联合化疗对膀胱癌细胞株BIU-87毒性作用的体外实验研究

实验采用微量细胞培养噻唑蓝显色法观察丝裂霉素C（MMC）、阿霉素（ADM）、羟基喜树碱（HCPT）和噻替派（TSPA）等药物联合应用对膀胱癌细胞株BIU－87的毒性作用。结果显示HCPT与MMC、ADM联合应用能取得较好疗效。连续用药组预期50％抑制率剂量（ID50）与实测ID50的比值分别为13．59、11．26；序贯用药组先用HCPT，后用MMC、ADM、TSPA等药物，抑制率明显大于相同剂量药物单用抑制率。联合用药能增强化疗药物对BIU－87细胞的毒性作用。

AFB_1所致实验性大鼠急性肝损伤的组织学、组织化学及超微病理学研究

应用组织学、酶组织化学和电镜技术,系统观察了黄曲霉毒素B_1(AFB_1)诱发的大鼠肝损伤。发现以汇管区周围肝细胞变性坏死为主的组织学改变、SDH和ATPase活性明显降低、ACPase活性增高等酶组化反应和肝窦扩张、窦内充填坏死肝细胞碎屑和凋落小体以及肝细胞核仁变性、核仁帽形成、核仁溶解、内浆网扩张、脂肪变性、大量自噬小体出现等超微结构损伤。笔者认为,AFB_1对肝细胞膜以及膜性结构的直接毒性作用是导致肝细胞急性变性坏死的主要因素。

PHA、抗CD_3单抗、IL-2诱导脾细胞增殖及其抗肿瘤效应的实验研究

本文应用PHA、抗CD_3单抗、IL-2体外诱导正常人脾细胞增殖,并探讨了在不同条件的诱导下脾细胞体外增殖能力和抗肿瘤效应,以及细胞表面标志的表达特征.结果显示,抗CD_3单抗、PHA不仅可增强IL-2诱导脾细胞的增殖作用,且两者合用有协同增强效应.PHA、抗CD_3单抗还可增强体外扩增细胞CD_4和Tas受体的表达.LAK细胞抗肿瘤活性测定结果提示,PHA有直接和间接增强LAK细胞抗肿瘤效应的作用,抗CD_3单抗则可通过增加细胞增殖作用,间接地增强LAK细胞的抗肿瘤活性.

热毒清拮抗内毒素损伤线粒体的实验研究

本实验制作内毒素所致家兔DIC模型。观察到肝细胞线粒体在超微结构和功能方面均受到明显损害。而应用热毒清注射液之模型动物肝细胞超微结构基本正常;线粒体呼吸功能、ATP酶,肝匀浆和血清过氧化脂质(LPO)接近正常,与模型组比较差异有显著性意义(P<0.01)或<0.05)。体外实验与体内实验结果一致,从而提示热毒清有拮抗内毒素损伤线粒体的功能。

实验性肝癌超微结构的体视学研究

应用电镜技术和体视学定量分析方法,在二甲氨基偶氮苯诱发大鼠肝癌的癌发生过程中的各个不同时期,对肝细胞核、核仁及核仁颗粒成分的体密度进行了定量分析。结果表明:在给予致癌剂后,这三种成分的体密度值均呈上升改变,至肝癌形成后即明显高于正常,其在癌细胞与非癌细胞之间的差异有非常显著性意义(P<0.01)。这对于较确切地了解癌发生过程中不同时期的细胞功能状态及确定其恶性程度有一定的帮助。

中药复方“再障Ⅰ号”治疗再生障碍性贫血临床和实验研究

以“再障Ⅰ号”为基本方，辨证加减治疗再生障碍性贫血31例，近期有效率达90．32％，治愈缓解率达58.06％。实验研究结果表明本方能明显促进放射损伤小鼠造血及免疫功能的恢复和免疫介导小鼠再障的缓解，表现为外周血白细胞数、血小板数、骨髓有核细胞数及适血多能干细胞数升高；纠正(或消除)因免疫紊乱而产生的血浆粒单系祖细胞抑制活性。

阿霉素诱导单侧肾切除后大鼠肾小球硬化模型的实验研究

采用大鼠单侧肾切除后一次小剂量(3mg/kg)阿霉素尾静脉注射后造成肾小球硬化模型长达8个月的观察。结果表明:阿霉素注射3个月后出现大量蛋白尿和低蛋白血症、高胆固醇血症,无肾小球硬化。注射5个月后所有大鼠发展成为局灶性、节段性肾小球硬化。8个月后肾小球硬化更严重,伴有肾小管间质病变,其硬化率达49.90％。肾小球硬化率与尿蛋白呈正相关(r=0.97 P<0.01),与血清肌酐呈正相关(r=0.87 P<0.05)。认为阿霉素所诱导大鼠慢性进行性肾小球病变导致肾功能不全与人类的局灶性、节段性肾小球硬化病变相似。

体外感染细胞表达HCV-NS5和复制HCV RNA的实验研究

为了研究 HCV- NS5 和 HCV RNA在体外感染细胞培养系统中的表达和复制情况 ,选用 HCV RNA水平为2× 10 4拷贝 / m l的阳性血清感染人肝癌细胞株 (Hep G2细胞株 )。应用胶体金标免疫电镜法和原位杂交法检测 HCV在被感染细胞中 NS5 蛋白表达和 RNA复制的情况。结果在细胞浆内有电子密度大的金标颗粒的吸附 ,在感染后的第 1至第 9代细胞中均有发现。感染后的细胞超微结构完整 ,未发现 HCV颗粒。在感染后的第 1至第 7代细胞内出现特异性杂交信号 ,HCV RNA阳性物呈蓝紫色细小颗粒分布在细胞浆和细胞核内。因此 ,HCV能够在 Hep G2细胞中表达 NS5抗原和复制 RNA,而细胞超微结构完整。

HL-60细胞诱分化及细胞膜恶性标志逆转的实验研究

本文采用荧光偏振技术和受体荧光定量测定法,动态观察DMSO(二甲亚砜)体外诱导人急性早幼粒白血病细胞系(HL-60细胞)沿粒系统成熟分化过程中细胞膜流动性及膜ConA受体结合量的改变,还测定Molt4和Raji淋巴瘤细胞膜的相应变化.结果表明,随分化细胞百分率增加膜流动性和ConA受体结合量降低,呈现有意义的逆转改变(P<0.01).二株淋巴瘤细胞膜的流动性和ConA受体结合量均明显高于正常淋巴细胞。实验结果证实了膜流动性增高及ConA受体结合量增加是HL-60细胞的膜表型特征,并能随恶性细胞的诱导分化而逆转。

MTT比色法检测IL－2和杀伤细胞活性的研究

本文采用ＭＴＴ比色法测定了ＬＡＫ和ＴＩＬ细胞培养上清ＩＬ－２活性及ＬＡＫ细胞介导对体外培养的白血病细胞株的杀伤活性。结果表明ＬＡＫ细胞和ＴＩＬ细胞培养上清有较高的ＩＬ－２活性，可用于支持培养ＩＬ－２依赖株的生长；ＬＡＫ细胞对体外培养的白血病细胞株有明显的杀伤作用。其杀伤效应随效靶比例增加而增高；同时亦证明：活的白血病细胞数与ＭＴＴ甲赞形成产物呈直线相关性，提示通过ＭＴＴ法测定ＯＤ值能较好地反映活细胞数目及细胞毒效应。

大蒜素抑制人急性早幼粒白血病细胞生长的体外实验

本实验采用体外直接杀伤测定法，荧光偏振技术，ＭＴＴ比色分析法，ＤＮＡ合成的［３Ｈ］－ＴｄＲ掺入法，微量量热法五种测定技术从细胞膜流动性改变、线粒体功能，ＤＮＡ合成速率、细胞总代谢率变化等细胞和分子生物学方面的变化研究大蒜素对ＨＬ－６０细胞的作用，结果表明，大蒜对对ＨＬ－６０细胞的增殖有抑制作用，高浓度（＞３０ｍｇ／Ｌ）时还有较明显的直接杀伤作用。

出血性卒中患者脑脊液微量元素和抗氧化酶含量的研究

本文测定３６例脑出血、３１例ＳＡＨ患者的脑脊液微量元素和抗氧化酶含量的变化，结果发现：脑出血和ＳＡＨ的脑脊液锌、硒、铬、铁、镁含量，ＧＳＨ－Ｐｘ活性和Ｇ／Ｍ比值明显低于对照组（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），铜、ＭＤＡ含量及ＳＯＤ活性明显高于对照组（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。提示：微量元素和抗氧化酶与出血性卒中有密切关系。

几种肿瘤免疫抑制因子作用的研究

通过体外细胞培养，采用ＭＴＴ法和ＮＯ测定法，观察了淋巴瘤（Ｒａｊｉ）、实体瘤（Ｓ_（１８０））、艾氏腹水瘤（ＥＡＣ）、肝癌（ＨＣ）４种肿瘤细胞产生的肿瘤免疫抑制因子（ＴＤＳＦ）对小鼠腹腔巨噬细胞产生ＮＯ和Ｔ淋巴细胞激活的影响。结果发现Ｒａｊｉ－ＴＤＳＦ和Ｓ_（１８０）－ＴＤＳＦ对巨噬细胞产生ＮＯ均有明显的促进作用（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５）．而ＥＡＣ－ＴＤＳＦ和ＨＣ－ＴＤＳＦ则否（Ｐ＞０．０５），它们对Ｔ淋巴细胞激活的抑制作用Ｓ_（１８０）－ＴＤＳＦ和ＥＡＣ－ＴＤＳＦ可被大蒜素（ＤＡＴＳ）所拮抗，与无ＤＡＴＳ组比较抑制率明显下降（Ｐ＜０．０１）；而ＤＡＴＳ却不能拮抗Ｒａｊｉ－ＴＤＳＦ和ＨＣ－ＴＤＳＦ的抑制作用（Ｐ＞０．０５）。结果表明，不同肿瘤细胞产生的ＴＤＳＦ的作用及其机制可能是多样的。

外源基因在耻垢分枝杆菌中表达效率的研究

将外源基因———日本血吸虫 2 6K抗原 (Schistosomajaponicum 2 6Kantigen ,Sj2 6GST)基因克隆到大肠杆菌 分枝杆菌穿梭质粒 pBCG 2 0 0 0中 ,构建四个不同的表达载体 ,研究了它们在耻垢分枝杆菌中的表达效率 .首先将含人结核杆菌热休克蛋白 70 (heatshockprotein ,hsp70 )启动子的质粒pMT 70用NcoⅠ切 ,进行两种不同的修饰 ,得到不同的SD序列 ,将Sj2 6GST基因克隆进去 ;再将含hsp70启动子和Sj2 6GST的基因片段克隆到 pBCG 2 0 0 0中 ,筛选出不同SD序列、不同方向和不同拷贝数的分枝杆菌表达载体四个 .所表达的天然重组Sj2 6GST在SDS PAGE上分子质量为 2 6ku处可见明显的表达蛋白带 .通过薄层扫描分析 ,发现表达质粒中 ,双拷贝启动子 外源基因组合表达效率最高 ,是单拷贝组合的 1 6倍 .而不同的克隆方向和不同的SD序列 (两者相差 3个碱基 )对表达效率的影响不明显 .

小儿急性白血病患者外周血T淋巴细胞亚群的研究

本文用单克隆抗体SACI-Ig花环法测定了小儿急性白血病及再生障碍性贫血患者外周血T淋巴细胞亚群的变化。结果显示,在急性淋巴细胞性白血病及再生障碍性贫血患儿OKT8^+细胞均明显高于正常,OKT4^+/OKT8^+比值显著降低,但在急性粒细胞性白血病患儿淋巴细胞亚群变化不明显。这提示,抑制性T细胞(OKT8^+)的增多可能与小儿急性淋巴细胞性白血病及再生障碍性贫血的发生或发展有关。

双功能域重组FN多肽抑制癌细胞浸润能力的研究

在制备了两个Cell Ⅰ-Hep Ⅱ 双结构域重组FN多肽(CH50和CH56)的基础上,研究其抑制肿瘤细胞浸润能力的作用。两个多肽的结构差异是CH50中删除了Cell I和HepⅡ之间的Ⅲ-11和ED-A结构顺序。CH50(ED_(50)为30.2 nmol/L)结合细胞的能力略高于CH56(ED_(50)为45.4 nmol/L)。两种多肽均可显著抑制黑色素瘤B16/F1细胞结合层粘素的能力,抑制作用相同。在体内肿瘤浸润抑制试验中,两种多肽均可显著抑制癌细胞浸润能力,使肺转移结节数降低80％左右。结果提示:Ⅲ-11和ED-A结构顺序对Cell Ⅰ-Hep Ⅱ 双结构域多肽结合细胞的能力有一定的影响,但删除Ⅲ-11和ED-A不是重组多肽抑制肿瘤转移的决定因素,Cell I和Hep Ⅱ 这两个结构域单独连接在一起是其抑制肿瘤细胞转移的结构基础。

新型大肠杆菌-分枝杆菌穿梭载体的构建及卡那霉素抗性基因表达的研究

用 PCR（polymerase chain reaction）技术克隆了卡介苗（Bacille Calmette-Guerin,BCG）热休克蛋白 65（heat shock Protein 65, hsp65）启动子序列,构建成穿梭载体ME-65。该载体含有分枝杆菌和大肠杆菌的质粒复制基因、BCG的hsp65高效启动子序列以及在分枝杆菌和大肠杆菌中都能表达的卡那霉素抗性基因。将其转化到耻垢分枝杆菌和BCG中均可稳定复制并表达卡那霉素抗性。质粒对宿主菌的生长无明显的影响,未观察到质粒的丢失和突变。该载体具有分子量小、容量大、转化效率高、复制稳定、含有多克隆位点等优点,将外源基因插入到hsp65启动子的下游,可望在BCG中获得高效表达。为BCG和其它分枝杆菌发展成多价重组疫苗开辟了新途径。

急性白血病患者外周血单个核细胞内及癌细胞株细胞内cAMP、cGMP的研究

本文报告应用放射免疫法检测了37例急性白血病患者(急性淋巴细胞性白血病,简称急淋18例:急性粒细胞性白血病,简称急粒19例)外周血单个核细胞内、8个癌细胞株细胞内、15例正常人外周血单个核细胞中cA MP、CG MP的含量。结果白血病癌细胞株细胞内、急淋、急粒患者的治疗前,诱导期外周血单个核细胞内cAMP含量比正常入低。cGMP的含量比正常人高。cAMP/cGMP比值低于正常人,P<0.01。而缓解期病人cAMP水平回升,cGMP及cAMP/cGMP比值水平下降均接近正常对照组,提示:急性白血病患者的外周血单个核细胞内及白血病癌细胞株细胞内的环核苷酸有变化,而且急淋病人细胞内的环核苷酸的变化较急粒显著,白血病的不同的时期环核苷酸更有差异。

卟啉胆固醇酯对癌细胞膜流动性的影响及其代谢热谱的研究

用荧光偏振技术研究了卟啉胆固醇酯对人何杰金淋巴瘤细胞(Daudi 细胞)和人早幼粒细胞性白血病细胞(HL-60 细胞)膜流动性的影响;用微量量热法测定了 HL-60 细胞与卟啉胆固醇酯作用后的代谢热谱。结果表明:卟啉胆固醇酯能明显降低癌细胞膜的流动性;对癌细胞的生长有强抑制作用,不同的酯其抑制方式不同。

卡介苗载体及其在疫苗研究中的应用

卡介苗是发展多价疫苗最好的载体之一.把外源基因导入卡介苗有3种途径:一是分枝杆菌噬菌体衍生的基因转移系统;二是分枝杆菌质粒衍生的基因转移系统;三是同源重组基因转移系统.重组卡介苗多价疫苗的研制为各种疾病的预防开辟了广阔的前景.