与缝隙连接43蛋白相关的星形胶质细胞通过外泌体对神经元保护作用的机制研究

目的:观察缝隙连接43(Cx43)蛋白参与星形胶质细胞来源的外泌体对神经元保护作用的机制。方法:采用C57BL/6胎鼠以原代培养法获取星形胶质细胞及神经元,建立共培养(Co-Culture)模型,给予神经元过氧化氢(H_(2)O_(2))损伤,星形胶质细胞给予Cx43特异性阻断剂Gap26,分别建立(Co-Culture+H_(2)O_(2))组及(Co-Culture+H_(2)O_(2)+Gap26)组,同时设单纯神经元损伤(Neuron+H_(2)O_(2))组,通过蛋白免疫印记(WB)法,测定神经元骨架相关的紧密连接蛋白(ZO-1)、α-肌动蛋白(α-actin)、谷氨酸转运蛋白-1(GLT-1)、外泌体标记蛋白CD63和凋亡相关的Bax/Bcl-2比例的变化,采用高效液相色谱仪(HPLC)观察神经元谷氨酸(Glu),采用ELFA法检测氧化应激因子腺嘌呤二核苷酸磷酸(NAPDH)氧化酶活性。结果:与(Neuron+H_(2)O_(2))组相比,(Co-Culture+H_(2)O_(2))组的神经元ZO-1、α-actin、GLT-1和CD63的表达明显上调,而Bax/Bcl-2比例、NAPDH氧化酶活性则明显降低(P<0.05)。在给予Gap26后,可明显抑制以上星形胶质细胞对神经元的此种作用(P<0.05)。结论:Cx43蛋白可促进星形胶质细胞的外泌体被神经元吸收,可产生稳定细胞形态结构、加强兴奋性氨基酸转运及降低神经元凋亡和氧化应激损伤等神经保护功能。

心肺复苏大鼠脑红蛋白缺氧诱导因子-1α的表达变化

目的研究大鼠心肺复苏后不同时间点脑红蛋白（neuroglobin，Ngb）、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）在mRNA水平表达中的变化规律，探讨Ngb在心脏骤停后脑缺血缺氧损伤病理变化中的作用机制及其诱导表达途径。方法SD雄性大鼠40只随机分为五组（n=8）：假手术组及复苏后1h、6h、12h、24h组。窒息法致大鼠心脏骤停后予以心肺复苏，复苏后不同时间点处死大鼠，应用RT—PCR法观察脑组织NgbmRNA、HIF-1αmRNA表达情况。结果复苏组脑组织NgbmRNA表达高于假手术组（P〈0．05），并于损伤后12h达高峰；与假手术组比较，复苏组脑组织HIF-1αmRNA表达增加（P〈0．05），且于复苏后1h、6h、12h、24h呈持续上升趋势。结论大鼠心脏骤停后早期脑组织NgbmRNA、HIF—lotmRNA表达增加，且呈时相性改变。