单眼视网膜摘除后鸽左右前脑基因的差异表达

利用消减抑制杂交 (SSH)技术分析左眼视网膜摘除后成鸽左右前脑基因差异表达情况 ,对 14个重组子经反Northern杂交去除假阳性 ,最终获得 4个阳性重组子 ,对阳性重组子进行克隆和测序 ,其中PFB/SSH 8片段长 2 2 6bp ,它的 138bp与人CaMⅠ基因外显子有 85 %的同源性 ;PFB/SSH 15片段长 2 5 2bp ,与nexinIalpha非表达序列有低的同源性 ;另外

丙烯酰胺对小鼠小脑SOD基因表达的影响

目的 研究丙烯酰胺对小鼠小脑超氧化物歧化酶基因表达的影响。方法 通过腹部皮肤涂布丙烯酰胺建立小鼠神经毒模型 ,采用逆转录PCR方法研究超氧化物歧化酶在小脑的表达情况。结果 丙烯酰胺组、VitC治疗组对Mn SOD基因表达影响不明显 ,丙烯酰胺组、VitC组处理第 4天、第 7天Cu ,Zn SOD表达增高 ,第 10天丙烯酰胺组、VitC组Cu ,Zn SOD基因低表达 ,且丙烯酰胺组较VitC组更低。结论 丙烯酰胺的神经毒作用可能与其抑制Cu ,Zn

VitC对丙烯酰胺急性中毒小鼠脑bax和bcl-2基因表达的影响

目的 研究VitC对丙烯酰胺 (acrylamide ,ACR)诱导小鼠脑损伤的保护作用。 方法 染毒组小鼠连续腹腔注射不同剂量ACR 2 5mg/ (kg·d)和 5 0mg/ (kg·d) ,VitC组在小鼠染毒的同时腹腔注射VitC 5 0mg/ (kg·d) ,正常对照组以等量生理盐水注射。在不同时间分别分离大脑、小脑 ,采用硫巴比妥酸法 (TBA)测定过氧化脂质 (lipoper oxidation ,LPO)的含量。采用逆转录 -聚合酶链反应检测低剂量ACR鼠第 5天、第 10天小脑bax和bcl 2基因的表达。结果 大脑、小脑LPO除高剂量ACR组第 3天与正常对照组无差异 ,其他ACR组与正常对照组比较差异均有显著性 (P <0 .0 5 ) ;且低剂量ACR组 (第 5天、第 10天 )之间 ,高剂量ACR组 (第 3天、第 5天 )之间差异有显著性(P <0 .0 5 ) ;VitC组在高剂量ACR组第 3天与高剂量ACR组无差异 ;其他相对应的VitC组与ACR组比较差异均有显著性 (P <0 .0 5 )。ACR组bax基因表达明显上调 ,VitC组bax表达下降 ,ACR组bcl 2基因表达较正常组明显增高 ,VitC组bcl 2基因表达较ACR组降低。结论 ACR神经毒性与氧自由基增多密切相关 ,VitC能够减轻ACR神经毒作用。ACR对bax和bcl 2基因表达的不同影响 ,可能介导其神经毒作用。

MPTP对小鼠黑质纹状体神经递质代谢相关基因表达的影响

目的 研究 1 甲基 4 苯基 1,2 ,3,6 四氢吡啶 (1 methyl 4 phenyl 1,2 ,3,6 tetrahydropyridine ,MPTP)诱导的黑质纹状体系统神经递质代谢相关基因表达的变化。方法 通过MPTP注射诱导C5 7BL小鼠神经元损伤 ,利用逆转录PCR方法检测酪氨酸羟化酶 (TH)、单胺氧化酶B(MAO B)、多巴胺转运体 (DAT)、胆碱乙酰基转移酶 (ChAT)以及谷氨酸脱羧酶 (GAD6 5 )五种神经递质代谢相关基因的表达变化。结果 在小鼠黑质与纹状体中 ,MPTP导致TH基因表达显著降低以及GAD6 5基因表达的上升。MAO B、DAT、ChAT基因的表达变化在黑质与纹状体则有所不同 ,在黑质MPTP导致MAO B与ChAT基因表达的上升以及DAT基因表达下降 ,在纹状体MPTP导致MAO B与ChAT基因表达下降 ,而对DAT基因表达没有明显影响。结论 MPTP对不同神经递质代谢相关基因表达有不同的影响 。

血管紧张素Ⅱ和醛固酮对培养的心脏成纤维细胞胶原代谢的影响

为探讨血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )和醛固酮 (Ald)对培养的心脏成纤维细胞胶原合成量、胶原酶活力的影响。培养SD大鼠心脏成纤维细胞 ,以天狼星红法测定胶原合成总量 ;竞争ELISA法测定Ⅰ型胶原含量 ;荧光分光光度法测定胶原酶活性。结果显示 :心脏成纤维细胞在 10 -9～ 10 -7mol/L的AngⅡ作用下 ,胶原合成总量较对照组有显著增加 ,其中AngⅠ型胶原含量也较对照组有显著增加 ;在此浓度范围内 ,AngⅡ显著抑制培养细胞分泌的前胶原酶活性 ;AngⅡ受体拮抗剂Saralasin可拮抗上述作用。实验观察到 ,在较高浓度下 ,Ald能增加培养细胞 2 4h (10 -7mol/L)和 48h(10 -8～ 10 -7mol/L)胶原总量 ;10 -8～ 10 -7mol/LAld作用 2 4h后 ,培养基中Ⅰ型胶原含量显著升高 ;Ald的此作用可被螺旋内酯拮抗 ;同时 ,10 -9～ 10 -7mol/LAld均可在 2 4h后使培养细胞分泌的前胶原酶活性受到抑制 ,10 -6mol/L的螺旋内酯不能拮抗此作用。提示 :AngⅡ和Ald均能不同程度地促进胶原合成 ,抑制胶原酶活力 ,使胶原沉积的净效应增加 ,从而加速心肌纤维化。

单眼剥夺鸽视盖与人CDC1 0同源基因的克隆与表达分析

初步研究鸽视觉偏侧化的分子机制。建立鸽左侧单眼剥夺模型 ,采用抑制消减杂交和反Northern方法筛选右视盖差异表达的表达序列标签。自右视盖消减文库随机取 60个重组克隆进行反Northern杂交 ,证实为真阳性克隆 6个 ,随机对其一进行序列分析 ,发现该片段与人CDC10有 84 %的同源性。CDC 10属MBF转录因子复合体的一部分 ,介导细胞周期调节的转录 ,该表达序列标签在右视盖表达增强 ,可能调制一些视觉相关神经元的分化、增殖 。

卡维地洛(Carve dilol)对心肌bcl-2、bax表达的影响

目的 研究卡维地洛对心肌凋亡相关基因bcl 2、bax表达的影响。方法 SD大鼠随机分三组 :对照组 ,阿霉素组 ,阿霉素 +卡维地洛组。阿霉素腹腔注射 (2 0mg/kg)制备心肌毒性动物模型 ;卡维地洛组在注射阿霉素之后立即腹腔注射卡维地洛 (2mg/kg) ;等量生理盐水用于对照组。于用药后第 1,3,5 ,10 ,15d采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)和免疫组织化学染色法检测心肌bcl 2、bax基因和蛋白水平表达的变化。结果 (1)以GAPDH为内标 ,第 1、3、5、10d ,阿霉素组中bcl 2基因表达逐渐减弱 ,bax基因表达逐渐增强 ;阿霉素 +卡维地洛组中bcl 2表达逐渐增强 ,于第 5、10天bcl 2表达高于阿霉素组 ,bax表达逐渐减弱 ,于第 5、10天bax表达低于阿霉素组 ;(2 )阿霉素 +卡维地洛组Bcl 2、Bax阳性心肌细胞百分比较阿霉素组均有显著性差异 (P <0 0 5 )。结论 (1)阿霉素心肌毒性与促进bax的表达同时抑制bcl\|2表达有关 ;(2 )卡维地洛可以促进bcl 2的表达 ,减弱bax的表达。提示卡维地洛的心肌保护作用可能通过差异调节bcl 2和bax的表达而实现。

脑室注射AB_(1-40)对海马NAPOR基因表达的影响

目的 研究脑室注射Aβ1 40 对海马NAPOR基因表达的影响。方法 利用立体定向仪将Aβ1 40 注射脑室 ,建立大鼠AD模型 ,采用逆转录PCR方法研究NAPOR在海马的差异表达。结果 通过莫氏水迷宫实验及胆碱乙酰转移酶的基因表达验证AD模型成功 ,NAPOR的RT PCR结果表明该基因片段在AD鼠海马高表达。结论 NAPOR为RNA结合蛋白 ,其表达的时空模式与神经元凋亡密切相关。结果提示Aβ1 40 对海马神经元的毒性可能通过改变NAPOR基因的表达 ,促进神经元凋亡而实现。

MPTP对小鼠黑质及纹状体活性氧自由基代谢酶基因表达的影响

活性氧自由基是 1 甲基 4 苯基 1,2 ,3,6 四氢吡啶 (1 methyl 4 phenyl 1,2 ,3,6 tetrahydropyridine,MPTP)诱发多巴胺能神经元损伤的一种可能性因素。通过MPTP注射诱导C5 7BL小鼠神经元损伤 ,利用逆转录PCR方法检测铜锌超氧化物歧化酶 (CuZn SOD)、锰超氧化物歧化酶 (Mn SOD)以及谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH PX)三种相关基因的表达变化。结果显示 ,在小鼠黑质与纹状体中 ,MPTP导致Mn SOD基因表达显著降低 ,而CuZn SOD与GSH PX基因的表达则没有明显变化。推测Mn SOD基因表达的变化可能与MPTP对线粒体的毒性作用有关。

卡维地洛对大鼠心肌TNF-α、TNF-αR1表达的影响

目的研究卡维地洛对大鼠心肌凋亡相关基因TNF-α、TNF-αR1表达的影响。方法SD大鼠随机分三组:对照组,阿霉素组,阿霉素+卡维地洛组;阿霉素腹腔注射(ADR 20 mg/kg)制备心肌毒性动物模型;卡维地洛组在注射阿霉素之后立即腹腔注射卡维地洛(Carv2 mg/kg);等量生理盐水用于对照组。于用药后第1、3、5、10、15天采用逆转录聚合酶链反应检测TNF-α,TNF-αR1在心肌细胞中的表达,HE染色检测心肌组织病理改变情况。结果GAPDH为内标,第1、3、5、10天阿霉素组TNF-α表达逐渐增强,TNF-αR1表达逐渐增强;阿霉素+卡维地洛组中TNF-α及TNF-αR1表达均逐渐增强;阿霉素+卡维地洛组与阿霉素组比较:TNF-α及TNF-αR1表达两组比较差异无显著性。HE染色结果:阿霉素组与卡维地洛组比较差异无显著性。结论(1)阿霉素的心肌毒性作用可增强心肌细胞凋亡相关基因TNF-α及TNF-αR1的表达;(2)卡维地洛对凋亡相关基因TNF-α及TNF-αR1的表达无影响;揭示卡维地洛对阿霉素心肌毒性的保护作用不能通过调节TNF-α、TNF-αR1的表达而实现。

单眼视觉剥夺鸽不同脑区tubulin和chs rex b同源基因的差异表达

目的 检测tubulin与chsrexb同源基因在左眼视损毁后鸽脑不同脑区的差异表达。方法 以经消减抑制杂交 (suppressionsubtractionhybridization ,SSH)方法获得的鸽脑差异表达基因的表达序列标签 (expressedse quencetag ,EST)为探针 ,用放射性同位素对其进行标记 ,藉Northern杂交法分析其mRNA在不同脑区的丰度。结果 与人tubulin有高度同源性及与鸡的chs-rex -bmRNA有高度同源性的基因在左、右视盖的丰度明显高于左、右前脑。

山茛菪碱对家兔全脑缺血再灌注后脑线粒体损伤的保护作用(英文)

背景:山莨菪碱是从茄科唐古特莨菪中提取的一种生物碱,是一种良好的细胞保护剂。而线粒体功能变化是反映细胞损伤的最敏感指标之一。目的:观察山莨菪碱对家兔全脑缺血再灌流后脑线粒体损伤的影响,探讨山莨菪碱的脑保护作用。设计:完全随机对照实验。单位:华中科技大学同济医学院附属同济医院。材料:实验于2002-09／12在华中科技大学同济医学院附属同济医院急诊科实验室完成。选择30只健康家兔,随机分为假手术组、缺血再灌流组、山莨菪碱组,每组10只。方法:采用“结扎双侧椎动脉和夹闭双侧颈总动脉+体循环低血压”建立全脑缺血再灌流模型,缺血20 min,再灌流2 h。山莨菪碱组于再灌流前 1 min由股静脉给予山莨菪碱,剂量为10 mg／kg,并以5 mg／h速度维持治疗2 h。缺血再灌流组再灌流期间给予等量生理盐水治疗;假手术组只接受手术,但不结扎和夹闭血管。①采用氧化电极法测定脑线粒体呼吸功能,包括呼吸控制率,磷氧比,氧化磷酸化效率。②采用氧电极法测定脑线粒体内还原型烟酰胺腺瞟呤二核苷酸氧化酶,琥珀酸氧化酶,细胞色素C氧化酶活性。③采用原子吸收光谱法测定脑线粒体钙含量。④采用改良八木国夫法测定脑线粒体丙二醛含量。主要观察指标:①各组家兔大脑皮质线粒体呼吸功能、呼吸链氧化酶活性变化。②各组家兔大脑皮质线粒体内钙和丙二醛含量。结果:30只家兔均进入结果分析。①各组家兔大脑皮质线粒体呼吸控制率、磷氧比、氧化磷酸化效率:缺血再灌流组和山莨菪碱组低于假手术组[烟酰胺腺嘌呤二核苷酸链:呼吸控制率:2．34±0．18,3．58±0．29, 4．07±0.38,P<0．05-0．01;磷氧比:1．77±0．10,2．23±0．14,2．41±0．17, P<0．05-0．01;氧化磷酸化效率:(5．27±0．78),(8．03±1.30),(9．63±150)μkat／g, P<0.05-0．01;黄素腺嘌呤二核苷酸链:呼吸控制率:1.47+0.23,2.53±0．28, 2．84±0．36,P<0．05-0．01;磷氧比:0．88±0．09,1．58±0．11,1．73±0．17, P<0．05-0．01;氧化磷酸化效率:(6．05±1．13),(7.47±1.40),(8．62±1．60)μkat/g, P<0．05-0．01],山莨菪碱组明显高于缺血再灌注组(P<0．01)。②各组家兔大脑皮质还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶、琥珀酸氧化酶、细胞色素C氧化酶活性:缺血再灌流组和山莨菪碱组低于假手术组 [还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶:(2．62+0.35),(4．55+0．48), (5．07±0．60)μkat／g;琥珀酸氧化酶:(1.48±0．17),(1．83±0．22), (2．10+0．28)μkat／g;细胞色素C氧化酶:(5．03±1．12),(7．62±1．23), (9．00±1．53)μkat／g,(P<0．05-0．01)],山莨菪碱组明显高于缺血再灌注组(P<0,01)。③各组大鼠脑线粒体钙和丙二醛含量:缺血再灌流组和山莨菪碱组高于假手术组[钙:(2．36±0．23),(1．39±0．17),(1．22±0．12)mg／g;丙二醛:[(36．38±10．42),(22．69±9．56),(19．74±7．26)μmol/g(P<0．05-0．01)]。山莨菪碱组低于缺血再灌流组(P<0．01)。结论:山莨菪碱可通过钙拮抗、抑制脂质过氧化、稳定线粒体膜,减轻线粒体结构损伤,并促进缺血再灌流后线粒体呼吸功能、呼吸链酶活性的恢复,从线粒体水平发挥脑保护作用。

高脂血症患者LDL氧化易感性及调脂药物干预的影响(英文)

目的 观察高脂血症对LDL氧化易感性的影响以及调脂药物干预后的改变。方法 应用短程密度梯度超速离心分离血浆LDL ,对 1 1例高甘油三酯血症患者口服微粒化非诺贝特 2 0 0mg/d、1 0例高胆固醇血症患者口服普伐他汀 1 0mg/d治疗 4周前后和 6例正常人的LDL在体外以CuCl2 诱导氧化 ,测定LDL开始氧化的迟滞期和氧化速率。结果 (1 )LDL氧化的迟滞期 ,在高甘油三酯血症患者和高胆固醇血症患者均较正常组明显缩短 (43 8± 1 1 6 ,40 8± 1 0 7vs 70 5± 1 4 6min ,P均 <0 0 1 )。 (2 )LDL的氧化速率 ,在高甘油三酯血症患者和高胆固醇血症患者均较正常组明显增快 (0 0 36± 0 0 0 4 ,0 0 31± 0 0 1 1vs 0 0 2 0± 0 0 1 1O D /min ,P均 <0 0 5)。 (3)高甘油三酯血症患者给微粒化非诺贝特治疗后LDL氧化的迟滞期显著延长 (62 4± 5 0min,P <0 0 1 ) ,氧化速率明显减慢 (0 0 31± 0 0 0 3O D /min ,P <0 0 5)。 (4)高胆固醇血症患者于普伐他汀治疗后LDL氧化的迟滞期明显延长 (58 8± 6 1min ,P <0 0 5) ,氧化速率无显著性变化 (0 0 2 5± 0 0 0 9O D /min ,P >0 0 5)。结论 高甘油三酯血症患者和高胆固醇血症患者LDL氧化易感性增高 ,微粒化非诺贝特和普伐他汀能够降低高甘油三酯血症患?

基质金属蛋白酶在乳头状甲状腺癌中的表达

目的 研究基质金属蛋白酶 (MatrixMetalloproteinase,MMPs)基因在乳头状甲状腺癌中的表达。方法 手术中获得的乳头状甲状腺癌、甲状腺腺瘤、桥本氏炎症及正常甲状腺组织的新鲜标本共 3 1例 ,提取其总RNA ,然后进行RT PCR ,比较MMP 2、MMP 9与MMP 14在不同疾病组织中的表达差异。结果 3种MMPs基因在乳头状甲状腺癌中的表达阳性率显著高于腺瘤、桥本氏炎症和正常甲状腺组织。

褪黑素通过提高p53和Fas的表达促进小鼠肝癌H22细胞凋亡

目的:研究褪黑素(MLT)对小鼠肝癌细胞株H22的促凋亡作用及其机理。方法:采用丫啶橙(AO)染色、培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性检测和流式细胞术(FCM)观察MLT的促凋亡作用;采用RT-PCR方法检测MLT处理前后细胞的p53mRNA、FasmRNA的水平。结果:AO染色后H22细胞呈现明显核浓缩的凋亡形态;培养液LDH活性检测及FCM分析均提示MLT诱导H22细胞发生凋亡;RT-PCR结果显示p53、Fas表达增强。结论:MLT能促进H22细胞p53和Fas的表达,从而诱导细胞发生凋亡。

高甘油三酯血症对血管内皮功能的影响(英文)

目的 观察高甘油三酯血症对血管内皮功能的影响。方法 对 30例高甘油三酯血症患者和 30例正常人 ,采用高分辨超声技术检测血流介导的和硝酸甘油介导的肱动脉舒张功能 ,并测定血浆内皮素和血脂。结果 1.高甘油三酯血症组血流介导的肱动脉舒张较正常组明显减弱 [分别为 (2 7± 2 0 ) %和 (15 0± 8 0 ) % ,P <0 0 0 1],而两组对硝酸甘油的血管舒张反应无显著性差异 [分别为 (15 0± 5 0 ) %和 (16 8± 9 0 ) % ,P >0 0 5 ]。 2 高甘油三酯血症组血浆内皮素水平显著高于正常组 [分别为 (10 6 2 2± 19 16 ) μg/L和 (72 37± 14 0 6 ) μg/L ,P <0 0 0 1]。结论 高甘油三酯血症患者内皮依赖性血管舒张功能明显受损。血管内皮功能失调可能是高甘油三酯血症致动脉粥样硬化的一个重要机制。

经MPTP处理的C57BL小鼠不同脑区多巴胺转运体与甘氨酸受体基因的表达

1 甲基 4 苯基 1,2 ,3,6 四氢吡啶 (MPTP)对C57BL小鼠黑质多巴胺能神经元具有选择性的毒性作用 ,导致小鼠出现类似帕金森病的症状。利用抑制消减杂交技术分析MPTP对小鼠黑质基因表达的影响 ,获得了一系列差异表达基因片段 ,其中包括多巴胺转运体与甘氨酸受体两种与神经递质的功能与周转密切相关的基因。通过Northern杂交发现 ,这两种基因的表达在给药组小鼠的黑质中均下降 ,而在纹状体中多巴胺转运体基因的表达没有明显变化 ,甘氨酸受体基因的表达则有一定程度的增加。

酵母双杂交筛选TEB4相互作用蛋白

目的酵母双杂交筛选与TEB4(MARCH-Ⅵ)有相互作用的蛋白,构建该蛋白基因序列的重组载体。方法以人TEB4为诱饵质粒,利用酵母双杂交技术筛选人淋巴瘤cDNA文库。在SD/-4培养基上共获得150多个阳性克隆,将酵母菌扩增后抽提质粒,转化大肠杆菌,进行序列分析,并经过回复杂交验证,发现了一个与TEB4相互作用的蛋白:ATP synthase F0 subunit6(ATP-C6)。PCR法扩增ATP-C6,亚克隆到质粒pCMV-HA中,获得重组质粒pCMV-HA-ATP-C6,酶切和测序进行鉴定。结果从人淋巴瘤cDNA文库筛选到一个与TEB4有相互作用的蛋白ATP-C6,并成功构建重组质粒pCMV-HA-ATP-C6。结论应用酵母双杂交系统从人淋巴瘤cDNA文库中筛选并初步验证了与TEB4有相互作用的蛋白,为TEB4蛋白功能的进一步研究奠定了基础。

MPTP对褐鼠黑质NAPOR基因表达的影响

目的 研究腹腔注射 1 甲基 4 苯基 1 ,2 ,3 ,6 四氢吡啶 (MPTP)对褐鼠黑质神经母细胞瘤凋亡相关的RNA结合蛋白 (NAPOR)基因表达的影响 ,为阐明帕金森病 (PD)的分子机制提供线索。方法 通过腹腔注射MPTP建立褐鼠PD模型 ,采用逆转录PCR方法研究NAPOR在黑质的表达情况。结果 通过MPTP腹腔注射后褐鼠模型出现典型PD症状、黑质酪氨酸羟化酶表达水平明显降低验证PD模型成功 ,PD鼠黑质NAPOR基因表达明显上调。结论 NAPOR为RNA结合蛋白 ,其表达的模式与神经元凋亡密切相关。提示MPTP对黑质神经元的毒性可能通过改变NAPOR基因的表达 。

甲状腺素对胎鼠脑bcl-2和bax基因表达的影响

目的 研究甲状腺素对胎鼠脑bcl 2和bax基因表达的影响。方法 采用丙基硫氧嘧啶灌胃制备甲减孕鼠模型 ,出生后小鼠即为先天性甲减鼠 ,另一组出生后即日起用腹腔注射T4,剂量为 2 μg/ 10 0g·d-1(替代组 ) ,采用逆转录 -聚合酶链反应检测胎鼠出生后 1、5、10d胎鼠bcl 2和bax基因的表达。结果 bax基因在甲减胎鼠脑第 1天表达最高 ,随着鼠龄增长 ,表达降低 ;正常第 1天胎鼠及替代组胎鼠脑未检测到bax表达 ;bcl 2基因在第 1天甲减胎鼠表达高于正常对照组 ;第 5天、第 10天降低 ;bcl 2在替代组鼠脑中表达较甲减组高。结论 甲状腺激素对bcl 2和bax基因表达的不同影响 ,在脑细胞凋亡中有重要的作用。