脂蛋白（a）的研究进展──生物化学与分子生物学方面

脂蛋白（ａ）［Ｌｐ（ａ）］是一种与低密度脂蛋白类似的脂蛋白，其特殊处在于多含一种具明显多态性的糖蛋白──载脂蛋白（ａ）［Ａｐｏ（ａ）］。Ａｐｏ（ａ）与血浆纤溶酶原有很大同源性。Ｌｐ（ａ）由肝合成，其分解可能主要经非特异途径。Ａｐｏ（ａ）大小及血浆Ｌｐ（ａ）浓度主要由Ａｐｏ（ａ）基因决定。Ｌｐ（ａ）易沉积于血管壁，并可促进平滑肌细胞生长及抑制纤维蛋白溶解，这可能是其促动脉粥样硬化和血栓形成的机理所在。Ｌｐ（ａ）的生理功能尚不清楚。

偏头痛患者血清一氧化氮测定的临床意义

目的 :研究偏头痛发作与患者血清一氧化氮 (NO)和环磷酸鸟苷 (cGMP)变化的关系及其临床意义。方法 :用荧光分光光度法和放射免疫法分别检测 32例偏头痛发作期、2 5例间歇期和 30例正常人血清中NO2 和cGMP的含量。结果 :偏头痛发作期患者血清中NO2 和cGMP的含量明显高于间歇期和正常对照组 (P <0 .0 1)。偏头痛间歇期患者血清中NO2 和cGMP的含量仍高于正常对照组 (P <0 .0 1)。结论

急性脑缺血老年龄鼠血清和脑组织中一氧化氮和内皮素-1的变化

目的 研究老年鼠急性脑缺血后外周血及脑组织中一氧化氮 (NO)和内皮素 - 1 (ET- 1 )的变化。方法 用荧光分光光度法和放射多疫法检测脑缺血组和假手术对照组血清和脑组织中 NO和 ET- 1的含量。结果 缺血组大鼠血清 NO的含量低于假手术组(P<0 .0 1 ) ,血清 ET- 1的含量明显高于假手术组 (P<0 .0 1 )。缺血组脑组织中 NO和 ET- 1的含量均明显高于假手术组 (P<0 .0 1 )。结论 NO和 ET-

中国人极低密度脂蛋白受体基因的克隆及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

为了研究极低密度脂蛋白受体结构与功能的关系 ,本文利用反转录聚合酶链反应技术从中国人心肌组织中克隆出极低密度脂蛋白受体的全长cDNA后 ,将其插入真核表达载体pcDNA3获得重组体pCD -VR。测序结果发现 ,这一源于中国人的极低密度脂蛋白受体基因cDNA的碱基序列与文献报道基本相符。反转录聚合酶链反应检测证实 ,转染pCD -VR的中国仓鼠卵巢细胞可有效表达极低密度脂蛋白受体mRNA。脂蛋白结合实验结果发现 ,转染的中国仓鼠卵巢细胞结合极低密度脂蛋白的能力明显增高。

裸露DNA疫苗pCDSj32的构建、鉴定及在小鼠骨骼肌细胞的表达

应用基因工程技术，对本室已经克隆的日本血吸虫成虫３２ｋＤａ蛋白分子的ｃＤＮＡ片段进行ＰＣＲ扩增，扩增产物亚克隆入高效真核表达载体ｐＣＤ，构建成功裸露ＤＮＡ疫苗ｐＣＤＳｊ３２。ｐＣＤＳｊ３２在ＢＡＬＢ／ｃ小鼠骨骼肌细胞得到表达。表达产物可被小鼠抗３２ｋＤａ蛋白分子单抗识别。免疫荧光定位显示，表达产物不但存在于细胞浆，而且可结合于胞膜并被分泌至胞外。

极低密度脂蛋白对小鼠腹腔巨噬细胞载脂蛋白E基因表达的影响

为研究载脂蛋白Ｅ含量不同的极低密度脂蛋白对巨噬细胞载脂蛋白Ｅ表达的影响，以肝素－琼脂糖凝胶亲和层析法将正常人极低密度脂蛋白分离为富含载脂蛋白Ｅ和贫含载脂蛋白Ｅ的二种不同亚组分，并分别以不同浓度与小鼠腹腔巨噬细胞共培养。而后以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析和十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法研究了其对小鼠腹腔巨噬细胞载脂蛋白Ｅ基因表达的不同影响。结果发现，两种极低密度脂蛋白亚组分在较低浓度（含甘油三酯１００μｇ／Ｌ）时均可刺激小鼠腹腔巨噬细胞载脂蛋白Ｅ基因的表达，且尤以贫含载脂蛋白Ｅ的极低密度脂蛋白作用更为明显，其刺激后的细胞ｍＲＮＡ及蛋白质表达分别增高约１．５８和１．８２倍。但高浓度的二种极低密度脂蛋白亚组分刺激的细胞ｍＲＮＡ水平下降为对照的６５％，而蛋白质水平却升高２倍之多，其机制未明。上述实验结果说明，贫含载脂蛋白Ｅ极低密度脂蛋白可能在较低浓度下具有更强的刺激小鼠腹腔巨噬细胞载脂蛋白Ｅ基因表达的能力，而高浓度时则不然。

叶酸、维生素C与5-氟尿嘧啶合并用药对孕鼠和胚胎的毒性

本文观察了5-FU对孕鼠、胚胎的毒性,发现随剂量的增加毒性增强,孕鼠、胚胎体重减轻、生长迟缓,胚胎吸收率增加。若同时给维生素C、叶酸,不仅不能使5-FU的毒性减轻,反而使其毒性增加,胚胎吸收率及血清球蛋白升高,胚胎存活率、胚胎正常发育率、血清白蛋白及白/球比值均降低。结果表明维生素C、叶酸与5-FU合并用药可明显增强5-FU的毒性。

离子转运ATP酶的结构和功能

离子转运ATP酶是广泛存在于生物膜上的一种酶蛋白,其结构和功能较复杂,在生物机体细胞的生命活动中起着重要的调控作用。

载脂蛋白E基因调控的研究进展

载脂蛋白E基因的表达受多种因素的影响。在其5＇及3＇冀区存在多种调控元件，众多的蛋白质因子可以与5＇翼区结合而调节载脂蛋白E在不同状态下的表达，3＇翼区的一个顺式作用元件则对其在肝脏的特异性表达具有重要作用。

富含胆固醇的脂蛋白对兔主动脉平滑肌细胞脂类堆积的影响及机制

为了观察富含胆固醇的脂蛋白对兔主动脉平滑肌细胞脂类堆积的影响及机制，用富含胆固醇的脂蛋白（β－ 极低密度脂蛋白、正常低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白） 与兔主动脉平滑肌细胞温育４８ ｈ 后，发现β－ 极低密度脂蛋白、正常低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白都能促进平滑肌细胞内总胆固醇和甘油三酯堆积，以β－ 极低密度脂蛋白的作用更显著。乳铁蛋白作为低密度脂蛋白受体相关蛋白的一种特异配体，当它与上述脂蛋白共同与平滑肌细胞温育后，发现乳铁蛋白对脂蛋白所致的平滑肌细胞内脂质堆积有抑制作用。乳铁蛋白与标记的β－ 极低密度脂蛋白、正常低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白的竞争结合实验也进一步发现乳铁蛋白可明显竞争β－ 极低密度脂蛋白、正常低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白与平滑肌细胞的结合，且对β－ 极低密度脂蛋白的竞争抑制作用尤为明显。提示β－ 极低密度脂蛋白、正常低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白可能主要通过低密度脂蛋白受体相关蛋白介导进入平滑肌细胞，导致平滑肌细胞内脂质堆积。

蛛网膜下腔移植嗜铬细胞镇痛的耐受性研究

目的 观察嗜铬细胞移植镇痛的耐受现象及宿主对阿片制剂的敏感性 ,以评估该方法的临床应用价值。方法 36只雄性大鼠制作成单侧压迫性坐骨神经痛模型 ,随机分为两组 ,向蛛网膜下腔分别植入不同内容物。实验组 :10 μl嗜铬细胞悬液 ;对照组 :10 μl细胞培养液。连续观察 10周内大鼠患肢足趾部热痛阈的改变 ,并于移植术后第 6周 ,观察腹腔注射芬太尼 (0 0 2、0 2、2或2 0 μg)后动物最大抗热伤害效应的变化。 结果 坐骨神经结扎 5天后 ,该侧肢体表现出明显的痛敏现象 ,热痛阈显著降低 (P <0 0 1)。实验组细胞移植 1周后 ,动物的痛敏现象消失 ,热痛阈恢复至基础水平 ,并在其后的观察时间内无显著性改变 (P >0 0 5 )。而对照组动物在术后 9周内无明显改善 ,直至第 10周热痛阈才恢复至基础水平。腹腔注射 0 2 μg以上剂量的芬太尼 ,可明显提高两组动物的痛阈 ,增强其抗伤害效应。结论 蛛网膜下腔移植嗜铬细胞镇痛无耐受现象 ,且宿主对阿片制剂的敏感性增强 。

正常人两种极低密度脂蛋白亚组分对小鼠腹腔巨噬细胞脂质堆积的影响

本文研究了正常人极低密度脂蛋白（ｖｅｒｙｌｏｗｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＶＬＤＬ）两种亚组分，即贫含载脂蛋白Ｅ的ＶＬＤＬ和富含载脂蛋白Ｅ的ＶＬＤＬ对小鼠腹腔巨噬细胞（ｍｏｕｓｅｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｍａｃｒｏｐｈａｇｅ，ＭＰＭ）脂质堆积的影响。将贫含载脂蛋白Ｅ的ＶＬＤＬ和富含载脂蛋白Ｅ的ＶＬＤＬ分别与ＭＰＭ温育２４ｈ后，细胞内甘油三酯（ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ，ＴＧ）和胆固醇酯（ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｙｌｅｓｔｅｒ，ＣＥ）随ＶＬＤＬ浓度的增加而增加（方差分析，Ｐ＜０．０５），且对ＭＰＭ内ＴＧ的增加量以贫含载脂蛋白Ｅ的ＶＬＤＬ居多（Ｐ＜０．０１），而对ＭＰＭ内ＣＥ的增加量两者无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。这提示，贫含载脂蛋白Ｅ的ＶＬＤＬ和富合载脂蛋白Ｅ的ＶＬＤＬ均能促进ＭＰＭ内ＴＧ、ＣＥ堆积，从而使巨噬细胞（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ，ＭＰ）转变为泡沫细胞。

人胎盘酸性a-1,4葡萄糖苷酶的纯化研究

本文对GAA的纯化进行了改良，通过CM-SephadexC-50离子交换、酸化沉淀、（NH_4)_2SO_4分段盐析和SephadexG-100亲和层析等步骤，从人胎盘中提纯了GAA，其比活性为698，729nmol（mgPto．h）^（-1），纯化倍数达3319.4倍，获得率为10．58％。IEF证明已达电泳单点纯，PI=4.7。PAGE上呈现两条蛋白带，与酶染位点一致，分子量分别为110kD和76kD。

小鼠腹腔巨噬细胞对糖基化脂蛋白的氧化修饰作用

目的通过研究脂蛋白糖基化后易被氧化修饰的性质来探讨胰岛素抵抗患者易于发生动脉粥样硬化的机理。方法用葡萄糖和低密度脂蛋白（ＬＤＬ）共同温育后得到糖基化脂蛋白（Ｇｌｕ－ＬＤＬ），并用琼脂糖电泳法和硫代巴比妥酸（ＴＢＡ）比色法鉴定糖基化的程度。用Ｃｕ２＋和小鼠腹腔巨噬细胞分别和Ｇｌｕ－ＬＤＬ共同温育，检测ＴＢＡ反应物（ＴＢＡＲＳ）含量及电泳迁移速度。结果Ｇｌｕ－ＬＤＬ和未糖基化ＬＤＬ分别与Ｃｕ２＋共同温育８ｈ后，二者ＴＢＡＲＳ含量具有显著性差异（Ｐ＜０．００１）；Ｇｌｕ－ＬＤＬ和ＬＤＬ分别与小鼠腹腔巨噬细胞共同温育２４及４８ｈ后，二者ＴＢＡＲＳ含量亦具有显著性差异（Ｐ＜０．０５），电泳迁移率也有相应改变。结论脂蛋白糖基化后易被氧化修饰，说明其稳定性下降。

血清胆碱酯酶活性与体重及血脂的关系

本文通过对736例40-60岁工人的SChE，体重及血脂水平的分析，发现SChE与比体重、TC和TG之间呈正相关，相关系数分别为0．20、0.21和0．23，超重组的SChE活性比对照组明显升高．方差分析显示体重，TC和TG的变化都可引起SChE活性改变，并存在这三因素的交互作用。这一结果提示肥胖者的SChE活性增高既与伴随的血脂增高有关，也与肥胖本身存在一定联系。

肝病患者的血清胆碱酯酶活性

本文采用Ellman改良法测定了98例正常人和232例各种肝病患者的SchE活性。正常成人的SchE性为1．888±0．399μ／ml(ˉX±SD)。SchE活性除肝血管瘤时升高外，在肝突、肝硬化、肝癌和肝脓肿时则不同程度地降低，并与病情轻重相关，可作为判断病情的临床指标。SchE活性测定还可作为肝癌和肝血管瘤的鉴别诊断指标。

氧化型和正常极低密度脂蛋白对猪主动脉平滑肌细胞脂类堆积的不同影响

为了观察氧化型及正常极低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞内脂类堆积的不同影响，探索平滑肌细胞摄取氧化型极低密度脂蛋白的受体途径，用200mg/L的氧化型及正常极低密度脂蛋白与猪主动脉平滑肌细胞温育48h后，细胞内甘油三酯含量分别为对照组的3．2倍和10．6倍（P〈0．01），且两个实验组之间相比，差异也有显著性意义（P＜0．01）；细胞内总胆固醇明显升高（P＜0．05）．但是两个实验组之间无显著差异（P＞0．05）。荧光素异硫氰酸酯标记的氧化型极低密度脂蛋白结合试验表明；平滑队细胞可通过低亲和力受体途径可饱和性地摄取完整的氧化型极低密度脂蛋白（Kd＝48．82mg／L，Bmax＝2067μg／g）。与正常极低密度脂蛋白相比（Kd＝37．17mg／L，Bmax＝2596μg／g），Kd值升高，Bmax值减小。竞争抑制实验表明，氧化型极低密度脂蛋白、正常极低密度脂蛋白及正常低密度脂蛋白均对荧光素异硫氰酸酯标记的氧化型极低密度脂蛋白的结合摄取表现出明显的竞争作用（50％），而乙酰化低密度脂蛋白仅能抑制10％。提示氧化型极低密度脂蛋白通过低密度脂蛋白受体和／或极低密度脂蛋白受体途径进入平滑肌细胞。

血清胆碱酯酶活性变化对肝病病情判断的评价

本文通过对232例各种肝病患者的SChE活性与GPT、Bil．Tpr、Alb、Ch、PT、r-GT和AKP的直线相关分析，发现SChE活性变化与Tpr，Alb，Ch和PT相关，相关系数分别为O.30、O．31、0．37和-0．31。采用单西判别分析和条件概率法止较SChE与Alb、Bit、Ch和PT对判断肝病病情的价值大小，结果SChE、PT和Bu有较大的价值．并明显忧于Ch和Alb。

阴离子交换微型柱层析分离肌酸激酶同工酶

采用 DEAE-sephadex A-50离子交换微型柱层析分离肌酸激酶(CK)同工酶,继以紫外分光光度法测其活性的结果表明:血清及组织提取液 CK 同工酶分离洗脱均很完全。电泳证实,MM、MB、BB洗出液分别只含 CK 肌型同工酶(CK-MM)、心肌型同工酶(CK-MB)及脑型同工酶(CK-BB)。本法精密度高、线性关系好,过柱回收率高,敏感性强,而且快速、简便。