早期综合康复治疗对脑卒中患者整体功能提高的促进作用

目的:探讨早期综合康复治疗对脑卒中患者整体功能的影响。方法:将120例脑卒中患者分为康复组和常规治疗组,分别采用Fugl-Meyer运动量表(FMA)、Barthel指数(BI)和医院焦虑抑郁量表(HADS)于治疗前及治疗30 d后评定两组患者的肢体运动功能、日常生活活动能力(ADL)和精神状态。结果:康复组和常规治疗组治疗前FMA、BI和HADS评分比较差异无显著性(P>0.05),治疗30 d后两组比较,康复组FMA及BI评分明显高于常规治疗组(P<0.05),HADS评分低于常规治疗组(P<0.01)。Pearson检验发现肢体运动功能的改善与ADL的提高呈正相关。结论:早期综合康复治疗可以有效地改善脑卒中患者的运动功能和精神状态,提高ADL能力。

鹿茸多肽纳米复合材料诱导兔骨髓间质细胞向成骨细胞的分化效应

目的:探讨鹿茸多肽纳米复合材料诱导兔骨髓间质细胞(MSCs)向成骨细胞分化的效应,阐明复合材料作用机制。方法:将含5mg.g-1鹿茸多肽、20%纳米β-磷酸三钙(β-TCP)和明胶的复合材料(以下简称复合材料)与第3代MSCs共培养48h,用MTT法和流式细胞术检测复合材料对MSCs增殖及细胞周期的影响;AO/EB荧光染色观察MSCs凋亡形态的变化;将MSCs与复合材料共培养,扫描电镜下观察细胞黏附、生长情况;复合材料连续作用于MSCs 21d,全自动生化分析仪检测细胞中碱性磷酸酶(ALP)活性,茜素红染色法观察复合材料对MSCs矿化结节形成的作用。结果:复合材料作用于MSCs 48h,可明显促进MSCs增殖,相对增殖率为126.45%,此时的MSCs主要处于S期,占细胞总数45.84%(对照组为7.96%),凋亡率为2.08%(对照组为13.68%);MSCs在复合材料上黏附、生长良好,呈多角或梭形。复合材料连续作用MSCs 21d,显著增加了矿化结节形成;随着作用时间的延长,细胞的ALP活性也逐渐增强,21d复合材料组与对照组比较明显升高(P<0.001)。结论:复合材料在体外可促进MSCs增殖,并可诱导MSCs向成骨细胞分化,具有良好的成骨效能。

鹿茸多肽及其生长因子制备工艺的研究进展

鹿茸是我国传统中药材,鹿茸多肽及其生长因子具有重要的生理功能。本文综述了鹿茸多肽及其生长因子的提取、分离、纯化以及文库构建表达的应用前景。

人MT1-MMP真核表达载体的构建及其在HepG2细胞中的表达及意义

目的:克隆人膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)基因,构建真核表达载体,并检测其在人肝癌细胞HepG2中的表达。方法:采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从人正常肝组织中扩增MT1-MMP全长cDNA,将之与pMD18-T载体连接,测序后将该片段亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1中。将构建好的pcDNA3.1/MT1-MMP真核表达载体经酶切鉴定后,采用脂质体法转染入HepG2细胞,经G418筛选,得到阳性克隆细胞株。应用RT-PCR检测转染前后该细胞株MT1-MMP mRNA表达水平。结果:①RT-PCR获得长度约为704 bp的目的片段,与预期片段相符;②将pcDNA3.1/MT1-MMP真核表达载体经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切鉴定,得到约5400 bp和704 bp两个片段,测序结果证实所插入目的片段与GenBank中MT1-MMP cDNA序列匹配;③重组质粒转染株MT1-MMP mRNA表达水平(1.66±0.43)明显高于空质粒组(1.21±0.25)和对照组(1.19±0.18)(P<0.01)。结论:成功构建pcDNA3.1/MT1-MMP真核表达载体,并在人肝癌细胞株HepG2中稳定表达。

ATP5B原核表达和单克隆抗体的制备及其鉴定

目的:制备高纯度ATP合酶β亚基(ATP5B)单克隆抗体并进行鉴定,为其后续研究奠定基础。方法:应用PCR法扩增ATP5B基因,克隆入pET28a载体中并转入大肠杆菌BL21 (DE3)。异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达并用镍亲和层析柱纯化融合蛋白,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测蛋白纯度。用纯化的融合蛋白免疫3只雌性Balb/C小鼠,取小鼠尾静脉血,间接酶联免疫吸附法(ELISA法)检测血清中ATP5B抗体效价。取血清效价最高的免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞混合培养建立杂交瘤细胞,采用间接ELISA法筛选融合细胞并行单克隆化培养,对阳性细胞进行核型分析。取12周龄Balb/C小鼠,腹腔注射杂交瘤细胞制备腹水模型,收集腹水,间接ELISA法检测效价,SDS-PAGE检测抗体纯度,应用ELISA法检测抗体亚型。结果:PCR扩增后得到1 455bp的特异性条带,连接pET28a空载体获得重组pET28a/ATP5B载体。IPTG诱导转化的菌液表达目的蛋白,SDS-PAGE检测,在相对分子质量为51 000处出现明显的诱导蛋白条带。间接ELISA法检测免疫小鼠静脉血,血清效价最高达1∶64 000。杂交瘤细胞染色体核型分析,染色体总数约为骨髓瘤细胞与正常小鼠脾细胞之和。采用杂交瘤细胞株制备小鼠腹水,抗体最高效价为1∶240 000,杂交瘤细胞产生的单克隆抗体的亚型为IgG1。结论:通过克隆、表达和纯化重组蛋白,成功制备出抗ATP5B蛋白单克隆抗体。