宏基因组二代测序技术在血液病患者合并感染诊疗中的应用

探讨宏基因组二代测序(mNGS)在血液病合并感染诊疗中的临床应用价值。对比分析2021年8月至2022年12月吉林省人民医院血液科血液病合并感染患者的传统病原体检测结果与mNGS检测结果,探讨mNGS在血液病合并感染时诊疗的优势及临床应用价值。共纳入患者20例,经mNGS检测,16例呈阳性,包括细菌感染3例、真菌感染1例、病毒感染4例,两种以上感染8例;4例呈阴性。mNGS病原体检出率和检出种类显著高于传统检测方法。根据mNGS检测结果调整临床用药后,治疗效果良好。与传统病原体检测方法相比,mNGS对血液病合并感染具有较高的检出率,检出更全面,显著提高了患者的生存率及生活质量,对于临床用药具有指导意义。研究结果表明病原宏基因组二代测序可为该类感染提供病原学证据以辅助血液病合并感染的治疗。

血液病患者甲状腺激素的测定及其临床意义

为明确血液病时血清甲状腺激素的变化，应用放射免疫法测定初发期、缓解期的急性白血病、慢性粒细胞白血病、骨髓增生异常综合征、慢性再生障碍性贫血、原发性血小板减少性紫癜等５ 种血液病患者血清甲状腺激素浓度。结果表明：这五种疾病患者血清Ｔ３ 水平明显低于对照组（Ｐ＜ ０．０５），而Ｔ４、ＴＳＨ 无显著改变。急性白血病初发期Ｔ３ 水平与缓解期相比有显著性差异（Ｐ＜ ０．０５），而Ｔ４、ＴＳＨ无差异，缓解期各指标与对照组无差异。认为这种不伴ＴＳＨ 升高的低Ｔ３ 可能为甲状腺功能正常性病变综合征中的低Ｔ３ 综合征，有保护作用。Ｔ３ 水平与急性白血病分期有关，可作为分期及疗效判定的参考。

沙利度胺联合CHOP方案治疗弥漫大B细胞淋巴瘤的疗效及对患者血清VEGF水平的影响研究

目的探讨沙利度胺联合CHOP方案治疗弥漫大B细胞淋巴瘤的疗效及对患者血清VEGF水平的影响研究。方法选取2017年1月—2021年10月吉林省人民医院血液科收治的120例弥漫大B细胞淋巴瘤患者为研究对象,随机分为对照组和观察组,每组60例。对照组采取CHOP方案治疗,观察组采取沙利度胺联合CHOP方案治疗,对比两组患者的治疗效果以及血清VEGF水平变化情况。结果观察组患者的客观缓解率为93.33%,明显高于对照组的76.67%,差异有统计学意义(χ^(2)=6.535,P=0.010)。治疗前,两组患者的VEGF水平对比,差异无统计学意义(χ^(2)=0.146,P=0.883);治疗后,两组患者的VEGF水平均出现了降低,且观察组患者的VEGF水平更低,差异有统计学意义(χ^(2)=14.185,P<0.001)。观察组患者的不良反应发生率为30.00%,低于对照组的38.33%,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论沙利度胺联合CHOP方案治疗弥漫大B细胞淋巴瘤可获得更好的治疗有效率,且可有效降低血清VEGF水平,同时也具有更好的安全性。

骨髓增生异常综合征常见基因突变与预后的相关性

目的研究骨髓增生异常综合征(MDS)常见基因突变与预后的相关性。方法对2017年9月至2022年9月初诊的67例MDS患者的基因突变情况进行回顾性分析。结果67例MDS患者中发生基因突变58例(86.57%);基因突变率≥5%的基因有ASXL1、TET2、DNMT3A、U2AF1、SF3B1、RUNX1、TP53、STAG2、SETBP1、BCOR、JAK2;根据国际预后积分系统(IPSS-R)将确诊为MDS的患者分为较低危组〔23例(34.33%)〕和较高危组〔44例(65.67%)〕;其中较低危组中发生基因突变19例,未发生基因突变4例;较高危组中发生基因突变39例,未发生基因突变的有5例;发生基因突变的较低危险组总体中位生存期(OS,56个月)明显高于较高危险组总体中位OS(21个月;P<0.05);较高危险组中TET2、TP53基因突变组OS明显短于未突变组(P<0.05),较低危险组中STAG2基因突变组OS明显短于未突变组(P<0.05),U2AF1基因突变在较高危险组和较低危险组的OS均短于未突变组(均P<0.05);IPSS-R分组及基因突变情况为影响MDS预后的危险因素(P<0.05)。结论MDS患者基因突变率较高;发生基因突变的较高危组患者比较低危组患者预后差;TET2、TP53、STAG2、U2AF1基因突变提示预后较差。

血小板平均体积测定在多发性骨髓瘤中的临床意义

目的:探讨血小板平均体积(MPV)在多发性骨髓瘤患者中的临床意义。方法:以本院2008年3月至2015年3月收治的198例多发性骨髓瘤(MM)患者为研究对象,收集的临床资料包括患者治疗前的Ig分型、血红蛋白、血小板数目、肌酐、钙离子、白蛋白、β2微球蛋白、乳酸脱氢酶、骨髓浆细胞、MPV、合并症(如糖尿病、VTE病史和动脉事件如冠状动脉疾病和脑血管疾病等)和并发症(如血栓形成)。将所有患者分为低MPV组(≤8.50 fl)和高MPV组(>8.50 fl),比较两组一般资料,生化指标和预后情况。结果:ROC曲线分析MPV的最佳阈值显示,当MPV为8.50fl时对应的最高灵敏度和特异性分别为55.56%和80.00%,AUC为0.656(95%CI:0.515-0.797)。MM患者IgA分型、肌酐水平和IgH重排与MPV相关。低MPV患者IgA分型和IgH重排比例均高于高MPV患者,而肌酐水平>176.8μmol/L患者的比例低于高MPV患者(P<0.05)。两组患者年龄、性别、ECOG PS、合并症、ISS分期、血红蛋白、血小板数目、钙离子、白蛋白、β2微球蛋白、乳酸脱氢酶、骨髓浆细胞比例差异均无统计学意义。低MPV患者OS较高MPV患者短(P=0.039)。单因素分析显示,MPV、BM浆细胞比例和年龄>60岁与OS相关。多因素分析显示,低MPV和BM浆细胞比例与较短的OS相关(P<0.05)。结论:低MPV与多发性骨髓瘤患者预后不良存在相关性。

去整合蛋白及其抗肿瘤作用研究进展

去整合蛋白是一类分子量较小 ,由 49～ 84个氨基酸组成 ,富含半胱氨酸的生物活性因子。去整合蛋白二硫桥形成的环中含有精氨酸 -甘氨酸 -天冬氨酸 ( RGD)结构 ,能够竞争性地与整合素结合 ,从而抑制整合素参与的生理活动。去整合蛋白能够抗血小板聚集和肿瘤细胞转移 。

CD4^+ CD25^(high) CD127^(low/-)调节性T细胞在多发性骨髓瘤患者外周血的表达

目的探讨多发性骨髓瘤(MM)患者外周血CD4+CD25highCD127low/-调节性T(Tregs)细胞表达水平及临床意义。方法采用流式细胞术(FCM)检测30例MM患者和20例健康对照者外周静脉血CD4+CD25highCD127low/-Tregs细胞水平。结果 1 MM组CD4+CD25high CD127low/-Tregs细胞表达明显高于正常对照组(P<0.05)。2MM组不同国际分期系统(ISS)分期CD4+CD25highCD127low/-Treg细胞水平均高于正常对照组,随着疾病进展,Ⅲ期明显高于Ⅱ期(P<0.05)。3MM组化疗后外周血CD4+CD25highCD127low/-Tregs细胞水平较化疗前显著下降(P<0.05)。结论 MM患者外周血CD4+CD25highCD127low/-Treg细胞比例明显升高,可能是MM免疫逃逸的一个重要机制;进展期Tregs的变化为MM患者及时进行临床干预提供实验依据。

lncRNA MEG3和lncRNA GAS5在多发性骨髓瘤血清中的表达及其临床意义

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)母系表达基因3(maternally expressed gene 3,MEG3)和生长特异抑制物5(growth arrest-specific transcript 5,GAS5)在多发性骨髓瘤患者血清中的表达及其与预后的关系。方法选取本院2014年1月至2016年1月收治的87例多发性骨髓瘤患者为研究对象,同时选取54名健康志愿者为对照。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测lncRNA MEG3、lncRNA GAS5的表达水平,分析其与多发性骨髓瘤患者临床及预后的关系。结果多发性骨髓瘤患者血清中lncRNA MEG3和lncRNA GAS5的表达水平均低于对照组(5.92±0.87 vs 9.13±1.26,t=17.882,P<0.001;4.27±0.51 vs 8.26±1.04,t=30.417,P<0.001)。两者表达水平与患者年龄、D-S分期、恶性浆细胞数量、β2-MG水平和血红蛋白含量有关(P<0.05)。MEG3低表达组和GAS5低表达组的3年总生存率均低于MEG3高表达组和GAS5高表达组(32.56% vs 56.82%,χ2=5.617,P=0.018;32.43% vs 52.00%,χ2=5.389,P=0.020)。lncRNA MEG3、lncRNA GAS5低表达与多发性骨髓瘤患者不良预后有关(HR=3.503,95%CI:1.517~8.091;HR=3.319,95%CI:1.438~7.661)。结论 lncRNA MEG3和lncRNA GAS5在多发性骨髓瘤患者血清中呈低表达,且与患者不良预后有关。

淋巴细胞亚群和调节性T细胞在多发性骨髓瘤患者外周血的表达分析及与预后的关系

目的通过检测多发性骨髓瘤(MM)患者外周血T、B淋巴细胞及调节性T细胞(Tregs)水平,评估MM患者免疫功能状态及与预后的关系。方法测定30例MM患者和20例健康志愿者外周血T、B淋巴细胞及Tregs的百分比,分析MM患者血清β2一微球蛋白(β2-MG)、白蛋白(ALB)、血肌酐(CRE)、血红蛋白(HGB)水平与Tregs的相关性。结果 (1)与对照组比较,MM组患者外周血CD3、CD4比例无统计学意义;NK细胞的比例增高,CD4+CD25highCD127low/-T细胞/CD4+T细胞(Tregs)增高,CD19细胞的比例下降,CD8细胞的比例升高,CD4/CD8比值下降,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)MM患者外周血Tregs的比例与β2一MG水平成正相关;与血清白蛋白、血红蛋白、血清肌酐水平无明显相关性。结论 MM患者外周血淋巴细胞亚群的异常、CD4+CD25high CD127low/-Treg细胞的表达增高,可能是MM患者免疫逃逸和免疫缺陷的主要原因,对判断MM预后具有一定的参考价值。

含新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶基因重组腺病素的构建及鉴定

目的：构建表达新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶（Hemagglutinin—neuramidinase，FIN）基因的重组腺病毒，为进一步研究HN基因对消化道肿瘤的抑制作用及分子机制建立基础。方法：用BamHI和XbaⅠ双酶切质粒pVHN，将获得的HN基因片段连接入穿梭质粒pacAd5 CMV K-N pA，构建含HN基因的穿梭质粒pacAd5-HN。利用PacI单酶切对pacAd5-HN和腺病毒基因组质粒（pAd5）进行线性化处理后应用脂质体介导法共转染AAV-293细胞，分别利用蚀斑纯化和RT-PCR、Western blot等方法对重组病毒进行筛选和鉴定，并测定所获得重组病毒的滴度。结果：所构建重组病毒可有效表达HN基因，表达产物分子量约为63kD，重组病毒滴度为10^8～10610PFU／ml。结论：成功构建含HN基因的重组腺病毒，所获得重组病毒的滴度可以满足体内外实验要求。

长白山乌苏里蝮蛇降纤酶层析分离和特性研究

采用简洁、高效、高产、高速及制药企业容易实施的分步洗脱制备降纤酶工艺，生产的降纤酶符合部颁标准，并适合制药企业连续大规模生产。

人体外周血CD3^+CD4^-CD8^-双阴性T细胞体外扩增的实验研究

目的探讨人体外周血CD3^+CD4^-CD8^-双阴性T细胞(DNT细胞)在体外进行分离和扩增的方法。方法取健康的成人外周血20ml,应用Rosettesep抗体吸附法去除CD4^+T细胞和CD8^+T细胞;再将DNT细胞放入anti-CD3mAb包被的培养板中,并加入rhIL-2、rhIL-4,共同培养,第10天和第14天计数细胞扩增倍数及记录扩增曲线;利用Easysep免疫磁珠法纯化,采用流式细胞仪检测其纯度。结果经分选、纯化后的DNT细胞,纯度可达94%以上;体外培养第10天和第14天,DNT细胞扩增倍数分别为53倍和41倍。结论通过Rosettesep抗体吸附法及Easysep免疫磁珠法分离及纯化DNT细胞是可行的,可获得大量高纯度的DNT细胞。

中国长白山乌苏里蝮蛇金属蛋白酶/解整合蛋白Ussurin基因克隆和序列分析(英文)

采用Clontech链转换建库试剂盒 ,建立了中国长白山乌苏里蝮蛇毒腺cDNA文库 ,从中克隆了金属蛋白酶 解整合蛋白Ussurin ,并进行了序列分析。结果显示 ,Ussurin开框读码序列由 14 34bp组成 ,编码 4 78个氨基酸。由核苷酸顺序推导的氨基酸序列可以看出 ,Ussurin最初的翻译产物是酶原前体 ;依次含有 18氨基酸组成的信号肽 ,171氨基酸组成的酶原区和由 2 89氨基酸组成的Ussurin(2 0 0氨基酸组成的金属蛋白酶结构域、16氨基酸组成的间隔区和 73氨基酸组成的解整合蛋白结构域 )。Ussurin的金属蛋白酶结构域含有 3对二硫键 ;解整合蛋白结构域含有 6对二硫键和特征性RGD(精氨酸 甘氨酸 天冬氨酸 )结构。其基因序列和结构域组成与GenBank中蛇毒金属蛋白酶 解整合蛋白呈现高度同源性属于P Ⅱ。氨基酸序列blast比对发现 ,酶原区和解整链蛋白结构域呈现极高的同源性 ,而金属蛋白酶结构域却出现了极高的变异 ,推测这些变异结构区是为了适应不同的底物。

含Apoptin基因重组腺病毒的构建及鉴定

目的:构建携凋亡素(Apoptin)基因重组腺病毒,为进一步研究Apoptin基因抗肿瘤作用分子机制建立基础.方法:利用BamHⅠ和SpeⅠ双酶切质粒pVAX1-Apoptin,获得Apoptin片段并连接入pacAd5 CMV K-N pA,构建含Apoptin基因的穿梭质粒pacAd5-Apoptin.利用PacⅠ单酶切对pacAd5-Apoptin和腺病毒基因组质粒(pAd5)进行线性化处理后应用脂质体介导法共转染AAV-293细胞,分别利用蚀斑纯化和RT-PCR、Western blot等方法对重组病毒进行筛选和鉴定,并测定所获得重组病毒的滴度.结果:所构建重组腺病毒中的Apoptin基因得到了正确转录,表达产物的相对分子质量约为13kDa,与CVA阳性对照一致;所获得重组腺病毒可有效表达Apoptin蛋白,该蛋白与CAV阳性血清具有反应原性,重组病毒滴度为1011PFU/L.结论:成功构建含Apoptin基因的重组腺病毒,所获得重组病毒的滴度可以满足体内外实验要求.

p16基因甲基化与急性淋巴细胞白血病的关系

目的 :探讨 p16基因甲基化在急性淋巴细胞白血病 (AL L)发生机制中的作用。方法 :采用限制性内切酶酶切结合多聚酶链反应方法检测 82例 AL L 患者白血病细胞 p16基因部分启动子和外显子 1Cp G岛甲基化的情况。结果 :31例 AL L 患者存在 p16基因的甲基化 ,1例 p16基因纯合缺失 ;p16存在甲基化与纯合缺失的患者初次化疗完全缓解率和平均生存时间低于 p16基因正常表达者。结论 :p16基因甲基化在 AL L 发生机制中有一定的作用 ,可作为评估 AL L 预后的一个指标。