芪蛭降糖胶囊对糖尿病肾病大鼠肾组织BMP-7及TGF-β_1/smads信号传导通路的影响

目的：观察芪蛭降糖胶囊对糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）大鼠肾组织骨形成蛋白-7（bone morpho-genetic protein-7,BMP-7）及转化生长因子（transforming growth factor,TGF）-β1/Smads信号传导通路的影响。方法：48只清洁级雄性Wistar大鼠按体重随机抽取40只,采用切除右肾加腹腔注射链脲菌素（ streptozotocin,STZ）的方法制备DN模型,另外8只大鼠行右肾假切术。造模成功后按尿微量白蛋白（ microAlbumin,mAlb）高低,两头随机抽取分为模型组、缬沙坦对照组、芪蛭降糖胶囊低剂量组、芪蛭降糖胶囊高剂量组。成模2 d起各组给予相应浓度和剂量的药物,给药12周时观察DN大鼠尿mAlb、α1微球蛋白（α1-MG）和血清肌酐（ Scr）、尿素氮（ BUN）。然后,处死所有动物,肾组织行HE染色、PAS染色和Masson染色,观察肾组织病理变化并半定量计算肾小管损伤指数（tubulointerstitial injury index,TII）,免疫组化法检测BMP-7、TGF-β1、Smad2、Smad7在肾组织的表达。结果：给药12周后,模型组大鼠尿 mAlb、α1-MG较假手术组显著增多（ P 〈0.01）,3个治疗组DN大鼠尿mAlb、α1-MG较模型组明显减少（P〈0.01）,2个中药治疗组的上述4项指标亦较对照组降低（P〈0.05-0.01）,且呈剂量依赖性。模型组大鼠Scr、BUN亦较假手术组显著升高（P〈0.01）,对照组与模型组相比无明显变化（P〉0.05）,但2个中药治疗组较模型组明显降低（P〈0.05-0.01）。 HE染色显示,3个治疗组大鼠肾组织病理损害明显减轻,2个中药治疗组大鼠肾组织病理改善比对照组更明显；PAS染色进行TII评分发现,3个治疗组大鼠TII显著低于模型组（P〈0.01）,2个中药治疗组TII明显低于对照组（P〈0.05-0.01）；Masson染色观察发现,3个实验组大鼠肾小管间质病变明显轻于模型组,2个中药治疗组大鼠肾小管间质病变轻于对照组；免疫组化法染色并对其灰度值测定发现,3个治疗组大鼠TGF-β1、Smad2在肾组织的表达低于模型组（P〈0.01）,2个中药治疗组大鼠TGF-β1、Smad2在肾组织的表达低于对照组（P〈0.05-0.01）；3个治疗组大鼠BMP-7、Smad7在肾脏组织的表达高于模型组（P〈0.01）,2个中药治疗组大鼠BMP-7、Smad7在肾组织的表达高于对照组（P〈0.05-0.01）。结论：芪蛭降糖胶囊可能通过干预BMP-7/TGF-β1/Smads信号转导通路抑制了TGF-β1信号的细胞内转导,而对DN肾间质纤维化起到治疗作用。

芪蛭降糖胶囊对糖尿病肾病大鼠肾实质小动脉内膜/中膜厚度比与炎性因子的影响

目的:观察芪蛭降糖胶囊对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾实质小动脉内膜/中膜厚度比与炎性因子的影响。方法:48只清洁级雄性Wistar大鼠按体重随机抽取40只,采用切除右肾加腹腔注射链脲菌素(streptozotocin,STZ)的方法制备DN模型,另外8只大鼠行右肾假切术。造模成功后按血糖高低,两头随机抽取分为模型组、缬沙坦对照组、芪蛭降糖胶囊低剂量组、芪蛭降糖胶囊高剂量组。成模2 d起各组给予相应浓度和剂量的药物,分别于4、8、12周观察DN尿蛋白定量(TP)、尿视黄醇结合蛋白(RBP)、尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG酶)和血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、β2微球蛋白(β2-MG)的变化。12周后,处死所有动物,肾组织行HE染色,光镜下观察肾组织病变,测量肾实质小动脉内膜/中膜厚度比;电镜观察肾小球毛细血管超微结构;免疫组化检测肾组织中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和肾小动脉CD31的表达;原位杂交法检测MCP-1 mRNA在肾组织中的表达;免疫荧光检测肾小动脉α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达。结果:在各个时间点,芪蛭降糖胶囊能明显减少DN大鼠TP、RBP、NAG酶(P<0.01),改善肾功能。HE染色显示,芪蛭降糖胶囊能减轻肾组织及其血管病理损害,比较各组大鼠肾小动脉内膜/中膜厚度比表明,模型组显著高于假手术组(P<0.01),对照组和低剂量组明显低于模型组(P<0.05),高剂量组显著低于对照组(P<0.01)。电镜观察显示,芪蛭降糖胶囊能减轻肾小球基底膜增厚和系膜增生,保护内皮细胞之间窗孔形态,减轻足细胞足突融合。免疫组化检查显示芪蛭降糖胶囊能减少肾组织中MCP-1表达和下调肾小动脉CD31的表达(P<0.01);原位杂交法检测显示芪蛭降糖胶囊能下调MCP-1mRNA在肾组织中的表达;免疫荧光检测显示芪蛭降糖胶囊能下调肾小动脉α-SMA的表达。结论:芪蛭降糖胶囊可以改善肾组织和血管结构病理损害,而此作用可能部分是由下调MCP-1、MCP-1 mRNA在肾组织的表达阻断炎性反应而实现的。

芪蛭降糖胶囊对糖尿病肾病大鼠肾组织血管内皮细胞生长因子及细胞外基质的影响

目的：观察芪蛭降糖胶囊对糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）大鼠肾组织血管内皮细胞生长因子（vascu-lar endothelial growth factor，VEGF）及细胞外基质（extracellular matrix，ECM）的影响。方法：清洁级6-7周龄雄性 Wister 大鼠48只，按体重随机取40只，采用切除右肾加腹腔注射链脲佐菌素（strephozotocin，STZ）的方法制备 DN 模型。模型成功后按照血糖高低排序，两头抽取随机分为模型组、缬沙坦对照组（简称对照组）、芪蛭降糖胶囊低剂量组、芪蛭降糖胶囊高剂量组，每组10只大鼠。另取8只正常大鼠行右肾假切除术，腹腔注射等量柠檬酸缓冲液作为假手术组。成模2 d 起各组给予相应浓度和剂量的药物灌胃，分别于4周、8周观察血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、血清胱抑素- C（Cystatin - C）、β2-微球蛋白（β2- MG）、24 h 尿蛋白定量（24 h TP）、尿微量白蛋白（mAlb）、尿微量白蛋白/尿肌酐（UmAlb/ Ucr）。8周后处死动物，肾组织行 HE 染色，光镜下观察肾组织病变，电镜下观察肾组织足细胞的变化。免疫组化检测 VEGF、基质金属蛋白酶9（MMP -9）、基质金属蛋白酶抑制因子-1（TIMP -1）、纤维黏连蛋白（FN）、Ⅳ型胶原蛋白（ColⅣ）的表达。结果：在各个时间点，模型组大鼠血 Scr、BUN、Cystatin - C、β2- MG，尿24 h TP、mAlb、UmAlb/ Ucr 均明显高于假手术组（P ﹤0．05），对照组明显低于模型组（P ﹤0．05），中药组显著低于对照组和模型组，且呈剂量依赖关系（P ﹤0．05-0．01）。与模型组和对照组相比，HE 染色显示芪蛭降糖胶囊能减轻 DN 大鼠肾组织及其血管病理损害。电镜观察显示，芪蛭降糖胶囊能明显减轻 DN 大鼠肾组织基底膜增厚、内皮细胞及系膜增生，减轻足细胞足突融合，且呈剂量依赖关系。免疫组化显示 VEGF、TIMP -1、FN、ColⅣ在模型组的表达较假手术组有明显增加（P ﹤0．05），对照组和低剂量组明显低于模型组（P ﹤0．05），高剂量组显著低于对照组（ P ﹤0．01）；MMP -9在假手术组表达最明显，模型组显著低于假手术组（P ﹤0．01），对照组和低剂量组高于模型组（P ﹤0．05），高剂量组显著高于对照组和低剂量组（P ﹤0．05~0．01）。结论：芪蛭降糖胶囊可以明显抑制肾组织中 VEGF 的过度合成和沉积，能够有效减轻 ECM 在肾组织中的积聚，从而改善 DN 大鼠肾组织和血管结构病理损害。

芪蛭降糖胶囊治疗糖尿病肾病Ⅲ期的临床研究

目的观察芪蛭降糖胶囊治疗糖尿病肾病（DN）Ⅲ期的临床疗效，并探讨其作用机制。方法将符合DN Ⅲ期诊断标准的患者按照随机数字表法分为试验组和对照组。两组患者先给予2周的洗脱期治疗，然后给予西医基础治疗；同时对照组给予缬沙坦80 mg、每日1次，试验组给予芪蛭降糖胶囊每次2.5 g、每日3次。于治疗前和治疗后4、8、12周观察尿微量白蛋白（mALB）、mALB/肌酐（UCr）、β2-微球蛋白（β2-MG）、α1-微球蛋白（α1-MG），同时测定血中内皮素-1（ET-1）、一氧化氮（NO）、血栓素B2（TXB2）、6-酮-前列腺素F1α（6-keto-PGF1α）、血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）、血清胱抑素-C（Cys-C）、视黄醇结合蛋白（RBP）、β2-MG 水平变化。结果最终纳入有效病例试验组96例、对照组95例。两组治疗前尿mALB、mALB/UCr、β2-MG、α1-MG 及血ET-1、NO、TXB2、6-keto-PGF1α比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）；随治疗时间延长，两组治疗后mALB、mALB/UCr、β2-MG、α1-MG 及ET-1、TXB2均降低，NO、6-keto-PGF1α均升高，且以试验组变化更显著，治疗12周时两组mALB、mALB/UCr、β2-MG、α1-MG 及TXB2、6-keto-PGF1α比较差异均有统计学意义〔 mALB（mg/L）：36.6±9.2比78.6±16.5，mALB/UCr（mg/mmol）：3.90±1.97比9.70±2.90，β2-MG （mg/L）：0.25±0.10比0.40±0.12，α1-MG（mg/L）：8.40±2.26比12.50±3.21，TXB2（ng/L）：75.8±18.7比 94.7±21.7，6-keto-PGF1α（ng/L）：73.4±15.2比65.2±11.5，P＜0.05或P＜0.01〕，而ET-1、NO 比较差异均无统计学意义〔 ET-1（ng/L）：57.6±6.9比59.1±6.2，NO（μmol/L）：68.9±11.6比65.4±10.7，均P＞0.05〕。两组 SCr、BUN 治疗后各时间点与治疗前比较，两组间相同时间点比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）；对照组治疗后Cys-C、RBP、β2-MG 均较治疗前有降低趋势，但差异均无统计学意义（均P＞0.05）；试验组治疗后12周 Cys-C、RBP、β2-MG 均明显低于治疗前〔 Cys-C（mg/L）：0.72±0.07比0.89±0.12，RBP（mg/L）：53.0±14.2比66.1±16.5，β2-MG（mg/L）：1.86±0.71比2.79±0.82，均P＜0.05〕。结论芪蛭降糖胶囊能明显降低DN Ⅲ期患者的尿mALB 及mALB/UCr，稳定肾功能，疗效优于缬沙坦，其作用机制与降低ET-1、升高NO，维持血栓素A2/前列环素（TXA2/PGI2）动态平衡、保护血管内皮细胞有关。

芪蛭降糖胶囊对糖尿病肾病大鼠肾脏结构和功能的影响

目的观察芪蛭降糖胶囊对糖尿病肾病（DN）大鼠肾脏结构和功能的影响。方法 48只清洁级雄性Wistar大鼠按体重随机抽取40只,采用切除右肾加腹腔注射链脲佐菌素（STZ）的方法制备DN模型,造模成功后按24h TP高低,两头随机抽取分为模型组、缬沙坦对照组、芪蛭降糖胶囊低剂量组、芪蛭降糖胶囊高剂量组。另取8只大鼠行右肾假切术,腹腔注射等量柠檬酸缓冲液作为假手术组。成模2d起各组给予相应浓度和剂量的药物,给药12周时观察DN大鼠24h尿蛋白定量（24h UPQ）、α1微球蛋白（α1-MG）、β2-微球蛋白（β2-MG）和血糖（BS）、血清肌酐（Scr）、血清胱抑素-C（Cystatin-C）的变化;测定血浆血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、内皮素-1（ET-1）、一氧化氮（NO）;留取标本后处死所有动物,肾组织行HE染色、PAS染色、免疫组化染色,光镜下观察肾组织病变,PAS染色计算肾小球硬化指数（GSI）、肾间质纤维化指数（IF）,电镜观察肾小球毛细血管超微结构;免疫组化检测肾组织转化生长因子（TGF）-β1的表达。结果 12周后,模型组大鼠24h UPQ、α1-MG、β2-MG较假手术组显著增多（P〈0.01）,3个治疗组DN大鼠的24h UPQ、α1-MG、β2-MG较模型组明显减少（P〈0.01）,2个中药治疗组较对照组也明显减少（P〈0.05～0.01）,且呈剂量依赖性;模型组大鼠BS、Scr、Cystatin-C亦较假手术组显著升高（P〈0.01）,2个中药治疗组较模型组也明显降低（P〈0.05～0.01）,对照组BS与模型组相比无明显变化（P〉0.05）。3个治疗组血浆AngⅡ、ET-1较模型组显著降低、NO显著升高（P〈0.05～0.01）。HE染色显示,2个中药治疗组大鼠肾组织病理损害明显减轻,PAS染色显示2个中药治疗组大鼠肾组织GSI、IF显著减轻（P〈0.01）。电镜观察显示,2个中药治疗组DN大鼠肾小球基底膜增厚和系膜增生、足细胞足突融合减轻。免疫组化检查显示2个中药治疗组DN大鼠肾组织TGF-β1的表达显著下调（P〈0.01）。结论芪蛭降糖胶囊通过抑制AngⅡ的分泌,减轻血管内皮损伤,下调TGF-β1在肾组织的表达,减轻肾小球硬化和肾间质纤维化,改善肾组织病理损害,从而对DN起到治疗作用。

芪蛭降糖胶囊治疗糖尿病肾脏疾病3b期大量蛋白尿的多中心、随机对照研究

目的观察芪蛭降糖胶囊治疗糖尿病肾脏疾病(diabetic kidney disease,DKD)3b期大量蛋白尿的疗效和安全性。方法将符合DKD 3b期诊断标准的患者采用随机数字表法分为试验组和对照组,每组84例。两组患者先进行2周的洗脱期治疗,后给予西医基础治疗,对照组予缬沙坦胶囊160 mg,每日1次,试验组给予芪蛭降糖胶囊,每次5粒,每日3次。以随访点为基线,随访1、3、6个月,观察指标为血压、24 h尿蛋白定量(24 h uPQ)、血浆白蛋白(ALB)、血清肌酐(SCr),并计算肾小球滤过率(eGFR)。同时记录两组患者低血糖反应、凝血功能异常、胃肠道反应、过敏反应、高钾血症、肌酐倍增及总体不良事件的发生率。结果最终纳入有效病例试验组81例,对照组80例。与治疗前比较,对照组收缩压、舒张压均在治疗后1个月明显下降(P<0.05),6个月时下降更显著(P<0.01),对照组收缩压在随访1、3、6个月,舒张压在第6个月时均低于同期试验组水平(P<0.05)。随访第1、3、6个月,试验组24 h UPQ均显著低于治疗前(P<0.01),同时也低于同期对照组(P<0.05),对照组随访1、3、6个月24 h UPQ与治疗前比较,差异无统计学意义(P>0.05)。试验组ALB呈上升趋势,在随访的第6个月明显高于本组治疗前(P<0.05),也高于对照组同期水平(P<0.05),对照组ALB水平无明显变化。两组患者SCr均呈升高趋势,在随访的第3、6个月,试验组SCr均高于治疗前(P<0.05),而对照组SCr升高的幅度高于试验组,3次随访均明显高于治疗前(P<0.05)。两组eGFR呈下降趋势,对照组下降幅度高于试验组(P<0.05)。试验组随访1、3、6个月肾功能进展例数分别为0例、8例(9.55%)、18例(21.4%);对照组分别为7例(8.3%)、18例(21.4%)、34例(40.5%),随访第3、6个月时,两组肾功能进展例数比较,差异有统计学意义(P<0.05)。两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论芪蛭降糖胶囊能有效减少DKD 3b期患者蛋白尿,延缓肾功能进展。