沉默survivin抑制喉癌细胞Hep-2生长的实验研究

目的 探讨沉默survivin对喉癌细胞Hep-2生长的影响.方法 将重组质粒（psi-survivin）和阴性对照质粒（psi-scramble）用脂质体包裹转染人喉癌细胞株Hep-2,分别用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹（Western blot）从mRNA和蛋白水平检测survivin的表达.四甲基偶氮唑蓝（MTT）观察喉癌细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡.建立裸鼠喉癌移植瘤模型,将psi-survivin和psi-scramble注射于肿瘤周围,观察其抗肿瘤的效果.免疫组化法和Western blot法检测重组质粒对肿瘤Survivin蛋白表达的影响.末端脱氧核苷酸转移酶介导的d-UTP缺口末端标记技术（Tunel）观察肿瘤细胞的凋亡.结果 psi-survivin不仅在mRNA水平（抑制率为54.4%）,而且蛋白水平也抑制Survivin表达,抑制率为37.0%.MTT证实psi-survivin明显抑制喉癌细胞的增殖,抑制率达71.7%.流式细胞仪结果显示psi-survivin组细胞凋亡明显增加,凋亡率达（13.05±0.56）%（（-x）±s,下同）.体内实验表明,质粒注射后第32天,盐水组瘤体积为（1443.9±230.5）mm3,psi-scramble组为（1348.5±198.4）Rim3,而psi-survivin组为（624.6±188.4）mm3,与对照组相比,差异有统计学意义（t=-5.917,P＜0.01）.psi-survivin能明显抑制肿瘤survivin的表达,抑制率为41.8%,与对照组相比,差异有统计学意义（t=-80.343,P＜0.01）.Tunel染色结果显示psi-survivin组肿瘤组织中出现较多凋亡细胞,而对照组未见凋亡细胞.结论 沉默survivin能明显抑制喉癌细胞Hep-2的生长.