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HepG2细胞胰岛素抵抗模型建立及盐酸小檗碱改善胰岛素抵抗的实验研究 被引量:15
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作者 龚菂 李芬 +3 位作者 邹欣 王定坤 陆付耳 王开富 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1750-1754,共5页
目的建立HepG2(人肝胚胎瘤细胞)胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)细胞模型,并在该模型上研究小檗碱改善IR的效应。方法用25 mmol·L^(-1)高糖,并分别用10^(-9)、10^(-8)、10^(-7)、10^(-6)、10^(-5)、10^(-4)mol·L^(-1)胰岛... 目的建立HepG2(人肝胚胎瘤细胞)胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)细胞模型,并在该模型上研究小檗碱改善IR的效应。方法用25 mmol·L^(-1)高糖,并分别用10^(-9)、10^(-8)、10^(-7)、10^(-6)、10^(-5)、10^(-4)mol·L^(-1)胰岛素处理,诱导HepG2细胞产生IR;对2-NBDG(荧光素标记葡萄糖)与Hep G2细胞孵育浓度设定为:50、100、200、400、600、800μmol·L^(-1)、孵育时间设定为:20、40、60、80、100 min,拟筛选最佳胰岛素处理浓度、2-NBDG与HepG2最佳孵育浓度和最佳孵育时间,通过检测细胞培养液中葡萄糖的消耗量及细胞对葡萄糖的摄取量作为判定模型成功的标志;用二甲双胍、盐酸小檗碱干预模型细胞,研究盐酸小檗碱在细胞水平上改善IR的效应。结果 6种浓度的胰岛素均可不同程度诱导HepG2产生IR,虽然10^(-5)、10^(-4)mol·L^(-1)剂量最明显,但细胞死亡较多,以10-6mol·L^(-1)剂量制模有效且细胞成活率高,与正常组比较差异具有统计学意义;当2-NBDG与HepG2细胞孵育浓度大于100μmol·L^(-1)时,细胞荧光强度与正常组差异有显著性,孵育时间超过20 min荧光强度与正常组比较有明显差异,超过100 min,细胞内荧光有明显淬灭衰减现象;盐酸小檗碱、二甲双胍能明显增加细胞培养上清液中葡萄糖的消耗及细胞对葡萄糖的摄取,与模型组比较差异具有统计学意义。结论用HepG2制作IR细胞模型时,选择10^(-6)mol·L^(-1)剂量的胰岛素;2-NBDG孵育浓度选择为200μmol·L^(-1)、2-NBDG孵育时间选择为80min较为适宜,盐酸小檗碱及二甲双胍对HepG2细胞IR具有明显的改善作用。 展开更多
关键词 盐酸小檗碱 HEPG2细胞 胰岛素抵抗 细胞模型 葡萄糖摄取 实验研究
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人宫颈癌基因反义核酸抑制肝癌细胞生长作用的实验研究 被引量:2
2
作者 刘安定 杨燕 +6 位作者 夏剑波 田拥军 刘嘉 李方和 陆蒙吉 龚非力 杨东亮 《实用肝脏病杂志》 CAS 2007年第2期73-76,共4页
目的探讨针对人宫颈癌基因(HCCR)反义核苷酸影响肝癌细胞增殖、凋亡的作用。方法构建pcD-NA3.1-HCCR反义真核表达质粒,转染HepG2细胞,实时定量PCR检测HCCR mRNA表达水平,Western blot检测其蛋白表达水平,流式细胞仪观察HepG2细胞凋亡和... 目的探讨针对人宫颈癌基因(HCCR)反义核苷酸影响肝癌细胞增殖、凋亡的作用。方法构建pcD-NA3.1-HCCR反义真核表达质粒,转染HepG2细胞,实时定量PCR检测HCCR mRNA表达水平,Western blot检测其蛋白表达水平,流式细胞仪观察HepG2细胞凋亡和细胞周期的变化,MTT法检测细胞的增殖活性。结果HCCR反义核酸可有效抑制HepG2细胞HCCR的表达,与转染前相比,转染后24小时HCCR mRNA水平下降到16%,其蛋白表达水平在24小时也明显降低。对细胞的增殖与凋亡活性检测显示:转染HCCR反义质粒后,HepG2细胞增殖受到抑制,转染后24小时抑制率为47.62%(P<0.05),细胞凋亡率为14.34%±0.91%,较对照组明显增多(t=21.799,P<0.05),细胞分裂多停止在G0G1期。结论HCCR反义核酸可以抑制HepG2细胞中HCCR的表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,使细胞停滞于G1期。HCCR反义核酸用于肝癌细胞的基因治疗具有一定的潜在意义。 展开更多
关键词 肝癌细胞 人宫颈癌基因 反义核酸 细胞生长
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幽门螺杆菌对6种抗生素的耐药性及其机制的研究 被引量:12
3
作者 田拥军 张正茂 +1 位作者 刘慎沛 叶嗣颖 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期922-925,共4页
目的了解幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)对6种常用抗生素的耐药状况,探讨耐甲硝唑rdxA基因突变与耐药性的关系。方法分离培养76株Hp,以琼脂稀释法检测Hp对甲硝唑、替硝唑、四环素、克拉(红)霉素、阿莫西林、利福平的最小抑菌浓度(M... 目的了解幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)对6种常用抗生素的耐药状况,探讨耐甲硝唑rdxA基因突变与耐药性的关系。方法分离培养76株Hp,以琼脂稀释法检测Hp对甲硝唑、替硝唑、四环素、克拉(红)霉素、阿莫西林、利福平的最小抑菌浓度(Mininum Inhibitory Concentration,MIC),再用PCR方法扩增甲硝唑耐药相关基因rdxA,DNA测序分析敏感株和耐药株耐药基因的序列与耐药性的关系。免疫印记(West-ern Blotting)分析耐药基因的表达与耐药性的关系。结果武汉地区人群Hp对甲硝唑、替硝唑、四环素、克拉(红)霉素、阿莫西林、利福平的耐药率分别为67.1%、43.4%、3.9%、11.8%、17.1%和10.5%;甲硝唑耐药基因序列分析表明rdxA基因有插入或点突变;Western Blot显示耐药株和敏感株的rdxA基因的表达有差异。结论幽门螺杆菌对6种抗生素有较高的耐药率,rdxA基因突变导致基因表达水平改变,导致Hp对甲硝唑耐药。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 耐药性 基因突变
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G145R变异重组HBsAg ELISA检测质控参照品制备的初步研究 被引量:3
4
作者 张波 陈妍 +6 位作者 龚劲松 张春燕 黄永国 张小燕 田拥军 杨东亮 李方和 《实用医学杂志》 CAS 2007年第12期1775-1778,共4页
目的:实验性制备G145R变异重组乙型肝炎表面抗原(rHBsAg)质控参照品。方法:收集含G145R变异rHBsAg的细胞培养上清,采用50%饱和硫酸铵盐析,根据其在D12-ELISA中的检测信号,以卫生部颁布的HBsAgELISA质控血清精确标定盐析物中靶物质的含量... 目的:实验性制备G145R变异重组乙型肝炎表面抗原(rHBsAg)质控参照品。方法:收集含G145R变异rHBsAg的细胞培养上清,采用50%饱和硫酸铵盐析,根据其在D12-ELISA中的检测信号,以卫生部颁布的HBsAgELISA质控血清精确标定盐析物中靶物质的含量,适量稀释分装,置-20℃冻存。采用不同方法对制备物的特异性与稳定性进行考核,并将其试用于对几种市售试剂盒检测变异能力的评价。结果:制备物中靶物质含量在0.50~32.00ng/mLwcHBsAg之间,在D12-ELISA检测中其信号的线性关系与质控血清有很好的一致性;反复冻融对其稳定性无显著影响;采用不同市售ELISA试剂检测时其反应信号强度各不相同。结论:本研究制备的G145R变异rHBsAgELISA质控参照品具有较高的稳定性、特异性与实用性;其研制为乙肝病毒免疫逃逸现象在基础、临床、诊断试剂研发,以及流行病学调查等方面研究的开展提供了重要的物质基础。 展开更多
关键词 肝炎表面抗原 乙型 酶联免疫吸附测定 G145R变异株 质控参照品
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PPM1A蛋白的表达纯化及鼠多克隆抗体制备研究 被引量:2
5
作者 吴淑坤 杨燕 +4 位作者 王宝菊 田拥军 张娥娟 张振华 杨东亮 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期503-506,共4页
目的表达、纯化PPM1A-His融合蛋白及制备鼠多克隆抗体。方法将pBEX1-PPM1A-His原核表达质粒在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS内进行诱导表达,用纯化的PPM1A-His融合蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,并用ELISA、免疫组化和免疫荧光检测抗体的... 目的表达、纯化PPM1A-His融合蛋白及制备鼠多克隆抗体。方法将pBEX1-PPM1A-His原核表达质粒在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS内进行诱导表达,用纯化的PPM1A-His融合蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,并用ELISA、免疫组化和免疫荧光检测抗体的灵敏度和特异性。结果成功表达并纯化了PPM1A-His融合蛋白,纯化后纯度可达90%;ELISA法测定抗体效价为1∶100000;免疫组化和免疫荧光结果显示所制备的抗体可特异性检测肝和肝癌细胞的PPM1A。结论获得的PPM1A鼠多克隆抗体有较高的效价和特异性,为PPM1A在肝癌的相关研究打下了基础。 展开更多
关键词 PPM1A蛋白 多克隆抗体 肝癌
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PPM1A和P-Smad2在原发性肝癌中表达及意义研究 被引量:3
6
作者 吴淑坤 王宝菊 +4 位作者 杨燕 鲍俊杰 田拥军 冯新华 杨东亮 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2007年第4期330-333,共4页
目的探讨肝癌及癌旁组织中P-Smad2蛋白与PPM1A的表达及意义。方法采用免疫组织化学技术检测31份肝癌(HCC)、25份癌旁组织及13份非癌性肝组织中P-Smad2蛋白和PPM1A的表达。结果①癌旁和病理分级小于Ⅱ级的癌组织中PPM1A表达以核为主,胞... 目的探讨肝癌及癌旁组织中P-Smad2蛋白与PPM1A的表达及意义。方法采用免疫组织化学技术检测31份肝癌(HCC)、25份癌旁组织及13份非癌性肝组织中P-Smad2蛋白和PPM1A的表达。结果①癌旁和病理分级小于Ⅱ级的癌组织中PPM1A表达以核为主,胞浆表达弱或不表达,病理分级大于Ⅲ级及以上的癌细胞中则以胞浆表达为主,正常、慢性肝炎和肝硬化组织中,PPM1A表达以核为主,胞浆无表达,差别有统计学意义(P<0.05)。②P-Smad2在正常肝细胞、慢性肝炎、肝硬化、癌旁和病理分级Ⅰ-Ⅱ级的癌组织中表达以胞核和胞浆明显,胞浆表达主要聚集在核周,病理分级分级Ⅱ-Ⅲ级及以上的癌组织中,P-Smad2表达则以核为主,差别有显著性(P<0.05)。③PPM1A和P-Smad2在癌组织的表达部位呈现负相关性(r=-0.345,P=0.001)。结论PPM1A与P-Smad2在肝癌组织的胞核和胞浆表达转位及强度与其组织病理改变有密切关系,二者可能通过其相互作用,共同参与肝癌的发生发展机制。 展开更多
关键词 原发性肝细胞癌 P-Smad2 PPM1A
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生物信息模拟及生物学效应结合研究盐酸小檗碱对乙酰胆碱酯酶的抑制作用 被引量:1
7
作者 王晨 谭政 +2 位作者 邹欣 刘慎沛 王开富 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期561-563,共3页
目的体外研究盐酸小檗碱对乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的抑制作用。方法利用生物信息模拟技术,体外模拟以盐酸小檗碱为代表的5种生物碱(配体)与AchE(受体)相互分子对接效应与差异性;将小鼠眼眶取血后脱臼处死,立刻开腹取出十二指肠制备组织... 目的体外研究盐酸小檗碱对乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的抑制作用。方法利用生物信息模拟技术,体外模拟以盐酸小檗碱为代表的5种生物碱(配体)与AchE(受体)相互分子对接效应与差异性;将小鼠眼眶取血后脱臼处死,立刻开腹取出十二指肠制备组织匀浆,采用双缩脲法测定肠组织匀浆中总蛋白含量,将盐酸小檗碱与肠组织液共孵育后用酶法检测小鼠十二指肠组织和血清中AchE活性,以生物信息模拟和生物学效应相结合对比研究盐酸小檗碱对AchE的抑制作用。结果体外分子模拟5种生物碱中只有盐酸小檗碱和药根碱能与AchE受体活性中心进行分子对接;盐酸小檗碱能明显抑制小鼠十二指肠组织和血清中AchE活性,抑制程度与其浓度具有明显的量效关系。结论体外生物信息模拟和生物学效应研究均表明盐酸小檗碱对AchE有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 盐酸小檗碱 乙酰胆碱酯酶 生物信息 生物效应
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综合医院科研公共平台智能化管理系统功能介绍与运行实践 被引量:2
8
作者 杨燕 周迪 +2 位作者 李芬 刘慎沛 邹婧睿 《中国医药生物技术》 2021年第5期476-480,共5页
大型综合医院科研公共平台为医院科研提供仪器使用与技术服务,是医院科研项目实施的重要保障[1]。华中科技大学同济医学院附属同济医院科研公共平台成立于1995年,其初衷是实现大型贵重仪器的专管共享。科研公共平台独立于各课题组运行,... 大型综合医院科研公共平台为医院科研提供仪器使用与技术服务,是医院科研项目实施的重要保障[1]。华中科技大学同济医学院附属同济医院科研公共平台成立于1995年,其初衷是实现大型贵重仪器的专管共享。科研公共平台独立于各课题组运行,负责大型仪器设备的购置与管理,平台技术人员负责仪器使用方法的建立与完善,为医院科研项目实施提供支撑。 展开更多
关键词 公共平台 附属同济医院 大型仪器设备 华中科技大学 智能化管理系统 医院科研 贵重仪器 同济医学院
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噬菌体phi29 pRNA载体在RNA干扰中的初步应用研究
9
作者 田拥军 张正茂 +4 位作者 杨燕 覃莉 孟忠吉 刘慎沛 杨东亮 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期148-152,共5页
Gene-silencing siRNA has shown great promise for the treatment of genetic diseases,cancers,and viral infections,but its therapeutic value has been hindered by the lack of an efficient and safe in vivo delivery system ... Gene-silencing siRNA has shown great promise for the treatment of genetic diseases,cancers,and viral infections,but its therapeutic value has been hindered by the lack of an efficient and safe in vivo delivery system to target specific cells.The motor pRNA of phi29 has a strong tendency to form dimers,trimers and hexamers by interaction of interlocking right and left hand loops.This unique feature makes pRNA an ideal vector for the delivery of multiple therapeutic RNAs.Toxicity of pRNA was detected by transfection of 8 pRNA in HeLa cells.A pRNA-based vector was designed to carry siRNAs to inhibit GFP or HBV surface gene expression.Silence effects on siRNA against expression of GFP or HBV surface gene were detected in HeLa cells.Viral replicative intermediates were detected by Southern blotting.The results of toxicity study showed there was no toxicity of pRNA to cultured monolayer cells.The siRNA connected with pRNA can inhibit GFP or HBV surface gene expression in HeLa cells and inhibit HBV replication in HepG2 cells.These data suggest that pRNA can be used as a vector for imparting stability to siRNA in vitro. 展开更多
关键词 噬菌体 PRNA RNA干扰 乙型 肝炎病毒
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鼠IgG定量ELISA实验参比品的制备及其应用
10
作者 黄永国 张春燕 +3 位作者 龚劲松 陈妍 张波 李方和 《华中医学杂志》 CAS 2007年第1期4-6,共3页
目的 制备一组用于小鼠IgG定量ELISA检测的实验参比品。方法 将三株杂交瘤细胞制备的小鼠腹水等体积混合,以葡萄球菌A蛋白(SPA)亲和层析纯化IgG,凯氏定氮法测定IgG含量,SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳作纯度鉴定并据此校正其... 目的 制备一组用于小鼠IgG定量ELISA检测的实验参比品。方法 将三株杂交瘤细胞制备的小鼠腹水等体积混合,以葡萄球菌A蛋白(SPA)亲和层析纯化IgG,凯氏定氮法测定IgG含量,SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳作纯度鉴定并据此校正其IgG浓度,以特定保存液将其稀释成既定浓度系列,根据其在ELISA中的反应特征,制备浓度(自然对数)-A450值标准曲线,并将其用于对一组杂交瘤细胞培养上清中鼠单克隆抗体的IgG定量测定。结果提纯的鼠IgG经鉴定纯度达97.1%,且反应特性良好,其IgG含量与ELISA检测信号间有高度的相关性(r=0.990)。不同浓度的稀释系列经8次反复冻融,检测信号无显著变化,变异系数(CV)为1.87%~6.47%。将标准曲线计算所得浓度对设定浓度做回收实验分析,回收率89.1%~108.3%。并用其测得一组杂交瘤细胞培养上清的鼠IgG含量为8.0~51.5mg/L。结论 鉴定结果显示制备物定量准确,浓度范围适中,稳定性好,对于早期杂交瘤细胞分泌能力以及抗体稳定性的评价、单抗制剂的鉴定具有一定的应用价值。 展开更多
关键词 酶联免疫吸附试验 单克隆抗体 定量参照物 小鼠
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综合医院专科实验室大型科研仪器管理现状及共享对策研究 被引量:3
11
作者 邹婧睿 李芬 杨燕 《中华医学科研管理杂志》 2021年第6期417-421,共5页
目的探索综合医院专科实验室大型科研仪器开放共享模式,提高科研仪器使用效益及管理水平。方法通过分析某综合医院专科实验室大型科研仪器管理中的问题,借助实验室信息化管理系统,构建专科实验室仪器开放共享平台,并提出相关的管理建议... 目的探索综合医院专科实验室大型科研仪器开放共享模式,提高科研仪器使用效益及管理水平。方法通过分析某综合医院专科实验室大型科研仪器管理中的问题,借助实验室信息化管理系统,构建专科实验室仪器开放共享平台,并提出相关的管理建议及思考。结果依托制度设计,专科实验室可以利用仪器共享平台实现大型科研仪器的"专管共用",提高仪器使用效率。结论综合医院专科实验室大型科研仪器共享平台的构建,是解决现阶段专科实验室仪器管理问题的有效手段,但要充分发挥效果还应不断完善平台制度建设及技术人才培养。 展开更多
关键词 专科实验室 大型科研仪器 共享对策
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类器官培养技术及其在神经母细胞瘤研究中的应用
12
作者 李俏 杨燕 《中华实验外科杂志》 CAS 2024年第7期1615-1621,共7页
类器官(Organoids)是一种体外培养的由干细胞分化而来的自组装三维细胞团,具有干细胞对应组织器官的细胞类型和复杂空间形态,能够模拟组织器官的部分功能和生理反应,与来源组织具有极高的相似性,尤其是患者来源的组织类器官,更能够反应... 类器官(Organoids)是一种体外培养的由干细胞分化而来的自组装三维细胞团,具有干细胞对应组织器官的细胞类型和复杂空间形态,能够模拟组织器官的部分功能和生理反应,与来源组织具有极高的相似性,尤其是患者来源的组织类器官,更能够反应患者的基因异质性、组织结构、分子特征。近年来类器官培养技术发展迅速,为医学研究提供了可靠的临床前疾病模型和药物筛选途径,在多种疾病研究中展现了巨大潜能和技术优势。本文介绍了类器官培养技术起源及其进展,从类器官培养技术的建立、类器官培养的细胞来源、类器官培养中小分子添加剂的功能以及各种类器官培养方式的应用场景等作了详细介绍,并综述了类器官培养技术在神经母细胞瘤研究中的发展与应用。 展开更多
关键词 类器官 3D细胞培养 多能干细胞 神经母细胞瘤 个体化治疗
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8种国产HBsAg试剂盒检测变异HBsAg的效果评价 被引量:40
13
作者 田拥军 覃莉 +4 位作者 刘慎沛 雷延昌 赵西平 陆蒙吉 杨东亮 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期250-253,共4页
目的评价国内8种HBsAg诊断试剂检测体外表达的18种变异HBsAg的效果。方法用8种ELISA试剂检测真核细胞表达的18种变异HBsAg的免疫反应性。结果8种试剂盒检测变异HBsAg的能力不同,漏检率为16.7%~44.4%。K122I、T123N、C124R和G145R变异的... 目的评价国内8种HBsAg诊断试剂检测体外表达的18种变异HBsAg的效果。方法用8种ELISA试剂检测真核细胞表达的18种变异HBsAg的免疫反应性。结果8种试剂盒检测变异HBsAg的能力不同,漏检率为16.7%~44.4%。K122I、T123N、C124R和G145R变异的HBsAg漏检率最高。结论8种HBsAg检测试剂盒都不能很好地检出部分变异HB-sAg,应改进试剂性能,提高对变异HBsAg的检出率。 展开更多
关键词 乙型肝炎表面抗原 变异 ELISA
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重组G145R HBsAg亲和纯化方法的建立及其应用 被引量:4
14
作者 张波 李方和 +6 位作者 龚劲松 田拥军 张春燕 李时君 陈妍 黄永国 杨东亮 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第10期767-770,共4页
目的建立重组乙型肝炎病毒G145R变异HBsAg抗体亲和纯化方法。方法用抗-HBs单克隆抗体(D12- McAb)制备亲和层析胶,对2A8细胞(分泌G145R变异HBsAg)培养上清盐析物进行亲和纯化。采用SDS-PAGE、Western blot及ELISA,对纯化产物的纯度、特... 目的建立重组乙型肝炎病毒G145R变异HBsAg抗体亲和纯化方法。方法用抗-HBs单克隆抗体(D12- McAb)制备亲和层析胶,对2A8细胞(分泌G145R变异HBsAg)培养上清盐析物进行亲和纯化。采用SDS-PAGE、Western blot及ELISA,对纯化产物的纯度、特异性、含量和回收率进行鉴定,并与同法纯化的HBsAg阳性血清及r-wHBsAg提取物进行比较。结果D12-McAb对重组真核表达G145R变异HBsAg、HBsAg阳性血清及r-wHBsAS三者具有相似的亲和性,产物纯度分别为90.3%、95.2%和93.1%,回收率分别为43.3%、72.0%和66.4%。结论已成功地建立了重组G145R变异HBsAg抗体亲和纯化方法,为G145R变异以及其他HBV免疫逃逸变异感染的深入研究奠定了重要的技术基础。 展开更多
关键词 乙型肝炎表面抗原 免疫逃逸变异株 单克隆抗体 亲和层析
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用多糖-破伤风类毒素结合苗制备抗流行性脑膜炎球菌多糖单克隆抗体 被引量:4
15
作者 李佩珊 张春燕 +4 位作者 李时君 陈妍 项美娟 李方和 张洪 《医药导报》 CAS 2011年第6期709-712,共4页
目的 研制抗A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖单克隆抗体(GAMP mAb).方法 以A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素(GAMP-TT)耦联物免疫BALB/c小鼠,用常规细胞融合与克隆化技术获得一株能稳定分泌抗GAMP mAb的杂交瘤细胞株(2E7).采用... 目的 研制抗A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖单克隆抗体(GAMP mAb).方法 以A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素(GAMP-TT)耦联物免疫BALB/c小鼠,用常规细胞融合与克隆化技术获得一株能稳定分泌抗GAMP mAb的杂交瘤细胞株(2E7).采用秋水仙素阻断法测定其染色体数目,降植烷诱导法制备含该抗体的小鼠腹腔积液,辛酸-硫酸铵沉淀法纯化单克隆抗体,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)灰度扫描测定提取物纯度,改良过碘酸盐氧化法制备辣根过氧化物酶(HRP)标记抗GAMP mAb,并采用中和法及其抗原替代法对抗GAMP mAb的特异性进行初步的鉴定.结果 所获得的杂交瘤细胞(2E7)具有很好的生长特性,染色体数目约为139.73条;抗体分泌量适中,Ig亚类为IgG1,提取物浓度1.76~2.32 mg·mL-1,纯度97.2%,标记抗GAMP mAb的效价为1:25 600;抗原替代实验与中和实验对其特异性考核,初步结果证实2E7 mAb具有很好的抗GAMP特异性.结论 成功制备抗GAMP mAb,为GAMP-TT疫苗的生产监测及产品质量控制提供了必要的物质基础. 展开更多
关键词 菌苗 多糖抗体 A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖 结合苗 单克隆抗体
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人宫颈癌基因蛋白B细胞表位及其HLA限制性细胞毒性T细胞表位预测分析 被引量:5
16
作者 刘安定 杨燕 +3 位作者 李方和 陆蒙吉 龚非力 杨东亮 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2007年第14期1260-1263,共4页
目的:预测人宫颈癌基因(human cervical cancer oncogene,HCCR)蛋白的二级结构,B细胞表位及其HLA-A,B限制性细胞毒性T细胞表位.方法:综合分析二级结构、亲水性、柔韧性、表面可及性与抗原性指数,预测HCCR蛋白的B细胞抗原表位;利用BIMAS,... 目的:预测人宫颈癌基因(human cervical cancer oncogene,HCCR)蛋白的二级结构,B细胞表位及其HLA-A,B限制性细胞毒性T细胞表位.方法:综合分析二级结构、亲水性、柔韧性、表面可及性与抗原性指数,预测HCCR蛋白的B细胞抗原表位;利用BIMAS,SYFPEITHI和NetCTL方法预测分析其HLA-A*0201限制性CTL表位,运用NetCTL方法对HLA-A的其他等位基因和HLA-B限制性CTL表位进行预测分析.结果:HCCR蛋白的二级结构主要由α-螺旋结构组成,B细胞优势表位位于N端第41~53,216~228,310~325和355~360区段;预测得到5个HLA-A*0201限制性CTL优势表位分别为YLVFLLMYL(152~160),YLFPRQLLI(159~167),LLLHNVVLL(343~351),CLFLGIISI(138~146)和SIPPFA-NYL(145~153),HCCR蛋白HLA-A,B限制CTL表位主要位于胞外区.结论:应用多参数预测HCCR蛋白B细胞表位及其HLA-A,B限制性细胞毒性T细胞表位,为进一步实验鉴定其表位进而制备单克隆抗体和基于HCCR抗原的肿瘤免疫学治疗奠定了基础. 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 癌基因蛋白质类 表住 B淋巴细胞 CFL表位
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乙肝泛变异HBsAg检测方法的建立及其在临床的初步应用 被引量:7
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作者 刘静华 黄永国 +5 位作者 张春燕 彭静 张小燕 龚劲松 陈妍 李方和 《中国实验诊断学》 2008年第10期1199-1203,共5页
目的研制一种能全面检测血清野生及免疫逃逸变异HBsAg的ELISA试剂。方法采用抗HBs G6-mAb包被,羊抗HBs-HRP作示踪抗体,建立双抗体夹心ELISA。采用抗原替代试验,竞争抑制试验与其它多种试验一道对方法的特异性,敏感性与稳定性进行考核,... 目的研制一种能全面检测血清野生及免疫逃逸变异HBsAg的ELISA试剂。方法采用抗HBs G6-mAb包被,羊抗HBs-HRP作示踪抗体,建立双抗体夹心ELISA。采用抗原替代试验,竞争抑制试验与其它多种试验一道对方法的特异性,敏感性与稳定性进行考核,并将其与市售HBsAg ELISA试剂一道用于一组HBV感染相关者的临床检测。结果证实本研究建立的ELISA具有很好的特异性与稳定性,其最低可检测浓度低于0.125 ng/ml。将其与两种市售HBsAgELISA用于乙肝病毒感染相关者检测,三法检测敏感性相当,其阳性率前者(34/177例,19.21%)分别高于或显著高于后两者(14.89%与6.21%,P分别<0.05及<0.01)。采用雅培化学发光试剂对部分本法阳性者进行复核,两法符合数为94.4%(17/18),两者间信号强度亦表现出一定的相关性。结论建立一个特异,敏感而稳定的血清HB-sAg检测ELISA,其对血清免疫逃逸变异HBsAg的检测能力超过国内市售ELISA。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 基因变异 乙型肝炎病毒表面抗原 免疫逃逸 酶联免疫吸附实验
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人结肠癌Caco-2细胞羧酸酯酶的表达及代谢活性 被引量:3
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作者 刘东 张程亮 +3 位作者 杨燕 向道春 高静 王新桃 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2010年第3期294-297,共4页
目的:评价Caco-2细胞对酯类药物的水解活性及羧酸酯酶(CES)表达的影响.方法:采用人类CES1(hCE-1)和CES2(hCE-2)特异性底物咪达普利和伊立替康(CPT-11)与Caco-2细胞S9组分共同孵育,HPLC法测定原药及代谢产物浓度,评价Caco-2细胞的药物水... 目的:评价Caco-2细胞对酯类药物的水解活性及羧酸酯酶(CES)表达的影响.方法:采用人类CES1(hCE-1)和CES2(hCE-2)特异性底物咪达普利和伊立替康(CPT-11)与Caco-2细胞S9组分共同孵育,HPLC法测定原药及代谢产物浓度,评价Caco-2细胞的药物水解活性,并通过RT-PCR法测定细胞内hCE-1和hCE-2表达.结果:Caco-2细胞与正常小肠微粒体酶相比,更倾向于代谢咪达普利,而几乎不水解CPT-11.RT-PCR结果发现,Caco-2细胞CES表达与正常肠道上皮组织不同,表现为hCE-1高表达,而几乎不表达hCE-2.结论:Caco-2细胞CES表达与正常肠道上皮组织存在较大差异,因此在使用Caco-2细胞评价酯类药物口服吸收时应十分谨慎. 展开更多
关键词 羧酸酯酶 CACO-2细胞 伊立替康 咪达普利
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抗人ASGPR大亚基异构体蛋白H1b多克隆抗体的制备和鉴定 被引量:3
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作者 刘嘉 丁红晖 +5 位作者 杨燕 胡斌 余源 黄红平 陆蒙吉 杨东亮 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期917-919,共3页
目的:制备小鼠抗人ASGPR大亚基异构体蛋白H1b的多克隆抗体,并鉴定其特异性。方法:合成H1b特异性多肽,以匙孔血蓝蛋白(KLH)作为载体构建多肽免疫原,通过致敏小鼠,制备小鼠抗人H1b蛋白的多克隆抗体;ELISA法检测抗体效价,通过Western blot... 目的:制备小鼠抗人ASGPR大亚基异构体蛋白H1b的多克隆抗体,并鉴定其特异性。方法:合成H1b特异性多肽,以匙孔血蓝蛋白(KLH)作为载体构建多肽免疫原,通过致敏小鼠,制备小鼠抗人H1b蛋白的多克隆抗体;ELISA法检测抗体效价,通过Western blot和免疫组织化学检测,鉴定抗体的特异性与适用范围。结果:得到小鼠抗人H1b蛋白的多克隆抗体,效价达1∶105。纯化后的抗体用于Western blot可高特异性识别真核表达的H1b蛋白,并可用于免疫组织化学实验。结论:成功制备小鼠抗人H1b蛋白的多克隆抗体,该抗体具有较高的效价以及特异性,能区分ASG-PR大亚基的两种剪接异构体,从而为进一步研究H1b蛋白的生理功能及其在人类疾病中的意义提供了有利工具。 展开更多
关键词 去唾液酸糖蛋白受体 多克隆抗体 剪接异构体
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ELISA差减分析--一种简便实用的免疫逃逸变异HBsAg检测新方法 被引量:1
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作者 李方和 李佩珊 +4 位作者 刘静华 彭静 张春燕 黄永国 陈妍 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期642-645,654,共5页
目的:立足现有实验技术与试剂,建立一项血清免疫逃逸变异HBsAg检测的新方法。方法:以市售ELISA试剂筛选其检测信号在灰区范围的HBV感染者;采用2种不同免疫逃逸变异HBsAg检测能力的ELISA试剂对选留血清进行检测,以"ELISA差减分析&qu... 目的:立足现有实验技术与试剂,建立一项血清免疫逃逸变异HBsAg检测的新方法。方法:以市售ELISA试剂筛选其检测信号在灰区范围的HBV感染者;采用2种不同免疫逃逸变异HBsAg检测能力的ELISA试剂对选留血清进行检测,以"ELISA差减分析"方式确认免疫逃逸变异HBsAg阳性者;以中和实验及雅培化学发光试剂验证检测结果的特异性;并对部分免疫逃逸变异HBsAg阳性者以PCR及直接测序做HBV DNA分析。结果:自10231例受检者中筛选HBsAgELISA检测信号灰区标本244例;复核检测显示G6ELISA、市售ELISA两者对野生HBsAg检测敏感性分别为0.0625ng/ml,与0.125ng/ml;检测阳性率分别为16.80%(G6ELISA)及5.73%(市售ELISA)。ELISA差减分析确定免疫逃逸变异HBsAg阳性者27例,阳性率为11.07%。对部分免疫逃逸变异HBsAg阳性血清做进一步考核,抗HBs中和强度为(84.07%±6.32%),中和率100%(13/13);雅培化学发光试剂复核阳性率为94.4%(17/18,阳性者中包括两份单项G6-ELISA检测最低阳性信号标本);HBV DNA阳性率36.9%(7/19),略低于同期HBsAg低信号阳性者(6/14,42.9%,P<0.05);直接测序发现其中"a"区变异3例,分别为P142L、T126A及M133T/K160T;S蛋白亲水区非"a"决定簇变异1例,变异类型为L109Q。结论:ELISA差减分析法能有效地用于部分免疫逃逸变异HBsAg的临床诊断,其诊断能力视所依托试剂免疫逃逸变异检测能力不同而有显著差别。 展开更多
关键词 乙肝病毒 基因变异 HBSAG 免疫逃逸变异 ELISA
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