小鼠毛乳头细胞体外分离培养方法的优化和评价

目的 :探索小鼠毛乳头细胞(DPCs)体外分离培养的改良新方法。方法 :选用雌性C57BL/6小鼠,以精细显微解剖获取毛乳头部位,联合胶原酶消化,并添加10 ng/mL碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)以优化培养体系,建立体外分离培养小鼠DPCs的改良新方法;以光镜下观察、细胞计数、碱性磷酸酶(ALP)特异性染色及荧光定量PCR鉴定DPCs的ALP mRNA表达水平,与传统方法比较进行相关评价。结果 :与传统方法比较,改良方法的毛乳头基本全部贴壁,细胞可更快迁出及生长融合,所获得的细胞数量是传统方法的5.85倍;经传代后传统方法的低代次DPCs有聚集性生长现象,随代次增加,细胞形态逐渐变大衰老,增殖明显迟缓,聚集性生长愈发不明显,至第5代聚集性现象消失。而改良方法的DPCs经传代后,第1、2和5代形态仍呈长梭形及多角形的特点,至第5代仍保有聚集性生长的特点;且具有更强的ALP活性,尤其是高代次(第5代)细胞更为明显,而传统方法的高代次细胞则几乎无ALP活性;改良方法的ALP mRNA表达水平与传统方法相比也明显上调,尤其是第5代细胞更加明显。结论 :改良方法可获取更多数量、并具有较好功能的小鼠DPCs,为开展毛囊相关研究提供可靠的细胞来源。