hMMS2基因对结肠癌细胞耐药逆转的影响

为探讨hMMS2(Human methyl methanesulfonate sensitive mutant 2)基因对人结肠癌细胞耐药逆转的影响,文章以人高分化耐奥沙利铂结肠癌细胞(THC8307/L-OHP)为实验材料,采用脂质体-质粒转染技术构建了带有干扰目的基因hMMS2的miRNA片段并携带绿色荧光蛋白标记重组质粒(pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-MMS2)的细胞系,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫荧光技术(Immunostaining technique)检测该细胞系的干扰效率。选择hMMS2低表达具有统计学意义的上述细胞系作为实验组细胞,同时将未曾作过处理的THC8307/L-OHP细胞作为空白对照组,转染绿色荧光蛋白空质粒(pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR)的THC8307/L-OHP细胞作为阴性对照组,以噻唑蓝比色分析实验(MTT colorimetric analysis assay)、克隆形成实验(Colony formation assay)对3组细胞的存活率和克隆形成率进行检测,结果显示:实验组细胞的奥沙利铂半数抑制浓度(Half inhibition concentration,IC50)、耐药指数(Resistance index,RI)及克隆形成率(Colony-forming efficiency,CFE)均比对照组细胞明显降低(P<0.05),而相对逆转率(Relative reverse efficiency,RRE)增高(P<0.05),提示实验组细胞增殖能力减弱;以罗丹明123实验(Rhodamine 123 assay)结合倒置荧光显微镜、流式细胞仪检测技术等观测细胞的凋亡变化,结果显示,实验组细胞的凋亡率较对照组细胞显著增高(P<0.05);两对照(空白、阴性)组间并无细胞增殖或凋亡的显著性差异。研究结果提示:下调hMMS2基因表达可逆转人高分化耐奥沙利铂结肠癌细胞对L-OHP的耐药性并促进结肠癌细胞的凋亡。

下调REV3通过激活p53诱导结肠癌细胞THC-8307凋亡

目的利用RNA干扰(RNA interference,RNA i)技术下调结肠癌细胞THC-8307中REV3表达,观察细胞凋亡并探讨p53在该凋亡过程中的作用。方法以人高分化结肠癌细胞系(THC-8307)为研究对象,进行REV3及p53干扰质粒的转染。通过实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)和免疫荧光技术检测干扰效率。利用流式细胞仪检测细胞凋亡率,以qRT-PCR和Western blot检测各组p53的表达量。同时,对REV3及p53进行两质粒共转染实验,同时下调REV3和p53后两组细胞的凋亡率。结果下调REV3诱导THC-8307细胞早期凋亡率和晚期凋亡率明显增加(P<0.01),且实验组p53表达量明显增高;REV3-p53同时下调与REV3单独下调相比,细胞凋亡率明显减低。结论下调REV3通过激活p53诱导结肠癌细胞THC-8307凋亡。