形成性考核在医学生组织学与胚胎学教学中的应用

教学评价体系改革，对推进高校教学改革，提高学生的综合素质和能力具有十分重要的导向作用^[1]。传统的教学评价只注重终结性评价，以学生的期末考试成绩作为教学评价的唯一指标，这种评价方式忽略了教学过程，学生只是被动的评价客体，造成学生对教师的依赖，在很大程度上忽视了学生在学习中的主体性、能动性和创造性，直接影响了学生的学习兴趣和教学效果。

靶向树突状细胞的肿瘤疫苗OVA慢病毒载体构建及其体外抗肿瘤效应

目的构建靶向树突状细胞(dendritic cell,DC)的肿瘤疫苗pHR-CMV-EGFP-OVA慢病毒表达载体,并观察肿瘤抗原特异性DC激活T细胞对小鼠Lewis肺癌细胞(lewis lung carcinoma cell,LLC)的抗肿瘤效应,为肺癌的临床治疗提供实验依据。方法以分子克隆方法构建携带模拟肿瘤抗原鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA)的慢病毒表达载体,经XhoⅠ及XbaⅠ双酶切后电泳和DNA测序验证;应用脂质体法三质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒,转导LLC,进行单克隆化筛选培养后,经RT-PCR、Western blot检测所获得的OVA稳定表达细胞株中OVA的表达;分离纯化小鼠骨髓DC;用慢病毒感染DC;分离纯化小鼠脾T淋巴细胞;应用MLR和MTT法检测肿瘤抗原负载的DC刺激T淋巴细胞对LLC的杀伤作用。结果 (1)构建的pHR-CMV-EGFP-OVA慢病毒表达载体经酶切后电泳和DNA测序,结果显示载体构建正确;(2)获得了纯化的小鼠骨髓来源的DC;(3)获得了携带肿瘤抗原OVA的LLC和DC;(4)负载肿瘤抗原的DC刺激T淋巴细胞能有效地杀伤负载相同肿瘤抗原的LLC。结论本研究成功地构建了携带肿瘤模拟抗原OVA的慢病毒表达载体pHR-CMV-EGFP-OVA,并成功地转导LLC与DC,获得了稳定表达OVA的肺癌细胞株和携带OVA的DC,基于肿瘤抗原靶向DC的抗肿瘤策略能有效地杀伤LLC,为靶向DC的肺癌免疫治疗提供了体外实验依据。

DC-OVA疫苗在裸鼠体内的抗肿瘤效应

目的构建靶向树突状细胞(dendritic cell,DC)的肿瘤疫苗DC-OVA系统,探讨DC-OVA肿瘤疫苗在祼鼠体内的抗肿瘤效应及相关机制。方法构建表达肿瘤抗原OVA的树突状细胞。建立携带OVA的Lewis肺癌细胞(Lewis lung cancer cell-OVA,LLC-OVA)的皮下荷瘤裸鼠模型,瘤旁注射DC-OVA疫苗,通过记录肿瘤大小观察肿瘤生长抑制状况。以IHC方法观察肿瘤组织CD3、Nestin、CD133阳性细胞;观察脾DC相关分子(CD11c、OVA)的阳性表达以及T细胞(CD3+)的分布、数量和功能变化。同时,应用ELISA方法检测血清中IL-12的表达水平。结果 DC-OVA疫苗预防组与PBS对照组比较,呈现出明显的肿瘤生长抑制(P<0.05)。与对照组相比,DC-OVA疫苗治疗组肿瘤明显缩小(P<0.001)。疫苗治疗3次组与治疗1次组比较,效果更明显(P<0.05)。于实验第4周,疫苗治疗1次组与对照组比较,CD3阳性表达高,Nestin、CD133阳性表达低(P<0.05);治疗1次组血清IL-12含量较对照组升高(P<0.001);第8周,治疗1次组血清IL-12含量较第4周治疗组及第8周对照组低。结论 DC-OVA疫苗特异性杀伤了LLC-OVA肿瘤细胞,使肿瘤干细胞表达Nestin、CD133减少。

OVA基因修饰的树突状细胞疫苗抗裸鼠肺肿瘤效应研究

目的探讨OVA基因修饰的树突状细胞疫苗(DC-OVA)在肿瘤模拟抗原OVA(ovabumin)的裸鼠肺癌模型体内抗肺肿瘤的效应。方法裸鼠右肺原位接种携带OVA的Lewis肺癌细胞(Lewis lung cancer cell-OVA,LLC-OVA)悬液,建立裸鼠肺癌模型。获取DC,经基因转导制备DC-OVA疫苗。Western印迹法检测OVA蛋白的表达。获取T细胞,进而制备DC疫苗系统(DC-OVA/T)。CCK8试剂检测DC-OVA刺激后T细胞的增殖。模型建立2周后,尾静脉注射DC-OVA/T。Micro-CT扫描荷瘤裸鼠的胸部,观察肺部影像。H-E染色观察肺部及肿瘤组织形态结构。IHC方法观察脾、淋巴结、肿瘤组织中CD8的表达;观察肿瘤组织中SOX2、BMI1的表达。ELISA法检测血清中IL-12水平。结果 Western印迹法在样本中检测出清晰的OVA条带。DC-OVA强有效地刺激了T细胞的增殖(P<0.05)。DC-OVA/T治疗4周,疫苗组裸鼠肺micro-CT未见明显肿瘤阴影;取材,裸眼可见疫苗组病灶减小,H-E染色显示疫苗组的肿瘤组织较少,肺组织形态较完整。疫苗组裸鼠的脾、淋巴结、肿瘤组织内CD8阳性表达均明显高于对照组(P<0.05,P<0.05,P<0.01),肿瘤组织中的SOX2、BMI1阳性表达明显低于对照组(P<0.05,P<0.05);血清中的IL-12含量较对照组明显升高(P<0.001)。结论基因修饰的DC疫苗在裸鼠体内具有强大的抗肺癌效应,为临床治疗肺癌提供了新的实验依据。