HL-60细胞产生的肿瘤免疫抑制因子对T细胞的作用及其生物学特性

白血病细胞培养上清液和白血病人血清能抑制PHA—P诱导的人外周血T淋巴细胞的增殖;抑制白细胞介素2(IL—2)的产生和反应性。以正常2BS人胚肺细胞培养上清液和正常人血清作对照则无抑制作用。白血病细胞培养上清液无细胞毒作用。聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)结果表明,来源HL—60人早幼粒白血病细胞的肿瘤免疫抑制因子(tumor-derived immunosuppressive factor,TDSF)的分子量约为87KD,其化学本质为蛋白质。抗急非淋白血病药物对这种TDSF的分泌有部分抑制作用。

医学分子生物学 第二讲 基因的基本结构功能和表达调控

决定生物发育、分化和繁殖的遗传信息,都贮存在细胞内的遗传物质—DNA中。在DNA中贮存着大量的遗传信息,每一信息单位(或称遗传单位)为一个基因。基因在化学上是指一段DNA顺序,从这段顺序上可以转录出有功能活性的RNA分子。

医学分子生物学 第一讲 医学分子生物学概论

医学分子生物学近十年来进展很快。它是探讨人体正常和疾病状态下各种生物大分子(如蛋白质、酶、核酸等)的结构与功能及其相互作用规律的科学。现今医学研究已深入到分子水平,在许多疾病的诊断治疗上也已采用了分子生物学手段和方法,诸如已在临床各学科所开展的聚合酶链反应(PCR)、克隆技术以及大片段DNA分析等。本刊为了满足临床内科医生对医学分子生物学基础知识与临床应用情况的了解,特请同济医科大学医学分子生物学研究室的几位专家撰写了本次专题连续讲座,共5讲。这里是第一讲,其它四讲分别是:基因的基本结构、功能和调控,基因工程,基因诊断,基因治疗,将在本刊以后各期陆续刊出。

CH50多肽体内激活巨噬细胞及其抗肿瘤作用研究

目的：研究重组ＦＮ多肽ＣＨ５０在体内激活巨噬细胞及其抗肿瘤作用的特点。方法：体内注射ＣＨ５０和／或转染ＩＦＮ－γ基因，检测巨噬细胞产生的各种因子，测定荷瘤鼠体内肿瘤生长速度。结果：ＣＨ５０单独作用可促进巨噬细胞产生ＮＯ，ＴＮＦ，ＩＬ－１等因子，但激活作用较慢。注射ＣＨ５０和转染ＩＦＮ－γ基因不分先后，均可在体内协同作用，迅速激活巨噬细胞。单独注射ＣＨ５０能够抑制肿瘤结节的形成，其抑制作用呈剂量依赖关系；低剂量ＣＨ６０对＜１ｍｍ的肿瘤结节已有很强的抑制作用，较大剂量时对＞１ｍｍ的肿瘤结节也有很强的抑制作用。ＣＨ５０与ＩＦＮ－了在体内的协同作用使其抑制体内肿瘤生长的作用更强。结论：ＣＨ５０与ＩＦＮ－γ作为体内巨噬细胞激活的双信号因子在肿瘤治疗中具有极大的应用潜力。

体内IFN-γ基因转染小鼠腹腔巨噬细胞抗肿瘤作用的研究

采用磷酸钙－ＤＮＡ共沉淀法，将ｐＲＥＰ－８－ＩＦＮ－表达质粒直接注射至小鼠腹腔，可成功地转染腹腔巨噬细胞（ＭΦ），并表达其基因产物，能有效地抑制肿瘤生长；再次基因转染，可获得增强的抗肿瘤效应。还发现转基因ＭΦ所分泌的激活因子能激活未转基因的ＭΦ；增加腹腔ＭΦ的数量；增强ＭΦ的杀瘤活性；并使ＭΦ分泌一定水平的ＮＯ、ＩＬ－１和ＴＮＦ等，进一步增强抗肿瘤作用。转基因ＭΦ及其表达产物可使脾细胞ＮＫ活性和内源性ＬＡＫ活性增强，提高机体抗肿瘤功能，为肿瘤的细胞因子基因治疗提供了一种简便而有效的抗肿瘤新途径。

日本血吸虫基因工程BCG多价疫苗的研究

用日本血吸虫（Sj）成虫提取的总RNA逆转录合成CDNA第一链，并设计合成引物，经PCR扩增，扩增出26kDa的编码区基因，并进行了测序，结果表明Sj中国大陆株（SjC）、Sj菲律宾株（SjP）26kDaGST基因核苷酸同源性99．8％．然后，构建了大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pBCG－Sj26Ⅰ-Ⅳ．再将其依次分别转化大肠杆菌、耻垢分枝杆菌和BCG中，筛选出重组耻垢分枝杆菌疫苗和重组BCG多价疫苗．经SDS－PAGE和薄层扫描分析表明，Sj26kDaGST的表达效率在大肠杆菌、耻垢分校杆菌和BCG中分别占菌体总蛋白的25％-37％、10％－28％、10％－15％．通过酶切图谱、PCR技术和Westernblot分析，证实构建的Sj26kDa基因工程BCG多价疫苗是成功的．用其免疫BABL／c小鼠，结果表明它对日本血吸虫的感染有明显的预防作用，重组BCG多价疫苗的减虫率达27．36％（t=3．42，P＜0．01），减卵率达60．50％（t=6．19，P＜0．01）．实验组虫卵肉芽肿平均面积以及免疫后血清抗体水平与对照组相比其差别具有显著意义．该研究为日本血吸虫成虫疫苗的研究提供了一条新的途径．

重组FN多肽CH50促进化疗小鼠巨噬细胞功能的研究

观察重组人纤维结合素多肽CH5 0对化疗小鼠巨噬细胞的影响。结果表明 ,腹腔连续注射CH5 0能防止化疗药物使外周血单核细胞数量和腹腔细胞的数量降低 ,能促进代谢活性、杀瘤活性、细胞因子分泌及脾淋巴细胞的增殖反应。提示CH5 0可提高肿瘤化疗药物的疗效。

中药“热毒清”对矽肺治疗作用的实验研究—对染矽尘巨噬细胞保护作用的细胞化学及扫描电镜研究

为探讨中药“热毒清”对矽肺的治疗作用,用提纯及培养的5组巨噬细胞,以细胞学、细胞化学及扫描电镜法进行了动态观察。结果证实,SiO_2组细胞吞噬SiO_2粉尘后出现多种形态和一系列表面超微结构变化的特征,并远较中药组细胞迅速死亡和崩解。细胞内ACP和SDH活性等著低于中药组。本文认为,中药“热毒清”对矽尘致巨噬细胞毒性有明显的拮抗作用。

纤维结合素分子中Asp1961～Glu1978序列对三结构域多肽在大肠杆菌中表达的影响

构建了人纤维结合素（ＦＮ）的三功能结构域重组多肽的两个表达质粒，分别编码两个重组多肽：ＣＨ６２（ＦＮ的Ｐｒｏ１２３９～Ｓｅｒ１５１５经Ｍｅｔ和Ａｌａ１６９０～Ｖａ１２０４９相连）和ＣＨ６３（从ＣＨ６２中删除了Ｉｌｅ１８５０～Ｇｌｕ１９７８）．ＣＨ６２在大肠杆菌中的表达效率很低，而ＣＨ６３的表达效率则很高，结果提示ＦＮ分子中的Ａｓｐ１９６１～Ｇｌｕ１９７８序列是影响三结构域多肽在大肠杆菌中表达的关键结构．ＣＨ６３经过溶解和复性后，可通过肝素－琼脂糖亲和层析得到纯品，所得纯品具有结合肝素和结合细胞的功能，且结合细胞的能力比双结构域ＦＮ多肽更强，表明两个结合细胞的功能结构域均有活性．ＣＨ６３的制备为进一步研究具有更强的抑制肿瘤转移作用的基因工程制品奠定了基础．

大蒜素对巨噬细胞介导的细胞毒作用的影响

大蒜素单独或与其他激活剂协同作用时，具有增强巨噬细胞的抗肿瘤作用。同时可增强某些瘤细胞对巨噬细胞介导的细胞毒作用的敏感性。

结核分支杆菌镜检、培养和PCR技术诊断结核病的临床评估

目的 评估结核分支杆菌PCR、培养、镜检对结核病诊断的临床效果。方法 对 1 2 1 7例临床可疑结核病人用PCR、培养和镜检三种方法的阳性检出率进行比较。结果 不同临床标本用PCR技术诊断结核病 ,其敏感性高于培养和涂片镜检 ,阳性检出率分别为 :88.7% ,43 .4% ,2 6.5 %。结论 通过三种方法比较分析 ,说明PCR技术是一种速度快、检出率高的检测结核分支杆菌的重要方法 。

重组FN多肽CH50对巨噬细胞抗肿瘤功能的促进作用

重组ＦＮ多肽ＣＨ５０可以显著促进巨噬细胞产生ＮＯ的能力、增强其细胞毒作用。ＣＨ５０多肽可与ＩＦＮγ协同作用，进一步促进巨噬细胞产生ＮＯ的能力。体内实验亦表明，ＣＨ５０多肽可以抑制肿瘤细胞在体内生长。

大蒜素对T细胞激活的影响

大蒜素在高浓度（５０ｕｇ／ｍｌ）时对Ｔ细胞激活有抑制作用。但在适当浓度（３．１２５～１２．５ｕｇ／ｍｌ）时则对Ｔ细胞激活有促进作用，这种促进作用与大蒜素抑制巨噬细胞产生ＮＯ的能力有关。大蒜素能够对抗Ｓ１８０细胞和艾氏腹水癌细胞产生的肿瘤免疫抑制因子对Ｔ细胞激活的抑制作用。提示大蒜素在肿瘤治疗中可能有较大的应用价值。

双功能结构域重组FN多肽表达质粒的构建及其表达产物的功能

构建了纤维结合素（ＦＮ）的双功能结构域重组多肽的两个表达质粒，在大肠杆菌中表达了两个重组多肽：ＣＨ５０（ＦＮ的Ｐｒｏ１２３９Ｓｅｒ１５１５经Ｍｅｔ和Ａｌａ１６９０Ｔｈｒ１９６０相连）和ＣＨ５６（ＦＮ的Ｐｒｏ１２３９Ｔｈｒ１９６０）。两个多肽都具有结合肝素的功能，可通过肝素琼脂糖亲和层析得到纯品，所得纯品亦都具有结合细胞的功能。

癌症患者血清免疫抑制活性及其动态观察

对七种癌症百余例血清样本,研究了肿瘤免疫因子(TDSF)对T细胞游活和白细胞介素2(IL2)反应性的作用。结果表明,各种癌症患者血清对T细胞激活和IL2反应性均表现强烈抑制。根治手术后两周,抑制活性下降,4周消失,复发后又回升至原有水平。结果提示:(1)癌患者血清中的TDSF对IL2治疗具有不利作用。IL2必须配合手术或其它疗法,使血清中TDSF降低,才能充分显示疗效。(2)以上两个检测项目可用于癌发生及复发的辅助诊断。

亚砷酸钠对大鼠肝线粒体和微粒体酶的影响

研究了亚砷酸钠在体内、体外对大鼠肝线粒体丙酮酸脱氢酶（ＰＤＨ）、琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）和微粒体酶细胞色素Ｐ－４５０、ｂ５、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ－细胞色素Ｃ还原酶、谷胱甘肽硫转移酶（ＧＳＴ）的影响；并通过观测亚砷酸钠与亚硒酸钠的作用及其对肝谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽含量和线粒体脂质过氧化的影响，探讨亚砷酸钠的作用机理。结果表明：连续７天腹腔注射２０ｍｇ／ｋｇ的亚砷酸钠，线粒体ＰＤＨ、ＳＤＨ被抑制，分别相当于对照组的５１％和５８％。而亚硒酸钠可有效拮抗砷对ＰＤＨ、ＳＤＨ的抑制作用。亚砷酸钠显著降低肝ＧＳＨ的含量，并增强线粒体膜脂质过氧化作用（Ｐ＜０．０５）。在体内试验中，亚砷酸钠对谷胱甘肽过氧化物酶和肝微粒体酶无明显影响。亚砷酸钠在体外实验中，浓度在１０－７～１０－３ｍｏｌ／Ｌ的范围内，抑制ＳＤＨ的活力，提高ＧＳＨ的含量，且呈剂量－效应关系。结果提示。

硒多糖、亚硒酸钠对大鼠血硒浓度和肝细胞色素P_(450)单加氧酶系的影响

研究了一次和连续７天腹腔注射硒多糖、亚硒酸钠对大鼠血硒浓度及肝细胞色素Ｐ４５０、ｂ５、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ－细胞色素Ｃ还原酶、谷胱甘肽硫转移酶（ＧＳＴ）和谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）的影响；并比较了硒多糖与亚硒酸钠的作用。结果表明：一次腹腔注射Ｓｅ０．６ｍｇ／ｋｇ体重的硒多糖和亚硒酸钠后，血硒浓度迅速增加，在注射后２小时血硒浓度达到高峰，随后血硒浓度逐渐下降。亚硒酸钠在大鼠体内的吸收和排出均较硒多糖快。连续７天腹腔注射０．２ｍｇ／ｋｇ体重剂量硒多糖和亚硒酸钠后，硒多糖和亚硒酸钠组大鼠血硒浓度分别为对照组的２．６倍和２．１倍，其中硒多糖组的血硒含量显著高于亚硒酸钠组（Ｐ＜０．０５）；硒多糖和亚硒酸钠在体内、外均降低肝细胞色素Ｐ４５０、ｂ５的含量，抑制ＧＳＴ的活性，硒多糖的作用尤为显著，分别为对照组的５７％、７０％和６２％（Ｐ＜０．０５）。两种硒化合物对ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ－细胞色素Ｃ还原酶无明显影响。硒多糖和亚硒酸钠均能显著增强ＧＳＨ－Ｐｘ的活性（Ｐ＜０．０５）。

一种新的平滑肌调控蛋白Calponin

Ｃａｌｐｏｎｉｎ为一种平滑肌特有的调控蛋白，分子克隆的证据表明，它具有两种亚型，α型和β型分别由２９２和２５２个氨基酸组成它能与肌动蛋白结合，抑制肌球蛋白ＡＴＰ酶活性和平滑肌收缩其与肌动蛋白结合域有３８个氨基酸残基（第１４５～１８２位），丝氨酸１７５在调宁蛋白与肌动蛋白的相互作用中起重要作用，它还能与钙调蛋白结合，呈钙依赖性。

白细胞介素2受体的两种蛋白及其功能

白细胞介素2(IL-2)是T 细胞生长因子,但除了维持T 细胞增殖以外,IL-2还可促进NK 活性、诱生LAK 细胞、促进B 细胞分泌抗体。这些功能是否由同一种受体介导,一直是一个令人感兴趣的问题。T 细胞经丝裂原或抗原激活后,细胞表面出现一种Tac 抗原,分子量为55KD,已证明这种p55蛋白就是IL-2受体。由于p55能结合IL-2,并且是在T 细胞激活时出现的,从而使人们相信p55就是介导IL-2生理作用的受体。但令人不解的是,在NK 细胞、LAK

白细胞介素1诱导激素对免疫应答的调节

在免疫应答中,由巨噬细胞产生的白细胞介素1(IL-1),不仅是介导免疫应答的一种重要因子,同时也是诱导激素对免疫应答进行反馈调节的一种重要媒介。胰岛素对免疫应答有促进作用,糖皮质激素对免疫应答有抑制作用;IL-1在低浓度时促进胰岛素分泌,在高浓度时则抑制胰岛素分泌,并诱导糖皮质激素产生。因此,不同浓度的IL-1可分别诱导激素对免疫应答的正负反馈调节,这种双向调节作用是维持免疫应答动态平衡的重要机制之一。