移植GDNF基因修饰的神经干细胞对大鼠脑卒中的神经保护作用

目的：探讨移植胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）基因修饰的神经干细胞（NSCs）是否比单纯NSCs移植对脑卒中有更好的神经保护。方法：用GDNF重组质粒转染NSCs，构建过表达GDNF的NSCs（GDNF／NSCs）。插线法制备大鼠脑缺血卒中模型，再灌注3d，脑立体定位分别移植NSCs、GDNF／NSCs以及生理盐水到同侧侧脑室，实验分为GDNF／NSCs组、NSCs组和对照组。再灌注第1、2、3、5和7周处死大鼠，用改良的神经功能缺失评分和H-E染色分别评估大鼠神经功能和脑梗死体积；免疫组织化学显色观察移植的NSCs数量与分布和突触蛋白Syn、PSD-95在脑组织的表达。结果：再灌注2、3周，GDNF／NSCs组较NSCs组神经功能恢复更好。在各时间点GDNF／NSCs和NSCs组大鼠脑缺血体积较对照组显著减小；GDNF／NSCs组的NSCs细胞数量较NSCs组显著增多。再灌注2和3周，GDNF／NSCs组Syn免疫阳性产物比NSCs组显著增加；各时间点GDNF／NSCs组的PSD-95免疫阳性产物比NSCs组显著增加。结论：GDNF基因修饰的NSCs比NSCs对大鼠脑卒中有更好的神经保护作用。

GDNF基因修饰的NSCs移植对暂时性缺血性脑卒中大鼠的神经保护作用研究

目的探讨移植胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line derived neurotrophic factor,GDNF)基因修饰的神经干细胞(neural stem cells,NSCs)对暂时性缺血性脑卒中大鼠的神经保护。方法用GDNF重组腺病毒载体转染新生大鼠NSCs(GDNF/NSCs),分化培养7 d后,行免疫细胞化学染色检测微管相关蛋白2(MAP2)。采用改良的插线法制作暂时性脑缺血再灌注模型,3 d后经脑室分别移植生理盐水、NSCs和GDNF/NSCs。于再灌注后1、2、3、5、7周末处死大鼠,行免疫组织化学染色观察移植细胞在脑内的神经元分化及星形胶质细胞在缺血区形成胶质界膜情况,行Luxol fast blue(LFB)染色显示神经纤维损伤情况。结果GDNF/NSCs体外分化为MAP2^+细胞的比例显著高于NSCs的分化。移植细胞在脑内分化为MAP2^+细胞,于再灌注第5周分化达高峰,GDNF/NSCs组于再灌注第3~7周,其MAP2^+细胞显著高于NSCs组。各组缺血区由星形胶质细胞形成的血管胶质界膜存在不同程度的破坏,其连续性中断。对照组在各个时间点,血管胶质界膜损伤严重,完整性差,两细胞移植组,其胶质界膜随时间延长逐渐完整,GDNF/NSCs组早于NSCs组完善对胶质界膜的修复。此外,GDNF/NSCs组的神经纤维损伤修复优于NSCs组。结论GDNF/NSCs比NSCs对暂时性缺血性脑卒中大鼠模型有更好的神经保护作用,可能是与GDNF提高了NSCs在脑内的神经元分化,增强了NSCs对胶质界膜及神经纤维修复有关。