清胰汤Ⅱ号冲剂对急性胰腺炎小鼠的保护作用及机制

目的:探讨清胰汤Ⅱ号冲剂(QYT)对急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)小鼠的保护作用及机制。方法:成年C57BL/6小鼠24只,雌雄各半,随机均分为3组。AP组和AP+QYT组首先经腹腔注射雨蛙肽(50μg/kg)及脂多糖(10 mg/kg)复制重症AP模型,AP组小鼠给予饮用水灌胃,AP+QYT组给予QYT灌胃;正常对照组小鼠给予等量生理盐水注射及饮用水灌胃。于末次注药后3 h麻醉处死动物。检测和分析胰腺组织的病理改变、肠道细菌总数和分类、Peyer’s结T淋巴细胞亚群的变化、血浆淀粉酶、白细胞介素6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)水平以及胰腺和肺脏组织髓过氧化物酶(MPO)活性等。结果:与对照组相比,AP小鼠的胰腺组织病理学评分、肠道细菌数量、血浆淀粉酶活性、IL-6及MCP-1水平、胰和肺组织的MPO活性都有明显升高(P<0.05);QYT可在一定程度上逆转AP时相关指标的变化(P<0.05)。小肠Peyer’s结数量在各组无明显差异,但AP组的CD3+T淋巴细胞百分比较对照组明显降低(P<0.05),而且,AP组和AP+QYT组,尤其是后者CD4+T淋巴细胞百分比和CD4+/CD8+比值较对照组明显升高(P<0.05)。结论:清胰汤II号冲剂对雨蛙肽和脂多糖诱导的小鼠急性胰腺炎具有明显的拮抗作用,其机制可能与其抑制炎症反应、促进肠内细菌的清除和调节肠道T淋巴细胞功能有关。

Toll样受体在急性胰腺炎及其相关器官损伤中的作用

急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP),尤其重型急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)是临床常见的急腹症,其发病机制复杂,治疗效果迄今仍不令人满意。Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)属于模式识别受体(pattern recognition receptors,PRRs),在多种疾病中都起着关键性作用。TLRs参与AP相关炎症反应的发生发展,并且作为AP潜在的治疗靶点广为研究。本文就国内外TLRs在AP及其相关器官损伤的作用研究予以综述。

大麻制剂HU210对实验性急性胰腺炎的干预作用及其与Toll样受体4信号通路的可能关系

目的:研究大麻类制剂HU210对雨蛙肽(caerulein,CAE)诱导的野生型(wild-type,WT)和Toll样受体4基因敲除(tlr4^(-/-))小鼠急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)的干预作用,并探讨其作用机制。方法:将成年C57BL/10J小鼠及相同背景的tlr4^(-/-)小鼠各随机分成3组:AP组、AP+HU210组及正常对照组。小鼠腹腔注射CAE(50μg·kg^(-1)·h^(-1))6次及脂多糖(10 mg/kg)1次复制AP模型;AP+HU210组在造模前及造模后各腹腔注射1次HU210(50μg/kg);对照组注射生理盐水替代CAE和脂多糖。造模处理后3 h,取血处死小鼠,取胰腺、肺组织及肠道Peyer’s结。结果:与对照组相比,无论在WT或tlr4^(-/-)小鼠,AP造模后胰腺病理评分,血浆淀粉酶活性,血浆IL-6、TNF-α及MCP-1水平,以及肺MPO活性均明显升高(P<0.05),P38蛋白表达明显上调(P<0.05)。同时,AP造模后,与WT小鼠相比,tlr4^(-/-)小鼠血浆IL-6、TNF-α及MCP-1水平,以及胰腺P38及p-P38蛋白表达均明显降低(P<0.05),Peyer’s结CD3^+、CD4^+T淋巴细胞百分比及CD4^+/CD8^+比值明显降低(P<0.05)。HU210干预使2种小鼠AP模型的胰腺病理学评分和肺MPO活性的升高明显得到改善(P<0.05);在WT小鼠,而非tlr4^(-/-)小鼠,AP引起的血浆淀粉酶活性和胰腺P38及p-P38蛋白表达的变化在HU210干预后明显逆转(P<0.05)。结论:TLR4主要参与AP全身炎症反应,其机制可能依赖TLR4-P38 MAPK信号通路;大麻制剂HU210对AP的干预主要通过抑制炎症细胞的浸润发挥组织保护作用,与TLR4信号通路的关系似乎不明显。

新型大麻制剂O-1602对急性胰腺炎小鼠肠道免疫及菌群的影响

目的研究新型大麻制剂O-1602对急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)小鼠肠道免疫及菌群紊乱的干预作用。方法成年C57/BL6小鼠21只,雌雄各半,随机均分为AP模型组(AP组,n=7)、AP治疗组(AP^+O-1602组,n=7)及正常对照组(control组,n=7)。AP模型组、AP治疗组以雨蛙肽腹腔注射(50μg/kg)复制AP模型,并分别给以腹腔注射药物溶剂或O-1602溶液(10 mg/kg);正常对照组小鼠用相同方式获得等量生理盐水及药物溶剂注射。3组动物均于末次注药3 h后麻醉处死,收集其血液、小肠和结肠及肠道Peyer’s结。检测和分析肠道细菌总数和主要类别、Peyer’s结中T淋巴细胞及其亚群的变化;检测血浆淀粉酶及细胞因子IL-10、MCP-1水平的变化。结果与对照组相比,AP小鼠肠道细菌总数、主要亚群,尤其是大肠杆菌、肠球菌的数量、血浆淀粉酶活性、IL-10及MCP-1水平都有明显升高(P<0.05或P<0.01);新型大麻制剂O-1602可在一定程度上逆转AP时的上述异常变化(P<0.05)。各组肠道Peyer’s结数量无明显差异,但AP小鼠Peyer’s结中CD3^+、CD4^+T淋巴细胞百分比较对照组明显降低(AP组P<0.01,AP^+O-1602组P<0.05),CD4^+/CD8^+较对照组也有所降低,但差异无统计学意义。结论 O-1602对雨蛙肽诱导的小鼠急性胰腺炎具有一定拮抗作用,其机制可能与其促进肠道细菌的清除、调节肠道T淋巴细胞功能、抑制炎症反应等有关。

LPS和雨蛙肽诱导大鼠离体胰腺组织损伤并抑制HSP60蛋白的变化

目的:观察脂多糖(LPS)、雨蛙肽(cerulein)刺激对大鼠离体胰腺组织热休克蛋白60(HSP60)表达的影响。方法:分离培养大鼠离体胰腺组织,用低、高浓度cerulein(Cer;10-11mol/L,10-5mol/L)或LPS(10 mg/L,20 mg/L)刺激,以生理盐水(NS)作为对照,在刺激前和刺激后1、4h测定胰腺组织的活力(MTT法)、胰蛋白酶原活性肽(TAP)水平(ELISA测定),培养上清液中白介素6(IL-6)水平(ELISA测定);并用real-time PCR和Westernblotting分别测定胰腺组织HSP60 mRNA和蛋白的表达。结果:低、高浓度的cerulein和LPS刺激胰腺组织后1 h,组织的活力与NS对照组比较稍有下降(P>0.05),刺激4h后,组织活力明显降低(P<0.05);组织中TAP水平在高浓度cerulein和低、高浓度的LPS刺激下明显升高;其培养上清液中IL-6水平在刺激后1 h变化不明显,4 h时升高,尤其以高浓度的cerulein或LPS作用显著(P<0.05)。胰腺组织HSP60 mRNA和蛋白的表达量随LPS刺激时间的延长和浓度的升高而降低;而低、高浓度的cerulein刺激HSP60 mRNA的表达增加,但蛋白的表达降低,以高浓度、长时间刺激的作用为明显(P<0.05)。结论:LPS及cerulein对离体胰腺组织具有损伤作用,并呈一定时间及浓度依赖性;同时,胰腺组织HSP60蛋白表达降低,提示HSP60细胞保护作用的减弱可能参与该损伤过程。