生物医学工程专业《体内药物分析》的教学体会

本文从课程内容的设置、教学手段和实验教学模式等方面总结了对生物医学工程专业学生进行体内药物分析课程教学的心得和体会,为进一步探讨生物工程专业教育与教学提供了参考。

刺五加皂苷的抗辐射损伤作用

目的:探讨刺五加皂苷(ASS)对X射线照射小鼠抗辐射损伤的作用。方法:将小鼠5 0只随机均分为阴性对照组、阳性对照组及低、中、高剂量ASS实验组。测定小鼠脾指数、胸腺指数、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH- Px)活性,并测定淋巴细胞转化率和外周血白细胞数。结果:3个ASS实验组小鼠各项指标与对照组比较,脾指数差异无显著性(P>0 .0 5 ) ,胸腺指数、淋巴细胞刺激指数、血清SOD和GSH- Px活性差异均有显著性(P<0 .0 5 )。结论:ASS对辐射小鼠具有一定的抗辐射和抗氧化作用。

伪人参皂苷GQ对异丙肾上腺素致大鼠急性心肌缺血的改善作用

目的:探讨新化合物伪人参皂苷GQ(PGQ)对异丙肾上腺素致急性心肌缺血大鼠心电图改变的保护作用。方法:取Wistar大白鼠50只,随机分为生理盐水组、异搏定对照组及PGQ大、中、小3个剂量组, 每组10只。舌下静脉注射预防给药PGQ 3．0、6．0和12．0 mg·kg-1及异搏定0．2 mg·kg-1,然后静脉注射 2．0 mg·kg 1异丙肾上腺素,测量心电图(ECG)标Ⅱ、胸I(V1)和胸Ⅱ(V 2)ST段的变化。结果:标Ⅱ导联、V1导联、V 2导联PGQ小、中、大剂量组ST段在各时间点抬高不明显,ST段抬高幅度低于盐水组 (P<0．05,P<0．01,P<0．001)。结论:PGQ能明显降低异丙肾上腺素引起的ST段抬高,具有改善大鼠异丙肾上腺素致急性心肌缺血心电图改变的作用。

山葡萄籽提取物中总多酚的含量测定

目的：建立山葡萄籽提取物中总多酚含量测定的方法。方法：以没食子酸为对照品,采用Folin-Ciocalteus比色法最适宜条件对山葡萄籽提取物中总多酚含量进行测定。结果：没食子酸对照品在浓度为0.002-0.010 g·L^-1范围内,与吸光度成良好的线性关系（Y=86.243X＋0.007,r=0.9996）;精密度试验RSD为0.14%;稳定性实验RSD为1.77%;重复性实验RSD为1.44%;平均回收率为102.00%,RSD为1.37%。结论：该法灵敏度高,重复性好,简便快捷。

伪人参皂苷GQ的排泄试验研究

目的:研究大鼠舌下静脉给药伪人参皂苷GQ后,其在胆汁、粪和尿中的排泄情况。方法:采用高效液相-蒸发光散射色谱(HPLC-ELSD)法测定大鼠胆汁、粪和尿中伪人参皂苷GQ,Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250mm,5μm),以甲醇-水(24∶7)为流动相,流速1.0 mL.min-1,检测温度为50℃,灵敏度为10,以氮气为载气,压力为303 975 Pa。结果:HPLC-ELSD测定方法的标准曲线线性关系、样品回收率和日内、日间精密度均符合要求。伪人参皂苷GQ大鼠舌下静脉给药后,主要以胆汁排泄为主,占总药量的41.60%;其次为粪排泄,占总药量的9.97%;尿液中仅检出少量伪人参皂苷GQ。结论:大鼠胆汁、粪和尿中主要以伪人参皂苷GQ原形药物排泄。

中药马勃促大鼠成纤维细胞增殖的有效成分

目的通过实验筛选出马勃中促大鼠成纤维细胞增殖的有效成分。方法利用极性不同的溶剂分离提取马勃的主要组分,作用于体外培养的成纤维细胞,观测各组分对成纤维细胞生长的影响,筛选出作用最强的组分,并利用质谱等方法确定有效成分。结果 80%乙醇提取物对成纤维细胞增殖作用明显,并筛选出对成纤维细胞增殖作用较强的有效成分。结论分析得到其有效成分可能为萜类化合物。

新型β_2受体激动剂川丁特罗对HepG2细胞中细胞色素P450 mRNA表达的影响

目的:研究新型β2受体激动剂川丁特罗(trantinterol)对细胞色素P450酶(CYP450)mRNA表达的影响,为临床合并用药提供理论依据。方法:人肝癌细胞(HepG2)中分别加入浓度为2.4、12、60、300、1200和4800ng·L-1的川丁特罗,MTT法检测药物作用下的细胞增殖。采用RT-PCR法检测HepG2细胞中CYP1A1、CYP2E1和CYP3A5亚型的mRNA表达量。结果:不同浓度的川丁特罗均未抑制HepG2细胞的增殖(P>0.05)。与对照组比较,川丁特罗给药组CYP3A5和CYP2E1mRNA表达无明显变化,而CYP1A1mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。结论:川丁特罗能明显抑制HepG2细胞中CYP1A1mRNA表达,而对CYP3A5和CYP2E1表达无影响。

双亚型(H5/H7)流感病毒DNA疫苗的构建及其免疫原性检测

目的:构建双亚型(H5/H7)流感病毒DNA疫苗,并检测其免疫原性。方法:构建共表达流感病毒H5亚型血凝素(HA)和H7亚型HA的DNA疫苗,采用间接免疫荧光法(IFA)检测目的蛋白在幼仓鼠肾细胞(BHKcell)中的表达。分为pVAX1-H5-H7、pVAX1-H5、pVAX1-H7和pVAX1空质粒对照组4组(每组15只)进行小鼠免疫实验,并应用ELISA法检测小鼠血清抗体,流式细胞术检测小鼠脾T淋巴细胞亚群数量。结果:所构建的双亚型(H5/H7)流感病毒DNA疫苗在BHK细胞中的表达产物可激发荧光抗体产生绿色免疫荧光,且对照pVAX1空载体转染BHK细胞无免疫荧光产生。使用双亚型(H5/H7)流感病毒DNA疫苗免疫小鼠后,小鼠产生了针对H5和H7抗原的血清特异性抗体,流式细胞术检测免疫组小鼠脾T淋巴细胞亚群CD4+和CD8+的数量显著高于对照组(P<0.05)。结论:成功构建的双亚型(H5/H7)流感病毒DNA疫苗可以诱导小鼠产生特异性的细胞免疫和体液免疫应答。

山参果汁总皂苷对大鼠离体心脏血流动力学的影响

目的:探讨山参果汁总皂苷(WGFS)对大鼠离体工作心脏血流动力学的影响。方法:制备大鼠离体工作心脏,观察山参果汁总皂苷对心率(HR)、动脉血压(AP)、左室收缩压(LVSP)、左室舒张期末压(LVEDP)、左室内压最大上升及下降速率(±dp/dtmax)的影响。结果:山参果汁总皂苷在给药后不同时间具有减慢HR,降低AP、LVSP、±dp/dtmax的作用(P<0.05或P<0.01),并呈现一定的剂量依赖关系,对LVEDP无显著影响(P>0.05)。结论:山参果汁总皂苷具有负性肌力和负性频率作用,即抑制心肌收缩和舒张功能,减慢心率、降低动脉血压。

黄紫堇总生物碱对β-淀粉样蛋白致老年性痴呆大鼠的保护作用

目的:探讨黄紫堇总生物碱(TAOCO)对β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)所致老年性痴呆(AD)大鼠行为学及脑组织病理形态表现的影响,阐明其对AD大鼠的保护作用。方法:Wistar大鼠分为正常对照组(0.5mL·100g^(-1)蒸馏水,n=9)、模型组(0.5mL·100g^(-1)蒸馏水,n=9)、阳性药组(1.75mg·kg^(-1)盐酸多奈哌齐,n=9)和低、中及高剂量(2.0、4.0、8.0mg·kg^(-1))TAOCO组(n=8,n=9,n=9)。大鼠海马定位注射Aβ_(25-35)建立AD模型。手术后第14天开始,连续灌胃给药7d后,Morris水迷宫实验观察各组大鼠空间学习记忆能力,避暗实验观察大鼠被动回避能力,HE染色观察大鼠大脑皮层和海马组织病理形态表现。结果:水迷宫实验,与模型组比较,低剂量TAOCO组大鼠第4~5天到达平台的潜伏期明显缩短(P<0.05);中剂量TAOCO组大鼠第5天达到平台的潜伏期和游程明显缩短(P<0.05),第3天时朝向角缩小(P<0.05);高剂量TAOCO组大鼠第2和5天到达平台的潜伏期明显缩短(P<0.05),第6天时朝向角明显缩小(P<0.01)。与模型组比较,第7天各剂量TAOCO组大鼠在1.5min内在平台的停留时间、在平台区的停留距离、平台停留时间/总时间和平台停留距离/总路程明显增加(P<0.05);低和高剂量TAOCO组大鼠经过平台的次数和有效区的停留时间明显增加(P<0.05)。避暗实验,与模型组比较,各剂量TAOCO组大鼠第2天的错误潜伏期和错误次数比较差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,低和中剂量TAOCO组大鼠皮层和海马组织病理形态表现无明显差异;高剂量TAOCO组大鼠大脑皮层和海马组织的病理损伤明显改善。结论:TAOCO可改善AD大鼠的学习记忆功能,减轻AD大鼠脑组织的病理性损伤。

中药马勃对大鼠皮肤成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的:中药马勃作用于体外培养大鼠皮肤的成纤维细胞,观察大鼠成纤维细胞增殖及胶原合成的能力,探讨马勃有效组分在细胞水平上促皮肤患处愈合的作用机制。方法:运用体外细胞培养技术对新生大鼠乳鼠皮肤的成纤维细胞进行培养,实验分为对照组(不给药组)和马勃有效组分37.5、75.0、150.0及300.0mg.L-1组;实验组于传代培养24h后加入不同浓度的药物,继续培养24、48、72h后收集细胞。采用MTT比色法测定细胞增殖,生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法测定细胞胶原含量。结果:与对照组比较,37.5、75.0、150.0及300.0mg.L-1实验组的成纤维细胞增长率和成纤维细胞胶原合成能力均显著性升高(P<0.01)。在药物作用时间方面,与对照组比较,在24、48和72h观察细胞增殖率和胶原合成能力均显著增强,72h最强,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:在不同剂量马勃有效组分作用下,大鼠成纤维细胞活化增殖,胶原合成的能力增强。

rhHSP110毕赤酵母工程菌的大规模发酵及产物纯化

目的:探讨重组人HSP110(rhHSP110)毕赤酵母工程菌在80 L发酵罐中大规模发酵的工艺及发酵产物rhHSP110的纯化方法。方法:在摇瓶中制备rhHSP110工程菌种子2 L,将种子接种到80 L发酵罐中,采用补料分批培养方式对工程菌进行高密度发酵。控制和优化各种发酵条件,经历72 h后结束发酵。将发酵液离心,经阳离子交换层析对上清中的表达产物进行纯化。结果:控制发酵温度为30℃,pH值为4.2,溶氧值为20%以上,在酵母细胞湿重达到200 g.L-1时开始甲醇诱导表达,72 h后结束发酵。发酵上清通过阳离子交换层析纯化后获得纯度为80%的rhHSP110,产量为500 mg.L-1。结论:rhHSP110酵母工程菌在80 L发酵罐高密度发酵成功,为rhHSP110的产业化生产及临床研究了奠定基础。

HPLC法测定洋参果消渴胶囊中人参皂苷Re的含量

目的:建立高效液相色谱(HPLC)法测定洋参果消渴胶囊中人参皂苷Re的含量方法。方法:ODS色谱柱,乙腈-磷酸(O.4%)(100︰400)为流动相,流速1.OmL·min-1,检测波长为203nm,柱温40℃。结果:人参皂苷Re在0.596～4.172mg范围内,峰面积与其浓度呈良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为100.4%,RSD为1.78%。结论:本法简便、准确,精密度和重现性均好,可用于该制剂的质量控制。

胡芦巴中皂苷、黄酮和多糖组分不同配伍对1型糖尿病大鼠的降血糖作用

目的:探讨胡芦巴中皂苷、黄酮和多糖组分配伍给药对1型糖尿病大鼠的降血糖作用,研究胡芦巴3种组分降血糖的最佳配伍比例。方法:从胡芦巴中提取皂苷、黄酮和多糖,采用柱分离色谱和水提醇沉法得到3种纯化组分;利用均匀设计法及3种组分在胡芦巴中比例确定配伍比例及分组,分别为低剂量多糖配伍组(多糖∶皂苷∶黄酮=3∶6∶1)、中剂量多糖配伍组(多糖∶皂苷∶黄酮=12∶8∶1)和高剂量多糖配伍组(多糖∶皂苷∶黄酮=10∶4∶1)。采用链脲佐菌素(STZ)诱导1型糖尿病大鼠模型,35只造模成功的大鼠随机分为模型组(9只)、阳性药组(7只)及低、中、高剂量多糖配伍组(分别为7、6和7只),同时设正常对照组(11只)。正常对照组和模型组大鼠给予10mL·kg^(-1)·d^(-1)纯净水,阳性药组大鼠给予0.018g·kg^(-1)·d^(-1)盐酸二甲双胍,各剂量多糖配伍组大鼠按照比例给予0.45g·kg^(-1)·d^(-1)胡芦巴组分,共灌胃28d。观察各组大鼠空腹血糖(FBG)水平,测定大鼠尿液中尿蛋白及血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和晚期糖基化终末产物(AGEs)水平。HE染巴观察大鼠胰腺和肾脏组织形态表现。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠FBG、尿蛋白、TG、TC和AGEs水平明显升高(P<0.01)。与模型组比较,各剂量多糖配伍组和阳性药组大鼠FBG水平逐渐降低,给药28d后明显降低(P<0.05或P<0.01),尿蛋白、TG、TC和AGEs水平明显降低(P<0.01);其中低剂量多糖配伍组大鼠FBG、尿蛋白、TG、TC和AGEs水平降低最明显。与模型组比较,各剂量多糖配伍组和阳性药组大鼠胰腺与肾脏损伤组织均有改善。结论:胡芦巴组分多糖∶皂苷∶黄酮=3∶6∶1的配伍比例能更好地调节1型糖尿病大鼠的血糖,保护大鼠的胰腺与肾脏组织。

人参皂苷Rb1对Aβ淀粉样蛋白诱导大鼠海马神经元损伤的保护作用

目的:研究人参皂苷Rb1对Aβ淀粉样蛋白诱导大鼠海马神经元损伤的影响,为其临床应用提供理论依据。方法:体外原代培养的SD大鼠海马神经元经Aβ淀粉样蛋白损伤建立细胞模型,实验分为正常对照组、Aβ淀粉样蛋白诱导损伤对照组(损伤对照组)、Rb1低剂量组(10mg.L-1)、Rb1中剂量组(50mg.L-1)及Rb1高剂量组(100mg.L-1),应用MTT法检测海马神经元生长增殖活力,TUNEL法检测神经元凋亡情况,化学发光法检测海马神经元内caspase-3活性。结果:MTT法检测结果显示,与正常对照组比较,损伤对照组和Rb1低、中及高剂量组神经元生存率均有不同程度的下降(P<0.05),损伤对照组下降最明显;与损伤对照组比较,Rb1中、高剂量组神经元生存率明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。TUNEL法检测结果显示,与正常对照组比较,损伤对照组、Rb1低、中剂量组的阳性神经元数量明显增加,其中损伤对照组增加最明显;损伤对照组与Rb1高剂量组比较差异有统计学意义(P<0.05)。损伤对照组caspase-3活性与Rb1高剂量组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:人参皂苷Rb1对Aβ淀粉样蛋白诱导性神经元损伤具有保护作用,并通过调控细胞凋亡实现。

不同给药方式下家兔尿液中乌头碱代谢产物的比较

目的:研究不同给药方式下家兔尿液中的乌头碱(AC)代谢产物,探讨不同代谢产物的作用。方法:5只家兔分为AC1.0mg·kg-1灌胃给药组、0.02mg·kg-1静脉给药组及空白对照组,收集代谢产物,采用LC/ESI-MSn方法,通过测定化合物的准分子离子和各级碎片离子,推断尿液中存在的代谢产物。结果:与空白对照组比较,静脉给药组尿液中除原形药物外主要有1种代谢产物(M1),灌胃给药组除原形药物外主要有2种代谢产物(M1,M2);M1为16-O-去甲基乌头碱,M2为乌头碱去氧去甲基产物;M1和M2可能为AC失去1个亚甲基和脱去1个羟基所形成的代谢产物。结论:AC经不同体内代谢方式得到2种代谢产物,与AC原型相比,2种代谢产物与AC的药理及毒理作用密切相关。

高效液相色谱法同时测定五味子中8种木脂素含量

目的建立并优化一种能够同时测定五味子药材中8种木脂素含量的高效液相色谱方法,为五味子药材的质量控制方法研究提供依据。方法采用高效液相色谱方法,同时测定五味子中五味子醇甲、五味子醇乙、当归酰基戈米辛H、五味子酯甲、五味子酯乙、五味子甲素、五味子乙素和五味子丙素含量,通过专属性、线性、稳定性、精密度和回收率实验进行方法学验证,并利用该方法对20批不同产地的五味子药材进行木脂素含量的测定。结果建立的高效液相色谱检测方法专属性强、准确度和精密度高,线性和稳定性好,能够应用于木脂素类化合物的含量测定。结论本研究所建立的木脂素类化合物含量测定方法为综合评价药材的质量、完善五味子质量标准提供科学依据。

植物生长调节剂的毒性研究进展

滥用植物生长调节剂(PGR)所导致的残留问题严重影响了人类的身体健康。常见的PGR毒性反应包括以下几方面:生殖毒性方面.可影响个体性激素水平、促进生精细胞的凋亡及抑制精子的活性;肝毒性方面.可干扰肝中ALT、AST和LDH等血清酶的活性,损伤肝细胞以及改变肝组织的正常形态;此外.PGR还具有免疫毒性、神经毒性、致畸、致癌、致突变、血液损伤、肾毒性、发育毒性和骨骼损伤等毒性作用。就国内外PGR毒性作用机理的研究情况进行了归纳总结,为深入研究PGR对机体的毒性机制提供依据,为合理有效防控PGR毒性损伤提供参考。