IL-4，GM-CSF体外诱导猪单核来源树突状细胞和功能鉴定

目的探讨体外大量培养扩增猪外周血单核细胞来源DC（monocyte—derived DC，MoDC），对细胞表型，免疫学功能及生物学活性进行鉴定。方法提取猪外周血单核细胞（PBMC），经GM—CSF和IL-4诱导，体外培养5-8d，得到悬浮的MoDC，培养第5天加入浓度为1μg/ml的LPS诱导成熟。通过倒置相差显微镜下观察MoDC细胞形态，流式细胞术检测表面CD80／86，SLA-II，CD172a等分子表达，BrdU法测定混合淋巴细胞培养MoDC对同种异体T细胞的刺激能力，ELISA法检测MLR上清液中IFN—γL-4水平。结果IL-4／GM—CSF刺激猪PBMC，可以获得MoDC，其表型为CD1^＋CD14^＋CD172a^＋CD80／86^＋SLA—II^＋，经LPS刺激后CD80，CD86，SLA—II表达升高。结论应用细胞因子诱导猪PBMC成功获得了MoDC，为今后进一步研究移植耐受诱导和应用于异种移植打下基础。

MyD88siRNA诱导猪调节性树突状细胞的实验研究

采用siRNA干扰猪外周血单核细胞来源DC(monocyte-derived DC,MoDC)髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)基因的表达,检测干扰前后的细胞表型,免疫学功能及生物学活性,探讨猪调节性DC诱导耐受的机制。提取猪外周血单核细胞(peripheral bloodmonocyte,PBMC),经GM-CSF和IL-4诱导,体外培养得到未成熟MoDC。通过化学合成法制备针对MyD88基因siRNA 2对,在LipofectamineTM RNAiMax转染试剂介导下转染MoDC,Westernblot法及Real-time PCR检测干扰前后MyD88基因的表达水平。培养至第五天将DC分为四组:对照组、LPS组、干扰1组和干扰2组,继续培养3天。siRNA干扰后,MyD88 mRNA和蛋白质表达水平下降>80%;MyD88siRNA序列1和序列2干扰后MoDC CD80/86、SLA-Ⅱ表达降低,MLR显示刺激指数下降,IFN-γ降低,IL-4增高,与LPS组差异均具有统计学意义(P<0.05)。脂质体介导siRNA技术能干扰猪MoDC的MyD88基因,阻断TLR信号传导途径,抑制DC成熟,获得耐受性DC,表现为对同种异体T细胞的刺激能力降低,诱导免疫反应向Th2偏移。