蛋白聚糖NG2中硫酸软骨素糖胺聚糖链调节稳定转染NG2的U251细胞迁移能力

应用PCR反应使编码蛋白聚糖NG2的核苷酸在3064 3065位置的AG突变成为GC,构建突变型NG2/S999A.用表达野生型NG2和突变型NG2/S999A及空白表达载体分别稳定转染人成胶质细胞瘤U251.应用WesternBlot方法鉴定转染后的U251细胞表达野生型及突变型NG2的状态,证实突变型NG2A999稳定转染的U251细胞株表达的NG2缺失硫酸软骨素葡糖胺聚糖链(CS GAG).比较了3种U251细胞株的迁移,表明蛋白聚糖NG2中CS GAG链影响细胞的迁移能力.

PHOⅠ信号肽在毕赤酵母中引导分泌表达天然N-端rBPTI

目的:在毕赤酵母(Pichia pastoris)中分泌表达天然N-端rBPTI。方法:将PHOⅠ/bpti基因克隆到真核表达载体pPICZα,电转化毕赤酵母菌株X-33。结果:构建了含PHOⅠ/bpti基因的表达质粒,并在X-33中分泌表达rBPTI。用胰蛋白酶抑制实验筛选出表达rBPTI的工程菌。表达上清经阳离子交换层析分离纯化为单一组份,SDS-PAGE显示相对分子质量为6 500。结论:PHOⅠ信号肽在毕赤酵母中成功地诱导分泌表达了具有正确N-端氨基酸序列的rBPTI。