16种天然药物提取物抵抗Aβ42寡聚体致PC-12细胞毒性的评价研究

目的评价16种与阿尔茨海默病相关的天然药物提取物对β淀粉样蛋白(Aβ42)寡聚体致PC-12细胞毒性的作用。方法通过超声波破碎法获得16种天然药物的提取物,并筛选具有抑制Aβ42寡聚体诱导的神经毒性作用的药物。将PC-12细胞随机分为实验组、细胞损伤对照组、天然药物对照组、正常细胞对照组。通过细胞培养液中加入Aβ42寡聚体诱导建立PC-12细胞损伤模型。采用MTT比色法测定各组细胞存活率。结果苦参、石菖蒲、何首乌、远志、当归、女贞子、黄芪、益智仁、绞股蓝和淫羊藿10种天然药物提取物具有抑制Aβ42寡聚体诱导神经毒性的作用,其中苦参碱的提取物抑制作用最强。细胞损伤对照组PC-12细胞的存活率显著高于实验组、天然药物对照组及正常细胞对照组(P均<0.05)。结论最终确定10种天然药物(苦参、石菖蒲、何首乌、远志、当归、女贞子、黄芪、益智仁、绞股蓝和淫羊藿)提取物具有抑制Aβ42寡聚体诱导的神经毒性作用,苦参碱的提取物抑制作用最强。

肽β聚集的分子动力学模拟

选择一个可以形成淀粉样纤维的九肽作为研究对象,分别在酸性和碱性的环境下,运用分子动力学模拟的方法研究了这个九肽的β聚集结构,并且研究了它们的热稳定性.结果表明,在碱性环境下,九肽倾向于形成平行折叠结构,而在酸性环境下,九肽倾向于形成反平行折叠结构,与实验结果一致.此外,无论是构成哪种折叠,肽链都沿折叠的生长方向成左手螺旋状排布,但是相邻的肽链间的扭转角度不同,平行的扭转角小于反平行的扭转角,由此可以推断,平行的β折叠更容易形成β折叠片之间的堆积,因此可以在一定程度上解释在碱性环境下的九肽淀粉样纤维的直径大于在酸性环境下淀粉样纤维的直径这一实验结果.

特异性抗cTnI多克隆抗体的制备

目的 制备特异性抗人心肌肌钙蛋白1（cTnI）多克隆抗体。方法 用人cTnI免疫家兔,制备抗人cTnI多克隆抗体,采用膜渗滤亲和层析法吸附掉与骨骼肌肌钙蛋白1（aTnI）有交叉反应的多抗,制备特异性抗cTnI多克隆抗体。结果 抗体经槽式对流兔疫电泳、酶联免疫吸附试验证明对cTnI具有高度特异性,与sTnI无交叉反应。结论 为应用一步夹心酶联免疫吸附法检测cTnI奠定了基础。

聚苯乙烯磁性微球的制备与表征

以表面被油酸包覆的纳米级Fe3O4为磁性载体,苯乙烯和丙烯酸为单体,二乙烯基苯为交联剂,用分散聚合的方法合成了粒径分布更均匀而且具有良好超顺磁性的聚苯乙烯磁性微球,并对这种磁性微球进行形貌、结构和超顺磁性的表征.结果表明,该方法制备的磁性微球粒径分布均匀、表面光滑,室温下,其比饱和磁化强度达到11.61 Am2/kg.

微波辐射诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的可能机制

目的:观察微波辐射对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法:采用10、30和50 mW.cm-2辐射强度的微波辐射SH-SY5Y细胞5 min,以假辐射组(0 mW.cm-2)为对照,光镜下观察细胞形态变化;荧光显微镜下观察DAPI染色细胞核的形态;CTAB法提取细胞基因组DNA,电泳观察DNAladder;台盼蓝拒染法检测细胞存活率;AnnexinV-FITC和PI双染色,流式细胞仪检测细胞凋亡率;MTT法检测细胞相对活性;蛋白质印迹检测细胞凋亡相关蛋白的表达。结果:微波辐射后SH-SY5Y细胞形态即刻改变,胞核、胞质结构欠清,细胞皱缩甚至脱壁;细胞核内的染色质出现不规则凝集,碎裂成2～5个微核;细胞DNA出现明显的梯状条带;细胞存活率随微波辐射强度增大逐渐降低,10 mW.cm-2辐射组与假辐射组比较,细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05),但30、50 mW.cm-2辐射组细胞存活率明显低于假辐射组(P<0.05);微波辐射后6 h的细胞凋亡率随辐射强度的增加逐渐升高,各辐射组细胞凋亡率均明显高于假辐射组(P<0.05);微波辐射后24和48 h,细胞相对活力随辐射强度的增加明显降低,各辐射组的细胞相对活力均明显低于假辐射组(P<0.05)。微波辐射后,细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、survivin表达水平逐渐下降,Bax、caspase-3和caspase-7表达水平逐渐升高,caspase-8和-9表达水平无明显变化。结论:微波辐射可诱导SH-SY5Y细胞凋亡,其作用机制可能与survivin、Bcl-2蛋白表达水平下调、Bax蛋白表达水平上调及caspase-3和caspase-7的作用有关,而与caspase-8和caspase-9介导的caspase-3活化这一作用无密切关系。

一种新型CdTe量子点关于测定铜离子的研究

本文以半胱氨酸和谷胱甘肽为稳定剂,在温和条件下制备了CdTe半导体量子点(或称纳米晶),基于荧光淬灭原理,实现了对Cu2+的定量检测。系统考察了影响量子点光学性质的各种因素,在pH值为6.2的磷酸盐缓冲溶液中,量子点的浓度(以Cd2+计)为1.013×10-4mol/L时,此方法对浓度在2-260μg/L范围内的Cu2+淬灭程度呈很好的线性关系,该方法的检出限为0.15μg/L。在同类方法中,目前尚无如此低的检出限和如此宽的线性响应区间。最后对这种新型量子点监测的高灵敏度的原因和淬灭机理进行了初步推测。

微波辐射对人成神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖与分化的影响

目的观察微波辐射对人成神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖与分化的影响。方法采用10、30、50 mW/cm2辐射强度的微波辐射SH-SY5Y细胞5 min,0mW/cm2为对照组,锥虫蓝拒染法进行细胞计数并计算增殖率;20μmol/L全反式维甲酸黑暗下诱导分化72 h后,在光学显微镜下观察细胞分化的形态并计算分化细胞率;流式细胞仪检测细胞周期;蛋白质印迹检测细胞神经纤丝重链亚基的蛋白表达。结果微波辐射后随辐射强度增加,细胞增殖率在各时间点上均出现不同程度的梯度抑制,与对照组(0mW/cm2)相比,10 mW/cm2辐射组在72 h时出现明显抑制;30 mW/cm2辐射组在48 h时出现明显抑制;50 mW/cm2辐射组在辐射12 h时就出现明显抑制;20μmol/L全反式维甲酸黑暗下诱导分化72 h后,30、50 mW/cm2微波辐射组细胞分化的数量少于对照组细胞,而且细胞轴突长度短于对照组细胞;随着辐射强度的增加,G0/G1期的SH-SY5Y细胞比例逐渐增加,S期细胞比例逐渐减少,G2+M期细胞比例变化相对较小;微波辐射后,SH-SY5Y细胞总NF-H蛋白表达无明显变化,但磷酸化的NF-H蛋白表达随辐射强度的增加逐渐降低。结论微波辐射可同时抑制SH-SY5Y细胞增殖与分化并呈现明显的剂量依赖性抑制作用;细胞周期呈G0/G1期阻滞;对NF-H的表达无影响,但明显抑制了NF-H的磷酸化。

心肌肌钙蛋白I单克隆抗体制备及酶免疫法的建立

目的 研制人心肌肌钙蛋白I(cTnI)单克隆抗体 ,建立双单克隆抗体两点一步夹心酶免疫法 (简称“双抗夹心ELISA”)。方法 用亲和层析法直接从人心肌组织中提纯cTnI ,经免疫、融合、筛选、克隆等杂交瘤技术 ,制备出 3株特异性抗cTnI单克隆抗体 ,选用其中互补的 2株 2F11和9F5,分别制成生物素化抗体和酶标抗体 ,建立双抗夹心ELISA检测法。结果 用双抗夹心ELISA和美国PBM公司LifesignTroponinI检测试剂对 40名健康献血员和 3 4例急性心肌梗塞患者血中cTnI水平进行检测 ,本法最低检测限为 0 8μg/L ,两者符合率分别为 97 5%和 93 9% ,符合临床诊断要求。结论 双抗夹心ELISA特异性强 ,灵敏度、准确度和精密度较高 。

含金属硫蛋白蛋奶粉对辐射损伤的防护作用

目的研究含金属硫蛋白(metallothionein,MT)蛋奶粉对小鼠电离辐射损伤的防护作用。方法受试小鼠连续灌胃含MT蛋奶粉14d后给予2.5GyX射线照射,24h后处死小鼠,检测其外周血白细胞数、淋巴细胞增殖率、股骨骨髓细胞DNA含量、胸腺细胞周期进程以及血液、肝脏和肾脏丙二醛(MDA)含量和抗氧化酶(SOD、CAT和GSHPx)活性。结果受照射小鼠给予含MT蛋奶粉后,外周血白细胞数、淋巴细胞增殖率、股骨骨髓细胞DNA含量和肝脏、肾脏、血浆SOD、CAT和GSHPx活性明显高于辐照对照组,而血液、肝脏和肾脏MDA含量明显降低。含MT蛋奶粉加照射组明显减轻了胸腺细胞G1期阻滞,促进其DNA合成。结论含MT蛋奶粉对小鼠辐射损伤具有防护作用。