布鲁菌实时荧光定量聚合酶链式反应试剂盒临床样本检测探索

目的采用布鲁菌实时荧光定量聚合酶链式反应检测方法，探讨布鲁菌的早期、快速检测，为临床医生对布鲁菌感染的诊断提供指导。方法根据布鲁菌表面蛋白31基因序列设计引物和探针，建立布鲁菌实时荧光定量聚合酶链式反应检测方法，并验证反应体系的特异性（布鲁菌标准株16M、544A、1330S、菌苗株104M，参考菌株小肠结肠炎耶尔森菌O：9、大肠埃希菌O：157）、重复性（4种不同浓度的标准品），分析反应体系的最低检测限。结果所建立的检测方法仅能对布鲁菌进行特异性扩增：反应体系中不同底物浓度与循环（Ct）值之间呈良好的线性关系（Y=-2．77X＋43．19，R2=0．9948），反应体系的最低检测限为1×103 copies／ml；对布鲁菌标准株16M、544A、1330S与104M的检测结果为阳性，0：9型小肠结肠炎耶尔森菌、0：157大肠杆菌的检测结果为阴性；4种不同浓度的标准品和阴性质控品进行4次重复检测。变异系数分别为0．15％、0．16％、0．23％、0．18％。结论利用实时荧光定量聚合酶链式反应检测方法，可快速、准确地检出布鲁菌，对临床布鲁菌病的诊断有指导意义。