联合化疗对膀胱癌细胞株BIU-87毒性作用的体外实验研究

实验采用微量细胞培养噻唑蓝显色法观察丝裂霉素C（MMC）、阿霉素（ADM）、羟基喜树碱（HCPT）和噻替派（TSPA）等药物联合应用对膀胱癌细胞株BIU－87的毒性作用。结果显示HCPT与MMC、ADM联合应用能取得较好疗效。连续用药组预期50％抑制率剂量（ID50）与实测ID50的比值分别为13．59、11．26；序贯用药组先用HCPT，后用MMC、ADM、TSPA等药物，抑制率明显大于相同剂量药物单用抑制率。联合用药能增强化疗药物对BIU－87细胞的毒性作用。

热毒清拮抗内毒素损伤线粒体的实验研究

本实验制作内毒素所致家兔DIC模型。观察到肝细胞线粒体在超微结构和功能方面均受到明显损害。而应用热毒清注射液之模型动物肝细胞超微结构基本正常;线粒体呼吸功能、ATP酶,肝匀浆和血清过氧化脂质(LPO)接近正常,与模型组比较差异有显著性意义(P<0.01)或<0.05)。体外实验与体内实验结果一致,从而提示热毒清有拮抗内毒素损伤线粒体的功能。

不同修饰型反义寡核苷酸抑制癌基因表达生物学效应的初步观察

比较了两种不同的反义寡核苷酸抑制ＨＬ－６０细胞ｃ－ｍｙｃ癌基因表达的效应。二者有相同的碱基序列，但有不同的修饰方式，即全硫代修饰及卟啉修饰；另外还合成了两种非修饰型的反义和错义寡核苷酸作为对照。ＭＴＴ细胞增殖实验、ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ的Ｄｏｔｂｌｏｔ检测、ｃ－ｍｙｃ蛋白的免疫组化检测等结果显示卟啉修饰的寡核苷酸除了具有明显的的特异性抑制基因表达的效果外。

HL-60细胞诱分化及细胞膜恶性标志逆转的实验研究

本文采用荧光偏振技术和受体荧光定量测定法,动态观察DMSO(二甲亚砜)体外诱导人急性早幼粒白血病细胞系(HL-60细胞)沿粒系统成熟分化过程中细胞膜流动性及膜ConA受体结合量的改变,还测定Molt4和Raji淋巴瘤细胞膜的相应变化.结果表明,随分化细胞百分率增加膜流动性和ConA受体结合量降低,呈现有意义的逆转改变(P<0.01).二株淋巴瘤细胞膜的流动性和ConA受体结合量均明显高于正常淋巴细胞。实验结果证实了膜流动性增高及ConA受体结合量增加是HL-60细胞的膜表型特征,并能随恶性细胞的诱导分化而逆转。

卟啉胆固醇酯对癌细胞膜流动性的影响及其代谢热谱的研究

用荧光偏振技术研究了卟啉胆固醇酯对人何杰金淋巴瘤细胞(Daudi 细胞)和人早幼粒细胞性白血病细胞(HL-60 细胞)膜流动性的影响;用微量量热法测定了 HL-60 细胞与卟啉胆固醇酯作用后的代谢热谱。结果表明:卟啉胆固醇酯能明显降低癌细胞膜的流动性;对癌细胞的生长有强抑制作用,不同的酯其抑制方式不同。

大鼠肺和脑组织中一氧化氮合成酶mRNA表达的研究

以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交法观察了３种一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）即脑ＮＯＳ（ｂＮＯＳ）、内皮ＮＯＳ（ｅＮＯＳ）和巨噬细胞ＮＯＳ（ｍａｃＮＯＳ）在大鼠肺和脑组织中ｍＲＮＡ的表达情况。结果显示：肺组织存有ｅＮＯＳ和ｍａｃＮＯＳｍＲＮＡ表达，其ｍＲＮＡ杂交带分子大小分别为４．８ｋｂ和４．５ｋｂ；脑组织只有ｂＮＯＳｍＲＮＡ表达，其杂交带分子大小为１０．５ｋｂ。提示３种ＮＯＳ基因结构各异，且其在大鼠肺和脑组织中的分布和表达亦不相同。

人vigilin基因5'端调控区域的研究

在克隆了人基因组全长ｖｉｇｉｌｉｎ基因的基础上，对其５端转录调控区域再克隆，获得Ｖｉｇ－ＣＧ５－７Ｅ克隆，再用限制酶ＡｐａⅠ和ＥｃｏＲⅠ切除３端约４ｋｂ部分，得到Ｖｉｇ－ＣＧ５－７Ｅ３ＡＥ克隆，并对该克隆进行双向测序分析．结果表明：克隆Ｖｉｇ－ＣＧ５－７Ｅ用ＡｐａⅠ酶消化后，用ｃＤＮＡ上游开始的２０个碱基组成的寡聚核苷酸做探针进行分子杂交，可见一条小于０．１ｋｂ杂交带，根据物理图谱分析，位于Ｖｉｇ－ＣＧ５－７Ｅ３ＡＥ克隆的ＡｐａⅠ端，从而推断该克隆含有转录调控元件，５端序列分析得到二个ＴＡＴＡ盒，一个ＣＡＡＴ盒和一个ＧＣ盒以及二个可能的Ａｐ－１和Ａｐ－２结合位点．

急性白血病患儿血清可溶性白细胞介素2受体水平的研究

采用双抗体夹心酶联免疫试验法（ＥＬＩＳＡ）对６５例急性白血病患儿血清可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）水平进行检测。结果显示，患儿ｓＩＬ－２Ｒ水平与正常对照组（２５０．９４±９１．４５ｋＵ／Ｌ）比较，化疗前初诊时急性期组（５２６．３２±２８５．６５ｋＵ／Ｌ）及复发组（５５０．００±４１１．２６ｋＵ／Ｌ）明显增高（Ｐ＜０．０１），完全缓解组（２５０．７１±１１７．３１ｋＵ／Ｌ）则无显著差异（Ｐ＞０．０５）。血清ｓＩＬ－２Ｒ水平的变化与外周血及骨髓白血病细胞数呈正相关。提示ｓＩＬ－２Ｒ水平可作为急性白血病患儿病情监测及疗效判断的指标之一。

HL-60细胞诱导分化期间细胞表面ConA受体结合量变化的研究

在用二甲亚砜(DMSO)诱导人急性早幼粒细胞性白血病细胞系(HL-60 Cell)沿粒系统分化成熟的实验基础上,我们用受体荧光标记技术和荧光分光光度法,进一步观察了HL-60细胞诱导分化期间,细胞膜流动性动态降低对膜上伴刀豆球蛋白(ConA)受体结合量的影响。

正常和恶性淋巴细胞膜的流动性及其对PHA、ConA刺激的反应性

本实验采用疏水性荧光探针DPH(1,6-diphenyl-1,3,5-hexatriene,1,6-二苯基-1,3,5-己三烯)标记小鼠的淋巴细胞膜,根据荧光偏振值的变化比较正常细胞膜和癌变细胞膜流动性及对外界刺激反应性的差别。实验结果表明癌变淋巴细胞膜的流动性明显增高(P<0.001)。用同样浓度的ConA 10mg/L,PHA 40mg/L刺激后,荧光偏振值的变化幅度和方向也不同于正常细胞。本文还对以细胞膜流动性变化作为癌变指标的可能性作了补充说明。

人膀胱癌耐药细胞系BIU-87/A、BIU-87/V的建立及耐药分析

为研究人膀胱癌细胞株耐药机制，应用阿霉素（ＡＤＭ）、足叶乙甙（ＶＰ－１６）低浓度持续递增法，在体外持续培养１０个月，逐步诱导人膀胱癌细胞系ＢＩＵ－８７，获得具有多重抗药性的ＢＩＵ－８７／Ａ、ＢＩＵ－８７／Ｖ细胞。通过检测抗癌药物５０％抑制率剂量，ＢＩＵ－８７／Ａ、ＢＩＵ－８７／Ｖ细胞分别对ＡＤＭ、ＶＰ－１６的耐药程度较亲本细胞提高５７．４２倍、５．４４倍。两种耐药株显示了相似的耐药谱，均对ＡＤＭ、ＶＰ－１６、长春新碱和阿糖胞苷等药物产生耐药性，且随着培养时间延长，耐药性增强，但对丝裂霉素Ｃ、噻替哌和顺铂仍保持敏感性。结果表明ＢＩＵ－８７／Ａ、ＢＩＵ－８７／Ｖ细胞具有多重抗药性（ＭＤＲ）表型，为不同药物诱导人膀胱移行细胞癌ＭＤＲ机制和筛选抗药性逆转剂提供理想模型。

一种快速筛选和鉴定重组体的方法——改良菌落PCR

在对DNA片段进行亚克隆的实验中,阳性重组子的筛选是鉴定外源DNA是否插入载体的重要步骤。常用的方法有两种:一是在含抗生素的平皿上挑取转化生长的单菌落,经液体培养基扩大培养后,提取质粒,再经酶切或PCR扩增鉴定;另外,还可以用菌落原位杂交的方法进行初筛。这两种方法虽然可靠,但是步骤复杂繁琐,而且后一种方法还存在污染问题。我们在构建重组毒素表达载体时,摸索出了一种改良的菌落PCR扩增筛选法,既准确又简易,现介绍如下。

正常人精子和冷贮后精子的膜流动性及乙烯雌酚对其的影响

采用荧光探针DPH（1，6-diphenyl-1，3，5-hexatriene，1，6-二苯基-1，3，5-己三烯）标记人精子膜，测定正常人精子和冷贮与未冷贮精子膜流动性以及对乙烯雌酚的反应。结果表明乙烯雌酚可提高精子膜流动性，冷贮可降低精子膜流动性，但后者加入乙烯雌酚后膜流动性可恢复正常。提示采用冷贮精子人工授精时辅以雌激素有助于提高受精率。乙烯雌酚作用部位可能与精子雌激素受体有关。

人脾贴壁细胞中TNFα转换酶cDNA的克隆以及LPS对其表达的影响

根据ＴＮＦα转换酶（ＴＮＦα ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ，ＴＡＣＥ）ｃＤＮＡ序列和 ＴＡＣＥ分子结构特征设计并合成引物，采用逆转录 ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，首次从健康人脾贴壁细胞中扩增出 ＴＡＣＥ ｃＤＮＡ解整合素结构片段（ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ ｄｏ－ｍａｉｎ），并用大肠杆菌脂多糖（ＬＰＳ）刺激人脾贴壁细胞，观察其对 ＴＡＣＥ ｍＲＮＡ表达的调节作用。结果表明：不同健康人脾贴壁细胞中均存在 ＴＡＣＥ ｍＲＮＡ的自然表达，并且 ＬＰＳ对该表达具有上调作用，其上调程度与 ＬＰＳ刺激时间呈正比关系。

p53基因结构和表达的改变与慢性粒细胞性白血病急变的关系

应用PCR- SSCP、Northern blot和免疫细胞化学方法,对30例临床各期慢性粒细胞性白血病(CML)和K562、HL-60细胞系进行p53基因突变与表达的研究。结果发现,17例慢性期CML中仪1例有外显子6的突变和细胞内P53蛋白的聚积,所有病例均可检测到p53的mRNA表达。而4例加速期和9例急变期CML中各有2例分别在外显子5、6、7上发现突变,有p53表达的仅7例,1例加速期患者的P53蛋白呈强阳性。K562和HL-60细胞系中P53蛋白和mRNA均呈阴性。CML恶化进程中p53基因突变和表达频率的改变表明P53基因的改变至少在部分CML急变中起着重要作用。

基质金属蛋白酶活性测定的改良底物胶电泳法

基于ＳＤＳ－聚丙烯酸胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）的原理和技术方法，介绍一种改良的明胶－聚丙烯酰胺凝胶电泳方法（Ｇｃｌａｔｉｎ－ＰＡＧＥ），简称底物胶电泳法，用于测定能够水解明胶的基质金属蛋白酶类（ＭＭＰｓ）的水解活性。该方法简便实用，将底物胶中明胶浓度从 １０ ｇ／Ｌ降至 ２ ｇ／Ｌ，并将分子质量标准浓度提高至≤４０μｇ／孔，较好地解决了实验过程中所遇到的有关分子质量鉴定的难题。

IL-2重组毒素的克隆、表达及对IL-2R^+淋巴细胞的特异性细胞毒效应

目的 :为了探讨肿瘤细胞的靶向性杀伤途径。方法 :采用PCR Cloning技术和DNA重组技术 ,构建了 2类IL 2 PE40’嵌合基因的表达载体 ,分别由IPTG和温度 (42℃ )诱导表达 ,并对表达产物进行了酶切片段大小、电泳迁移率、分子量、IL 2和PE40’组分抗原性及细胞学效应的检测。结果 :发现重组毒素对表面表达IL 2受体的活化T淋巴细胞具有明显杀伤效应 ,并有抑制混合淋巴细胞反应的作用。结论 :该IL 2 PE40’融合蛋白确实具有明显的特异性免疫抑制效应。

重组毒素及其衍生物的研究进展

近年来,重组毒素的研究有了很大的进展,一系列重组毒素的衍生物构建成功,突破了原有重组毒素的经典结构框架,在实验动物研究中有很明显的细胞毒和抗肿瘤治疗效应,在临床上也得到初步应用,使用范围也在扩大,对它的研究正在不断的深入。

人Vigilin基因5＇端EcoRI片段的克隆及限制性酶切图谱分析

为了解人基因组Ｖｉｇｉｌｉｎ基因结构和探讨Ｖｉｇｉｌｉｎ蛋白的功能，在人基因组Ｖｉｇｉｌｉｎ基因全长克隆的基础上，在５＇端ＥｃｏＲＩ片段亚克隆（Ｖｉｇ－ＣＧ５－７Ｅ），并从１３个限制性核酸内切酶中选出６种对亚克隆ＤＮＡ进行部分酶切和分子杂交，组建了克隆Ｖｉｇ－ＣＧ５－７ＥＤＮＡ的详细限制性酶切图谱，从而为克隆Ｖｉｇｉｌｉｎ基因的转录调控序列提供合适的酶切位点。

热毒清抗矽尘毒性效应的细胞化学定量观察

为进一步探讨中药热毒清抗矽尘毒性效应,对不同培养阶段的5组小鼠腹腔巨噬细胞用形态学和细胞化学方法,对巨噬细胞的形态及ACP活性,用显微镜及显微分光光度计进行了定性、定量动态观察。结果:吞噬矽尘后的SiO_2组巨噬细胞远较中药、P_(204)及联合用药组迅速死亡,崩解。细胞内ACF活性也大大低于其他组(P<0.01),但中药与P_(204)组间差异无显著性(P>0.05)。认为,热毒清有明显的抗矽尘毒性效应。