临床免疫学研究若干进展

进入21世纪以来,分子生物学理论和技术的快速发展和人类基因组计划的完成极大地促进了免疫学的各项研究;在临床免疫学领域也取得了日新月异的进展.兹就近年来临床免疫学领域的若干研究进展作一简要介绍.

旱獭肝组织中嗜肝病毒表面抗原表达的免疫组化研究

目的 从组织学和免疫学角度寻找旱獭嗜肝病毒感染的证据。方法 应用免疫组织化学技术以土拨鼠肝炎病毒表面抗原抗体检测101份旱獭肝组织中嗜肝病毒表面抗原的表达,同时观察旱獭肝组织常规病理改变,并对抗原检出与病理组织改变的关系进行相关分析。结果 旱獭肝组织中嗜肝病毒表面抗原检出率为82.2％(83/101)。阳性抗原颗粒定位于肝细胞胞浆和/或胞膜,阳性细胞呈散在、簇状和片状分布。101份肝组织标本中14份出现肝炎的病理改变,且与抗原检出之间存在明显的相关性(r=0.92)。结论 首次应用免疫组织化学技术证实早獭存在类似土拨鼠肝炎病毒的嗜肝病毒感染,此种动物有可能用于建立嗜肝病毒感染动物模型。

免疫转印技术在肾综合征出血热病毒多肽抗原研究中的应用

本文应用免疫转印技术(Immunoblotting)对我国分离的肾综合征出血热(HFRS)病毒抗原性多肽进行了分析,发现HFRS病毒50Kd多肽上可能存在着属特异性抗原决定簇。观察并讨论了实验条件对结果的影响,选择了最佳实验条件。

影响慢性乙型肝炎病毒感染者临床结局的病毒学因素研究进展

慢性乙型肝炎患者临床结局受多种因素的影响,主要包括宿主因素和病毒学因素两大方面,其中病毒学因素包括HBVDNA载量,HBV基因型、HBV基因变异及HBV蛋白表达等。本文就影响慢性乙型肝炎病毒感染者临床结局的病毒学因素研究进展进行了介绍。

血清免疫球蛋白检测质量控制方法的初步研究

采用Shewhart氏及Youden氏制图法对血清免疫球蛋白检测进行质量控制,对我室近年来免疫球蛋白检测结果进行了评价,并分析了免疫质量失控的可能原因。

TIM-3分子与临床疾病相关研究进展

TIM-3是TIMs家族中一个重要的成员,具有多种生物学作用。它是区分Th1/Th2细胞特异性的表面标志,还参与机体的固有免疫和特异性免疫应答的调节,与多种临床疾病的致病机制密切相关。本文就TIM-3的结构、表达、配体及与多种临床疾病的关系作一综述。

丙型肝炎病毒感染的分子和临床流行病学研究

1.在国内较早地建立了巢式多聚酶链式反应(nested—PCR)用于检测HCV RNA,并采用特异性探针和特异性引物两种方法对我国的HCV基因型别、构成特征及其流行病学意义进行了研究、发现我国HCV基因型构成特征是多种基因型共存,但以K1/1b和K2a/2a 型为主,混合型感染亦较多见。急性肝炎、慢活肝、重症肝炎、肝硬化、肝细胞肝癌和肾衰透析者HCV其因型以K1型为主,而慢迁肝者以K2型较多见。提示不同基因型别与疾病的发展和结局有一定关系。

应用标记抗生物素—生物素酶联免疫吸附试验(LAB—ELISA)进行血清α—FP定性与定量检测的研究

为探讨生物素-抗生物素系统(BAS)在血清α-FP定性与定量检测中应用的可行性、我室建立了血清α-FP检测LAB-ELISA,并对方法有关问题进行了探讨。

HDV感染肝脏病理及免疫病理研究

对167例HDV感染的肝脏病理变化及免疫病理表现进行了观察和分析。结果发现:HDV感染者肝在组织学上无特异性改变。HDV感染的慢性肝病者肝细胞的嗜酸性变和脂肪变较常见,免疫病理研究表明,肝细胞的坏死与HDV在肝细胞中表达形式有关,胞浆型与肝细胞坏死的关系较胞核型密切(P<0.01),而HDAg阳性细胞数与坏死无明显关系。HDAg阳性肝细胞多有不同程度的变性,但其周围未见炎性细胞浸润,间接支持HDV具有直接致细胞毒作用的推测。

急慢性乙肝病毒感染者肝内HLA-DR抗原的免疫组化研究

对95例急慢性HBV感染者应用免疫组化方法证实:28例(29.5％)患者的肝内检出HLA-DR抗原的肝细胞膜表达,表达HLA-DR抗原的肝细胞呈灶性和片状分布,常有较明显的水样变性,且与肝内HBcAg的存在有关。结果提示,HLA-DR抗原的膜表达可能与肝细胞损伤有关。

流行性出血热特异性循环免疫复合物检测及其临床意义

对263份不同病期流行性出血热患者血清中特异性循环免疫复合物进行了检测,同时观察了体液免疫功能、补体及纤维连结蛋白的动态变化,并应用放射免疫分析法测定了患者血浆β_2-微球蛋白与Tamm-Horsfall蛋白及尿液中β_2-微球蛋白含量。实验结果表明,流行性出血热患者体内可检出特异性IgG型、IgM型、IgA型、IgE型及IgD型循环免疫复合物,虽然它们的消长趋势有所不同,但是皆与流行性出血热患者补体激活、肾功能损伤及临床过程有密切关系,表明由特异性循环免疫复合物所介导的Ⅲ型变态反应是构成流行性出血热发病机理的重要因素。

免疫转印技术在传染病研究中的应用进展

免疫转印技术（Immunoblotting,IB）是本世纪70年代后期出现的一种新的免疫生化技术,该技术将凝胶电泳的高分辨力与固相免疫测定的敏感性、特异性相结合,兼具两者的特点,被广泛应用于基础和临床医学研究。本文仅就近年来该技术在传染性疾病研究中的应用作简要介绍。病毒性疾病在甲肝病毒（HAV）感染的病人及动物体内可以检出循环免疫复合物（CIC）,但在血中很难检出 HAV 抗原。Margolis 等应用 IB 对感染 HAV 的猩猩血液中 CIC 进行了分析,发现CIC 中可检出 HAV 衣壳蛋白（VP1～VP3）,特异性IgM、IgG、补 C3及纤维连结蛋白（Fn）,并且以 IgM型 CIC 为至。免疫复合物的形成以及 Fn 与 HAV 的结合掩盖了 HAV 的抗原结合位点,导致血中难以检出 HAV 抗原。Madalinski 等对慢性乙肝患者血中 CIC 组份的分析结果表明,HBeAg 阳性患者大多数可在 CIC 中检出 HBs 蛋白,但未检出 HBe 蛋白,CIC 中 PreS1含量较 HBsAg 颗粒高;抗 HBe

100例丙型肝炎病毒感染的临床研究

用国产抗-HCV EIA试剂盒检测812例各型肝病和受血治疗者的抗-HCV，其中142例阳性，检出率为17.49%。对资料完整的100例HCV感染者分析发现：（1）HCV感染以表壮年为主，男多于女。（2）丙型肝炎的主要症状体征为疲倦乏力，食欲不振和肝脏肿大。（3）HCV感染可表现为单纯抗-HCV阳性，轻度ALT升高和显性感染三种形式。（4）半数以上患者伴有基础疾病。（5）急性输血相关性丙型肝炎的潜伏期平均50.43天。（6）散发性丙型肝炎可能与职业、人群中互相接触机会以及使用公共物品的频率有关。（7）肝功能中ALT异常较SB异常多见；ALT表现为反复异常。（8）在HCV感染中有72%与HBV重叠感染，2%与HAV重叠感染，同时有既往感染HBV的标志。

中国青海地区喜马拉雅旱獭嗜肝病毒自然感染的组织学研究

应用原位杂交技术、免疫组化技术以土拨鼠肝炎病毒(Woodchuck hepatitis virus,WHV)的检测系统检测50份 喜马拉雅旱獭肝组织可能存在的嗜肝病毒c基因、s抗原及c抗原的表达,同时检测肝脏组织病理学改变。结果显示 旱獭肝组织中嗜肝病毒s抗原、c抗原的阳性率分别为26％(13／50)、36％(18／50);在抗原双阳性的10份肝组织标本 中有c基因的阳性表达,阳性率为50％。c抗原定位于肝细胞胞浆和／或胞核,呈散在、片簇状分布,c基因定位于肝细 胞的细胞核,阳性细胞散在分布。50份标本中5份出现肝炎的病理改变,与抗原检出间无明显相关性。使用WHV 的病毒检测系统证实青海地区喜马拉雅旱獭可能存在类似WHV的嗜肝病毒感染,从组织学的角度为中国青海地区 喜马拉雅旱獭嗜肝病毒自然感染提供证据,此种动物有可能用于建立嗜肝病毒感染的动物模型。

乙肝病毒感染不同阶段抗原肽特异性细胞毒性T淋巴细胞的初步研究

目的:为了阐明HBV感染不同阶段机体免疫功能的不同。方法:分别构建了我国最高频等位基因HLA-A*0201三种常见抗原肽表位(HBVcore18-27、pol575-583、env335-343)四聚体复合物,并用这些四聚体检测HBV感染外周血单个核细胞(PBMCs)中HLA-A*0201限制性抗原特异性CD8^+T细胞的频率、功能及CD127的表达。结果:在大多数自限性HBV感染者的PBMCs中抗原特异性CD8^+T细胞的频率和增殖能力都高于慢性HBV感染者。在低病毒载量的免疫低复制期抗原特异性CD8^+T的数量和在高病毒载量、肝脏损害免疫清除期及免疫耐受期抗原特异性CD8^+T细胞频率是相似的,同病毒定量及ALT水平无显著相关性。慢性HBV感染者抗原特异性CD8^+T细胞增殖能力和病毒滴度呈反比。在自限性HBV感染患者抗原特异性CD8^+T细胞分泌IFN-γ的功能明显高于慢性HBV患者,在免疫耐受期基本丧失产生细胞因子的能力;HBV感染后不同免疫状态的HBs Ag水平不同,免疫耐受期最高,其次为免疫清除期、再活动期,低复制期的最低。而且随着HBs Ag水平下降,同HBV DNA的相关性也逐渐下降。慢性HBV感染者中CD8^+CD127^+T细胞要低于对照组及自限性感染组,特别是在HBe Ag阳性的免疫耐受期及免疫清除期组患者中CD8^+CD127^+T细胞比例更低。结论:慢性HBV感染中抗原特异性CD8^+T细胞的频率不是决定免疫应答的唯一因素,慢性乙肝患者体内记忆性的抗原特异性CD8^+T细胞并未被完全清除或缺失,这为治疗性疫苗和免疫恢复治疗提供了可行性。

RNA干扰抑制人乙型肝炎病毒复制的研究

采用表达shRNA的载体构建了表达针对病毒HBsAgmRNA保守区的shRNA的质粒psiHBs,利用细胞模型和高压注射小鼠模型评价RNA干扰对HBV复制和基因表达的抑制作用。通过Western印迹检测细胞内的HBsAg,用ELISA检测细胞培养上清和血清中的HBsAg,采用Southern印迹检测HBV的复制中间体,最后通过免疫组化的方法检测肝组织切片中HBcAg的表达情况。结果显示pHBV1.3和psiHBs共转染HepG2后,与对照组相比病毒HBsAg和HBeAg的表达和病毒复制中间体的水平下降了90%以上,并且shRNA的作用效率存在序列特异性和剂量依赖性。在高压注射小鼠模型中,psiHBs表达的shRNA使小鼠血清中HBsAg的水平下降了80%以上,免疫组化检测显示,小鼠肝组织内HBcAg阳性细胞数减少了75.1%,而且shRNA的抑制作用至少能持续4d。研究显示载体表达的shRNA无论是在细胞或是在小鼠模型中都能对HBV的复制和基因的表达发挥序列特异性的抑制作用。本研究为我们下一步实现由RNAi介导的基因治疗提供了理论和技术支持。

肝病患者肝组织内CMV感染的初步研究

本文应用免疫组织化学方法检测140例急、慢性肝炎患者肝组织内CMV抗原,发现15例阳性(10.7%),有9例同时存在HBV感染,其中3例为三重感染。15例CMV抗原阳性肝炎中,11例为慢性肝炎。以同法检测20例肝细胞性肝癌患者肝组织中CMV抗原,发现1例阳性。结果提示CMV感染为病毒性肝炎的病因之一;CMV肝炎与其他病毒性肝炎及慢性肝脏疾病可同时存在;CMV肝炎可能存在慢性化倾向。