吉林省西部盐碱地状况的调查与分析

吉林省西部地区的自然生态环境十分脆弱,盐碱地面积逐年加大,从1959年至今盐碱地面积增加了30万hm2。在盐碱地治理中存在过度放牧产生的草原退化;为获得高额补贴,天然羊草草原毁种苜蓿;盲目开垦盐碱地种植水稻等一系列问题。

断根施肥对吉林西部退化羊草草原改良效果的研究

本文以吉林省西部的乾安县渭字村的野生羊草草原为研究对象,进行深松切根加施肥的一体化试验。结果表明:采用深松切根加施肥的一体化技术,可以显著地提高羊草的产量与品质,土壤理化性质也得到了有效的改善。本试验的最佳处理是处理SRC2O2(即无机2+有机2),产草量达到4. 23t/hm^2、粗蛋白含量为15%、粗纤维含量为31. 3%、土壤有机质含量增加93. 9%、土壤pH降低0. 5。

北五味子药材多农药残留量检测分析

本研究测定东北三省不同产区北五味子(Schisandrae chinensis fructus, SCF)药材中多种农药含量,对不同产区北五味子药材的农药残留量情况进行分析。采集不同产区北五味子药材共310批次,采用气相色谱-串联质谱法对药材中980种农药进行分析筛选,并对部分检出农药的残留量进行定量分析。结果显示,从310批北五味子样品中共检测出4种农药,分别为异丙威、毒死蜱、腐霉利和联苯菊酯。其中80批样品中同时含有2种农药残留,180批样品只含有1种农药残留。异丙威的含量范围为0.49~0.62mg/kg;毒死蜱的含量范围为0.02~0.22 mg/kg;腐霉利的含量范围为0.005~1.86 mg/kg;联苯菊酯的含量范围为0.000 2~0.07 mg/kg。310批北五味子药材中,低毒性的腐霉利是使用最为普遍的农药,其次是毒死蜱。

超声辅助酶法提取-液相色谱-原子荧光光谱法测定富硒黑木耳中硒形态

建立了富硒黑木耳中硒代胱氨酸、硒代半胱氨酸、亚硒酸、硒蛋氨酸、硒酸5种硒形态的液相色谱-原子荧光光谱分析方法。通过链酶蛋白酶E酶解,结合超声提取后,选取Hamilton PRP-X100离子交换色谱柱(250 mm×4.1 mm,10μm),40 mmol/L的磷酸氢二铵为流动相,在16 min内,5种硒形态完全达到基线分离。5种硒形态在线性范围内相关系数R为0.9990~0.9999;加标回收率为76.1%~108%;检出限分别为硒代胱氨酸0.35μg/L、甲基-硒代半胱氨酸0.46μg/L、亚硒酸0.26μg/L、硒代蛋氨酸0.64μg/L、硒酸3.06μg/L;方法应用于富硒黑木耳中硒形态的分析,精密度高、重现性好、方法稳定、准确可靠,是测定富硒黑木耳中硒形态含量的有效方法。

芩枳丸多指标成分含量测定研究

目的:采用HPLC测定芩枳丸中橙皮苷、黄芩苷、黄芩素、大黄素、大黄酚的含量,为进一步提高其质量控制提供依据。方法:采用Agilent C18(4.6 mm×250 mm,5"m)色谱柱,以甲醇-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长为260 nm。结果:橙皮苷、黄芩苷、黄芩素、大黄素、大黄酚分别在0.120~1.200、0.196~1.960、0.016~0.160、0.024~0.240、0.050~0.500μg范围内与峰面积呈良好线性关系(r>0.999 0);平均加样回收率(n=6)分别为98.56%、98.20%、98.54%、98.27%、99.64%。结论:建立了同时测定芩枳丸中5种成分的含量测定的方法,方法重复性好,为产品质量控制和综合评价提供依据。

高效液相色谱法测定保健食品五味子猴菇口服液中葛根素的含量

目的采用高效液相色谱法测定保健食品五味子猴菇口服液中葛根素的含量,为进一步提高其质量控制提供依据。方法采用Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18(4.6mm×250mm,5µm)色谱柱,以乙腈-0.05%磷酸溶液为流动相,检测波长为250nm。结果葛根素在8.48106~42.4053μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系(r>0.9990);平均加样回收率(n=6)分别为101.47%。结论建立了五味子猴菇口服液中葛根素的含量测定的方法,方法重复性良好,为该保健食品的产品质量控制提供依据。

洋参雪橘片指纹图谱的建立及多指标成分含量测定

目的:建立保健食品洋参雪橘片的HPLC指纹图谱,并测定洋参雪橘片中芍药苷、橙皮苷、羟基积雪草苷、积雪草苷的含量。方法:采用高效液相色谱法,Agilent ZORBAX Eclipse Plus C 18(4.6 mm×250 mm,5(m)色谱柱,流动相:乙腈(B)-0.05%磷酸溶液(A),梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为230 nm,进样量为10μL,柱温为25℃;建立指纹图谱,运用药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2.0版)”对10批洋参雪橘片进行相似度评价,对芍药苷、橙皮苷、羟基积雪草苷、积雪草苷色谱峰进行指认,同时测定四种有效成分的含量。结果:10批洋参雪橘片中标定12个共有峰,相似度均在0.90以上。芍药苷、橙皮苷、羟基积雪草苷、积雪草苷分别在1.093802~10.93802μg、0.2199132~2.199132μg、0.461538~4.61538μg、0.195168~1.95168μg内,线性关系良好,平均回收率分别为99.40%、98.75%、98.97%、98.58%,RSD为1.15%、1.13%、1.27%、1.49%(n=6)。结论:建立了洋参雪橘片HPLC指纹图谱方法,并同时测定洋参雪橘片中4种成分的含量测定,方法重复性好,能更好的进行产品质量评价和质量控制。

紫金颗粒中黄芩苷和绿原酸的含量测定研究

目的测定紫金颗粒中黄芩苷和绿原酸的含量。方法采用高效液相色谱法对紫金颗粒中的黄芩苷、绿原酸进行含量测定。结果黄芩苷在0.2384～1.4304μg范围内呈良好的线性关系,r=0.9999;平均回收率为98.39%,RSD为0.80%(n=6)。绿原酸在0.0272～0.6800μg范围内呈良好的线性关系,r=0.9999;平均回收率为98.86%,RSD为0.63%(n=6)。结论所建立的方法可靠、准确、专属性强,可作为紫金颗粒的质量控制方法。

返魂草茎、叶中有效成分含量测定及指纹图谱

目的:针对返魂草茎、叶中有效成分含量及其指纹图谱进行研究,比较返魂草茎、叶中成分种类、含量及指纹图谱差异性。方法:采用HPLC法对8个不同产地返魂草茎、叶中绿原酸、金丝桃苷成分进行含量测定及比对;采用HPLC法对8个不同产地返魂草药材分别建立返魂草茎、叶指纹图谱,并用相似度评价系统软件进行数据比对分析。结果:返魂草药材茎中绿原酸含量为0.03%~0.26%,金丝桃苷含量为0.01%~0.17%;叶中绿原酸含量为0.04%~1.28%,金丝桃苷含量为0.04%~1.11%。返魂草药材茎的HPLC指纹图谱相似度为0.269~0.970,叶的HPLC指纹图谱相似度为0.700~0.947。结论:返魂草药材茎、叶中有效成分含量存在显著差异,返魂草叶中有效成分含量明显高于茎中含量。由于药材茎与叶中的有效成分在种类和含量上存在很大的差异,导致指纹图谱的相似度的浮动较大。研究结果提示,为了保证药品质量,返魂草药材在采收、贮存、投料过程中确保避免叶的腐烂、损失以投料的比例,以保证药品质量的稳定性与均一性。

高效液相色谱-高分辨质谱法快速筛查动物源性药食同源产品中32种抗生素兽药残留

目的建立高效液相色谱-高分辨质谱法(high performance liquid chromatography-high resolution mass spectrometry,HPLC-HRMS)对鹿茸、鹿胎膏和蜂蜜中β-内酰胺类、林可酰胺类、大环内脂类、硝基咪唑类、喹诺酮类、磺胺类、氯霉素类共32种抗生素残留的快速前处理和筛查方法。方法动物源性产品采用乙腈超声提取,上清液经PRi ME HLB固相萃取柱(无需活化和平衡)净化,氮吹至0.5 mL以内,用10%甲醇溶解定容后,经C18色谱柱立分离,在电喷雾正离子模式下,根据32种抗生素药物的分子离子峰、特征离子信息建立HPLC-HRMS数据库,采用Trace Finder 2.5软件系统进行定性筛查和分析。结果本方法能够在缺乏标准品的前提下,迅速且准确地识别动物源性药食同源特色产品(鹿茸、鹿胎膏和蜂蜜)中的32种抗生素残留,检出限为0.01 mg/kg,准确率为100%。结论本方法简单、快速、准确,适用于大批量动物源性药食同源产品中抗生素类兽药残留的快速筛查,可为动物源性药食同源特色产品抗生素类兽药的监管提供可靠的技术支持。

救必应酸酯类衍生物的合成、鉴定及其体外抗肿瘤活性研究

目的:合成并鉴定救必应酸酯类衍生物,并评价其体外抗肿瘤活性。方法:以救必应酸为原料,通过28位酯化、3β位和23位羟基与酸酐反应合成救必应酸酯类衍生物;采用高分辨质谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱及理化性质对合成的救必应酸酯类衍生物进行结构鉴定。采用MTT法评价紫杉醇(阳性对照)、救必应酸及救必应酸酯类衍生物对人宫颈癌细胞He La、人恶性黑色素瘤细胞A375、人肺腺癌细胞SPC-A1、人肝癌细胞HepG2的体外抗肿瘤活性[以半数抑制浓度(IC50)为指标]。结果:共合成了6个救必应酸酯类衍生物,分别为救必应酸甲酯(化合物1)、3,23-O-双(乙酰基)救必应酸甲酯(化合物2)、3,23-O-双(丙酰基)救必应酸甲酯(化合物3)、3,23-O-双(丁酰基)救必应酸甲酯(化合物4)、3,23-O-双(邻苯二甲酰基)救必应酸甲酯(化合物5)及3,23-O-双(丁二酰基)救必应酸甲酯(化合物6)。与紫杉醇比较,化合物5和化合物6对HeLa、A375、HepG2、SPC-A1细胞的抗肿瘤活性与其相似,差异无统计学意义(P>0.05),救必应酸及其他化合物的IC50显著减小(P<0.05)。结论:本研究合成了6个救必应酸酯类衍生物,其中化合物5、6具有显著的体外抗肿瘤活性,可为后续研究提供参考。

返魂草颗粒抗氧化部位分析及活性研究

目的分析返魂草颗粒中抗氧化部位,考察返魂草提取物抗氧化活力,探讨返魂草提取物在抗氧化方面的作用。方法通过高温处理建立人支气管细胞16HBE的氧化应激模型,测定返魂草提取物在该模型中对自由基清除能力和对氧化应激细胞模型中的胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平、总抗氧化能力和抗氧化酶活力的影响。结果返魂草提取物醇洗部分浓度为50 μg/mL时对DPPH自由基清除率达到68.91%,并且从该部分鉴别出的9种酚酸类成分表现出较强的DPPH清除效果;返魂草提取物醇洗部分显著降低高温诱导的人支气管细胞16HBE胞内ROS水平,并以剂量依赖性方式增加T-AOC、GSH水平和SOD、CAT等抗氧化酶活力。结论返魂草提取物醇洗部分主要成分为酚酸类物质,通过清除自由基、提升抗氧化酶活力和抗氧化物质水平有效降低细胞内氧化应激水平。

人参糖肽的结构及其对Aβ_(25-35)处理PC12细胞的抗凋亡作用

目的:研究人参糖肽的结构,探讨其对β淀粉样蛋白25-35(Aβ_(25-35))处理PC12细胞凋亡的保护作用,为开发人参抗阿尔茨海默病(AD)药物奠定理论基础。方法:采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)与Q Exactive Orbitrap质谱联用分析人参糖肽结构。将鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞分为6组,加入含不同浓度(0、6.25、12.50、25.00、50.00和100.00μmol·L^(-1))Aβ_(25-35)的培养基,采用细胞计数试剂盒8 (CCK-8)法测定PC12细胞的存活率。将PC12细胞分为空白对照组、模型组和给药组,模型组加入含有50.00μmol·L^(-1)Aβ_(25-35)的培养基,给药组加入不同浓度(0.03、0.10、0.30和1.00g·L^(-1))人参糖肽和含有50.00μmol·L^(-1)Aβ_(25-35)的培养基。采用CCK-8法测定PC12细胞的存活率,采用AnnexinⅤ-FITC/PI法测定人参糖肽和Aβ_(25-35)处理后PC12细胞的凋亡率。将PC12细胞分为空白对照组、模型组和人参糖肽给药组,模型组加入含有50.00μmol·L^(-1) Aβ_(25-35)的培养基,给药组加入不同浓度(0.10和0.30g·L^(-1))人参糖肽和含有50.00μmol·L^(-1) Aβ_(25-35)的培养基,采用流式细胞术测定不同细胞周期PC12细胞的百分比。结果:人参糖肽结构分析得到肽链为NLSHYHSGSS、糖基为N1-HexNAc,肽链为SGSSSSSSSEDDGMGR、糖基为S6-HexNAc等20多个人参糖肽结构。当Aβ_(25-35)浓度为50μmol·L^(-1)时,PC12细胞存活率为(55.45±2.34)%;与空白对照组比较,不同浓度Aβ_(25-35)处理组PC12细胞存活率明显降低(P<0.01)。与空白对照组比较,模型组PC12细胞存活率明显降低(P<0.01);与模型组比较,给药组细胞存活率明显升高(P<0.05)。与空白对照组比较,模型组PC12细胞凋亡率升高(P<0.01);与模型组比较,给药组细胞凋亡率降低(P<0.05)。与空白对照组比较,模型组S期PC12细胞百分比升高(P<0.05);与模型组比较,给药组S期PC12细胞百分比降低(P<0.05)。结论:利用质谱法分析得到人参糖肽结构。人参糖肽可有效抑制Aβ_(25-35)处理PC12细胞的凋亡,具有神经细胞保护作用,其抗凋亡活性作用可能与抑制细胞S期阻滞有关。

小儿广朴止泻口服液质量标准提高方法研究

目的建立小儿广朴止泻口服液的含量测定方法,提高小儿广朴止泻口服液的质量标准。方法采用高效液相色谱法测定复方中苍术素、厚朴酚、和厚朴酚和橙皮苷的含量。结果苍术素在0.002 5~0.08 mg.mL^-1范围内线性良好,平均回收率为97.5%(RSD=1.0%);厚朴酚在0.005~0.16 mg.mL^-1范围内线性良好,平均回收率98.6%(RSD=0.6%);和厚朴酚在0.002 5~0.08 mg.mL^-1范围内线性良好,平均回收率98.4 %(RSD=0.6%);橙皮苷在0.01~0.32 mg.mL^-1范围内线性良好,平均回收率100.3%(RSD=1.0%)。结论该含量测定方法简单可行,重现性好,针对性强,可用于小儿广朴止泻口服液的产品质量控制。

人参活性糖肽的荧光标记鉴定及其在小鼠主要脏器组织中的分布

目的:对人参活性糖肽(PGG)进行荧光标记,观察其在小鼠主要脏器组织中的分布情况及其靶向趋势。方法:以异硫氰酸荧光素(FITC)为探针对PGG进行荧光标记,采用紫外分光光度法和红外分光光度法对PGG荧光标记物(PGG-FITC)进行结构分析,采用荧光分光光度法测定其荧光取代度。将78只小鼠随机分为13组,每组6只,其中6组小鼠注射PGG-FITC,6组小鼠注射FITC,1组小鼠作为空白对照组。给药后0.5、1.0、2.0、4.0、8.0和24.0 h,采集各组小鼠心、肝、脾、肺、肾、脑、肠和胃组织,采用荧光分光光度法测定小鼠主要脏器组织中PGG-FITC和FITC水平,并计算药时曲线下面积(AUC)和靶向效率(Te)。结果:PGG与FITC通过共价键连接,其荧光取代度为1.435%;与FITC组比较,PGG-FITC组小鼠主要脏器组织中的药物水平均明显升高(P<0.01),脑组织中药物水平升高更为明显;FITC组小鼠主要脏器组织中AUC值从高到低依次为肝、脑、胃、肾、肠、心、脾和肺组织,PGG-FITC组小鼠主要脏器组织中AUC值从高到低依次为脑、心、肝、肾、脾、胃、肺和肠组织。结论:利用FITC对PGG进行荧光标记,PGG经过尾静脉注射后主要富集在小鼠脑部,具有明显的脑靶向趋势。

返魂草药材提取方法考察与特征图谱建立

目的通过不同提取方法的筛选,研究返魂草药材HPLC特征图谱信息的影响,建立完善的返魂草药材特征图谱。方法返魂草提取方法选择水煎法、醇超声法、水煎-醇超声法三种提取方法进行对比,采用HPLC方法,色谱条件为Agilet Zorbax SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5-Micron),流动相为乙腈-0.1%三氟乙酸溶剂系统,梯度洗脱,柱温30℃,流速0.8 mL·min-1,检测波长330 nm。建立返魂草样品HPLC特征图谱,指认了新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、金丝桃苷、异槲皮苷、异绿原酸B、异绿原酸A和异绿原酸C 8个特征成分。结果返魂草药材经水煎-醇超声法提取后建立的特征图谱信息更完整、更具有指纹性。结论该提取方法新颖独特、简便可靠,为科学评价和有效控制返魂草质量提供一种新方法。

梅花鹿鞭提取物抗疲劳作用的实验研究

目的:观察梅花鹿鞭提取物抗疲劳作用,为后续相关研究提供依据。方法:将小鼠随机分为空白对照组、梅花鹿鞭提取物不同剂量组,连续灌胃给药30 d,于末次给药后30min,测定小鼠负重游泳疲劳力竭时间,测定小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、乳酸(LA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)活性、尿素氮(BUN)含量及肝组织中肝糖原(LG)含量。结果:与空白对照组相比,梅花鹿鞭提取物可明显延长小鼠负重游泳疲劳力竭时间;降低运动疲劳后小鼠血清LA含量、MDA含量和BUN含量;提高血清LDH和SOD活性;增加肝组织LG含量。结论:梅花鹿鞭提取物能够明显增强小鼠抗疲劳作用,为鹿鞭制品的进一步开发、利用提供了相关参考。

返魂草多糖中免疫增强活性有效组分的筛选及表征

目的:筛选并表征返魂草多糖组分中具有免疫增强活性的有效组分。方法:通过水提醇沉法提取返魂草浸膏(SCHE)多糖并制得50%醇沉样品(SCHE-1)和80%醇沉样品(SCHE-2)。将小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7细胞分为空白组(不含血清培养基)、阴性对照组(含血清培养基)、脂多糖组(LPS,阳性对照,1μg/m L)以及SCHE-1、SCHE-2低、高剂量(0.5、1 mg/mL)组。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测RAW264.7细胞的细胞活性,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测RAW264.7细胞中白介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,以考察SCHE-1和SCHE-2对RAW264.7细胞的免疫增强活性。采用分子排阻色谱法测定SCHE-1的分子量及其分布;采用高效液相色谱(HPLC)柱前衍生化法测定SCHE-1的单糖组成。采用NaOH法对SCHE-1进行甲基化分析。结果:与阴性对照组比较,LPS组及SCHE-1各剂量组均可显著增强RAW264.7细胞的活性并显著提高细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α的水平(P<0.01),SCHE-1是具有免疫增强活性的有效组分。SCHE-1含中性糖40.05%、糖醛酸35.62%、蛋白质8.89%;SCHE-1为混合物,分子量范围为62～6 119 Da,单糖组成主要为半乳糖醛酸、阿拉伯糖和半乳糖;SCHE-1的中性糖连接方式以半乳糖的1→3、1→4和1→6连接为主,在1→3连接的O-6位上有分支,非还原末端主要为阿拉伯糖。结论:SCHE-1可能是返魂草免疫增强活性的有效组分,其主要由多糖类成分组成;SCHE-1可能通过激活巨噬细胞释放IL-1β、IL-6、TNF-α而发挥调节机体免疫功能的作用。

返魂草制剂品质评价标准的探讨

中药品质评价工作是一个从中药材到制剂的系统研究体系,所建立的评价标准以有效性、安全性、一致性为宗旨,揭示中药多成分、多功效的品质特点,在明确有效成分、毒性成分等大数据基础研究上建立的,该评价标准高于药品标准。品质评价标准有利于对同一品种多厂家生产的制剂品质优劣的评判,并可作为市场药品优质优价公平竞争的依据。

帕博西尼关键中间体的合成工艺改进

本研究基于帕博西尼原研合成路线的基础上,对其重要中间体6-溴-8-环戊基-2-甲基亚磺酰基-5-甲基-8H-吡啶并[2,3-D]嘧啶-7-酮进行了优化设计,提出了新的合成工艺路线,路线以4-氯-2-甲硫基-5-氰基嘧啶为原料经四步反应合成目标中间体,优化条件后总收率为64.58%。在合成工艺中,重点对反应溶剂、催化剂、物料摩尔比、反应温度等参数进行了优化。优化后的工艺路线所用原料易得,步骤较少,收率较高,可为工业化生产提供参考。