,不同剂量CUB组和OXA组细胞蓝色荧光更亮,细胞核可见颗粒块状荧光;与不同剂量CUB组和OXA组比较,联合组细胞蓝色荧光明显变亮,颗粒状荧光明显增加。流式细胞术检测细胞周期,与对照组比较,不同剂量CUB组和联合组G2/M期细胞百分率明显升高(P<0.05),40μmol·L^-1 CUB组、OXA组和联合组S期细胞百分率明显升高(P<0.05)。流式细胞术检测细胞凋亡率,与对照组比较,不同剂量CUB组和OXA组细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与不同剂量CUB组和OXA组比较,联合组细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。Western blotting法检测,与对照组比较,不同剂量CUB组、OXA组和联合组细胞中caspase-3和Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05),cleaved caspase-3和Bax蛋白表达水平升高(P<0.05),cleaved caspase-3/caspase-3比值升高(P<0.05),Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05);与不同剂量CUB组和OXA组比较,联合组细胞上述蛋白表达水平及cleaved caspase-3/caspase-3和Bcl-2/Bax比值变化更明显(P<0.05)。结论:CUB联合OXA可有效抑制结肠癌SW480细胞增殖,其机制可能与细胞阻滞在S期、G2/M期及上调cleaved caspase-3/caspase-3比值、下调Bcl-2/Bax比值有关。

大剂量盐酸异丙肾上腺素诱发大鼠心肌缺血性坏死模型的建立

目的建立大剂量盐酸异丙肾上腺素(Iso)诱发大鼠心肌缺血性坏死模型。方法多点皮下注射Iso15mg/kg,建立大鼠心肌缺血坏死模型,并检测其心电图(ECG)、血清酶学指标、心肌血清羟脯氨酸含量、三磷酸腺苷(ATP)含量及HE染色结果。结果与正常对照组比较,模型组大鼠心电图各点ST段和T波均有明显的变化;注射Iso后4h,乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平达高峰;注射后6h,天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平达高峰;随着注射后时间的延长和病变程度的加重,心肌血清羟脯氨酸含量明显增加;ATP含量明显降低;注射Iso2h后,模型组即出现小的坏死灶,且随时间的延长,病变程度明显加重,坏死面积在3周达到最大,并出现明显的纤维化。结论一次性皮下多点注射15mg/kg的Iso,可成功地诱发大鼠心肌缺血性坏死,且可出现明显的纤维化。

ERK1/2对高糖刺激肾小球系膜细胞葡萄糖转运蛋白1和p27^(Kip1)表达的作用

高糖是引起糖尿病肾病（DN）时肾脏肥大的始动因素。葡萄糖通过葡萄糖转运蛋白（GLUT）进入细胞。肾小球系膜细胞（GMC）主要表达GLUT1。细胞外高糖可以刺激GMC的GLUT1表达以及对糖的摄入。然而，高糖诱导GMC的GLUT1表达机制不甚明确。本研究利用大鼠GMC观察细胞外调节蛋白激酶（ERK1／2）对高糖诱导的GLUT1表达及细胞周期抑制蛋白（CKI）p27^Kip1的影响。旨在给DN时抑制ERK1／2的活性可以阻止GLUT1的表达增高而延缓GMC肥大的假设提供理论依据。

长春新碱对糖尿病肾病大鼠的疗效及其机制探讨

糖尿病肾病（DN）是糖尿病最常见的微血管并发症,其早期特征是细胞周期调控异常导致的肾脏肥大、基底膜增厚、细胞外基质增多,从而产生蛋白尿.而蛋白尿的产生与足突裂孔蛋白（neprin）表达减少有关.长春新碱（VCR）属细胞周期特异性药物,能抑制细胞的增殖,主要治疗肿瘤,也有报道治疗肾病综合征,能够减轻蛋白尿,但机制不明确.我们研究VCR对早期DN大鼠的疗效并探讨有关机制.

糖基化终末产物对大鼠肾小管上皮细胞组织型转谷氨酰胺酶mRNA表达的影响

目的探讨晚期糖基化终末产物(Advanced glycosylation end products,AGEs)对大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E组织型转谷氨酰胺酶(Tissue transglutanunase,tTG)mRNA表达及其对细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)降解的影响。方法体外培养NRK-52E细胞,分别用体外合成的不同浓度的糖化牛血清白蛋白(AGE-BSA)及未经糖化的牛血清白蛋白(BSA)处理48h,ELISA法检测细胞培养上清中纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)和Ⅳ型胶原蛋白(TypeⅣcollagen,ColⅣ)含量,RT-PCR检测细胞tTG mRNA的表达。结果与BSA组比较,50～200mg/LAGE-BSA组细胞上清中FN含量明显增加(P<0.01),25～100mg/L AGE-BSA组细胞上清中ColⅣ含量明显增加(P<0.05);AGE-BSA(50～400mg/L)可不同程度地刺激细胞tTG mRNA表达的增加(P<0.05);tTG mRNA表达增加与FN、ColⅣ分泌增多呈正相关(r值分别为0.911和0.872)。结论 AGEs能诱导大鼠近端肾小管上皮细胞tTG mRNA的表达,引起ECM主要成分FN和ColⅣ含量增加,提示tTG可能在AGEs引起的ECM积聚过程中,起到抑制ECM蛋白降解的作用,进而参与糖尿病肾病的病理过程。

长春新碱对糖尿病肾病大鼠肾脏转化生长因子β1表达的影响

长春新碱（VCR）属细胞周期特异性药物，抑制细胞增殖，有减轻蛋白尿的作用。我们采用VCR干预治疗了糖尿病肾病（DN）大鼠，观察其对减轻DN模型大鼠蛋白尿的作用，并探讨其作用机制。一。

一种配伍组方的降血脂功效及相关机制研究

目的本实验观察了淫羊藿、红景天和山药配伍组方的降血脂作用,探讨其机制为开发降血脂功效的保健食品提供实验依据。方法将50只雄性SD大鼠随机分为正常组(control)、模型组(model)、组方低、中、高三个剂量组(50、100、200 mg/kg),除正常组外,各组大鼠均给予高脂饮食,建立高脂血症模型。第31 d起,除正常组,其余各组继续饲喂高脂饮食,并开始按剂量灌胃给予受试组方,正常组和模型组给予等体积的0.5%羧甲基纤维素钠,每日1次,持续45 d。整体造模时间持续75 d。实验进行期间,每日记录大鼠体质量变化并分别于实验不同阶段测定大鼠血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)的水平,实验结束后,各组大鼠胸主动脉行HE染色进行观察,Westernblot法检测各组大鼠胸主动脉中Caspase家族相关蛋白的表达水平。结果与模型组相比,以淫羊藿、红景天、山药为组方可改善喂饲高脂饲料大鼠体质量的上升(P<0.05),降低血清中TG、TC、LDL的含量(P<0.05),提高HDL的水平(P<0.05),HE染色发现3个组方剂量组可改善胸主动脉的病理变化,其中高剂量组效果最为显著。此外,本组方还可以显著抑制cleaved-caspase-3和cleaved-caspase-9(P<0.05)的表达。结论本组方具有降低大鼠体质量和血脂水平,抑制胸主动脉中caspase家族蛋白的表达,为开发降脂保健食品提供实验依据.