RNA恒温扩增联合熔解曲线分析鉴定胞内分枝杆菌的应用研究

目的建立RNA恒温扩增联合熔解曲线分析技术(RIARD-MCA)鉴定胞内分枝杆菌的方法,评估其应用效果。方法以胞内分枝杆菌的16SrRNA的特异序列为检测靶标设计RNA探针和带有T7启动子的逆转录扩增引物,42℃恒温扩增实时检测后进行熔解曲线分析,对21种分枝杆菌标准株、5种非分枝杆菌和229株分枝杆菌临床分离株进行鉴别检测;同时以16SrRNA及hsp65基因PCR测序结果为金标准对照。结果 RIARD-MCA在21种分枝杆菌标准株及5种非分枝杆菌检测中只有胞内分枝杆菌阳性,其他阴性,与测序结果一致;在分枝杆菌临床分离株检测中,鉴定胞内分枝杆菌63株,其余为非胞内分枝杆菌,PCR测序为胞内分枝杆菌63株,其余166株为非胞内分枝杆菌,其灵敏度为100%(63/63),特异度为100%(166/166)。结论 RIARD-MCA鉴定胞内分枝杆菌具有较高的灵敏度、特异度和准确性,且检测快速,有望作为一种新的胞内分枝杆菌临床分离株鉴定方法。

四川地区200例随机临床分枝杆菌分离株耐药状况的分析研究

目的了解四川地区分枝杆菌的耐药状况，为临床用药提供参考依据。方法采用罗氏绝对浓度法对我院2009年6月—2010年12月间的200株分枝杆菌随机临床分离株进行9种抗结核药物的敏感性试验，并同步进行微量药敏（MIC）检测。结果200株分枝杆菌临床分离株中192株（96．0％）为结核分枝杆菌（MTB），8株（4．0％）为非结核分枝杆菌（NTM），两种分群方法结果一致。192株MTB中108株对9种抗结核药物全部敏感，对≥1种药物耐药者84株，总耐药率为43．7％（84／192），多重耐药（MDR）23株（12．0％），广泛耐药4株（2．1％），全耐药2株（1．0％）。耐9种不同抗结核药物的顺位由高到低依次为：丙硫异烟胺（PTA，33．3％）、异烟肼（INH，20．8％）、利福平（RFP，17．2％）、硫酸链霉素（SM，16．7％）、硫酸阿米卡星注射液（AMK，16．7％）、力克肺疾（PI，16．1％）、乙胺丁醇（EMB，10．9％）、左氧氟沙星（LFX，8．8％）、硫酸卷曲霉素（CPM，6．2％）；单-耐1、2、3、4、5、6、7、8和9种药物耐药率分别为12．5％、7．3％、6．2％、4．7％、4．2％、3．6％、3．1％、1．0％和1．0％。对I〉2种药物耐药者60株（31．2％）；对〉14种药物耐药者34株（17．7％）。MDR—TB对另外7种药物的罗氏药敏耐药率从高到底依次为：PI（78．3％）、EMB（69．6％）、SM（65．2％）、PTA（65．2％）、LFX（39．1％）、AMK（30．4％）、CPM（8．7％）。结论四川地区耐药性结核病仍处于全国较高水平，特别是同时耐多种（≥4种）药物的耐药率较高，应引起重视。