托瑞米芬联合顺铂对p53缺失型肺癌细胞株H1299生长抑制作用的研究

目的探讨托瑞米芬联合顺铂对人肺癌细胞株H1299细胞生长抑制作用及其机制，了解P糖蛋白在H1299细胞中的表达情况。方法本研究设空白组、对照组（单细胞悬液100ul）、实验组（单细胞悬液100ul＋不同药物及浓度），实验组又分为托瑞米芬、顺铂和该2种药物联合组。用四甲基偶氮唑兰比色法检测托瑞米芬及与顺铂联用后H1299细胞的细胞增殖抑制率，分析其细胞周期的变化，检测P糖蛋白在H1299中的表达。结果托瑞米芬的浓度为20和40umol／L时的细胞增殖抑制率分别为（0．307±0．011）％和（0．634±0．007）％，与对照组（0．068±0．031）％比较，组间差异均有统计学意义（P〈0．01）。低剂量的托瑞米芬（5、10umol／L）联合不同浓度顺铂后的细胞增殖抑制率均高于单用顺铂组，并呈现浓度依赖性，组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。托瑞米芬与顺铂联用促进H1299细胞凋亡，呈现浓度依赖性。托瑞米芬与顺铂联用后，与单用顺铂组相比，H1299细胞周期发生明显变化，G0／G1期比例增加，S期细胞比例下降，检测出44．9％的H1299细胞有P糖蛋白的存在。结论低浓度的托瑞米芬（5、10umol／L）与顺铂联用对H1299细胞有明显的协同抗肿瘤效应，其机制可能与抑制细胞增殖、改变细胞周期分布、促进细胞凋亡有关，且这种作用不依赖于p53基因和雌激素受体。

ERCC1、RRM1和BRCA1在非小细胞肺癌中的表达及预后意义

目的:探讨DNA修复基因家族成员ERCC1、RRM1和BRCA1在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及预后意义。方法:应用实时荧光定量PCR技术对32例肺癌及16例癌旁组织中ERCC1、RRM1和BRCA1基因的mRNA进行定量检测。用非参数检验、相关分析、Kap lan-M e ier生存曲线和COX多因素回归分析进行统计分析。结果:NSCLC中ERCC1、RRM1和BRCA1在癌组织内表达量显著高于癌旁组织,且在癌内表达具有正相关性;RRM1在肺鳞癌中高于腺癌,但在不同分期中表达无差异;ERCC1和BRCA1在不同病理类型和分期中表达均无差异;RRM1和BRCA1高表达组的生存期明显长于低表达组;COX多因素回归分析示RRM1表达是影响本组患者预后的独立因素。结论:NSCLC中,ERCC1、RRM1和BRCA1在肺癌组织中的表达显著高于癌旁组织,RRM1和BRCA1高表达组的生存期长于低表达组。RRM1和BRCA1可作为判断预后的一种指标。

不同部位皮下注射DNA疫苗对小鼠体液免疫的影响

主要探讨在小鼠不同部位皮下注射DNA疫苗对体液免疫应答的影响,为DNA疫苗在体内获得高滴度抗体提供优化条件.用RT-PCR从人肺癌细胞株A459中克隆VEGF片段,并插入pVAX1质粒构建pVAX1-VEGF真核表达质粒;在耳廓、胸部、腹部、尾跟部、背部及足垫的皮下注射1μg/μL pVAX1-VEGF疫苗DNA 100μL,ELISA法检测血清中VEGF抗原表达及其IgG抗体分布,测定血清中IgG2a和IgG1两亚型水平.实验结果发现:耳廓、胸部、腹部免疫产生的VEGF抗原较快,其中耳廓免疫产生的体液免疫最快最强,与胸部、腹部、背部、尾根及足垫免疫产生的体液免疫反应相比,具有统计学意义,同时pVAX1-VEGF疫苗组与pVAX1对照组的体液免疫差异显著,但pVAX1-VEGF疫苗组主要产生IgG2a型抗体.上述结果表明:所构建人VEGF的DNA疫苗能在小鼠体内有效表达,不同部位皮下免疫后均能产生抗VEGF的IgG抗体,以IgG2a抗体为主;但就抗原表达、抗体及IgG2a而言,以耳廓皮下接种最佳.

液态活检的研究进展

由于转移性肿瘤内在的分子异质性以及肿瘤基因组的动态进化能力,使得通过活检等手段获取的肿瘤组织无法捕获肿瘤基因组的全部特征,一种新的诊断概念——"液态活检"在过去几年受到广泛关注。液态活检已然改变了肿瘤学的临床实践,通常用于指导靶向用药、监测疾病进展以及追踪药物耐药。目前正在评估基于血液分子谱检测在肿瘤早期诊断以及监测微小残留病灶中的应用价值。本文将着重关注肺癌液态活检的最新进展,从液态活检的样本类型、常用检测方法以及临床应用等方面进行阐述。

不同转移部位对广泛期小细胞肺癌患者治疗预后的影响

背景与目的:小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)是肺癌中恶性程度最高的病理学类型,易发生远处转移,转移部位及肿瘤负荷对患者的预后有一定预测作用。比较不同远处转移部位及转移器官个数对广泛期SCLC患者预后的影响,以期为临床决策提供参考。方法:收集2014年5月—2019年2月在同济大学附属上海市肺科医院就诊的广泛期SCLC患者的临床资料,回顾性分析其远处转移部位及转移器官个数与患者总生存期(overall survival,OS)及疗效的关系。结果:206例广泛期SCLC患者中,大部分(69.0%)患者在诊断初期就已发生远处转移,转移器官个数越多,中位OS越短(P=0.0079),中位无进展生存期(progression-free survival,PFS)也越短(P=0.0270)。脑转移、骨转移、对侧肺转移、肝转移及其他器官转移组中位OS分别为14.83、11.70、14.47、11.10及12.47个月(P=0.0311)。脑转移、骨转移、对侧肺转移、肝转移及其他器官转移组中位PFS分别为5.07、4.07、7.10、3.87及4.80个月(P=0.0336)。结论:广泛期SCLC患者远处转移提示预后差,转移器官个数越多,OS及PFS越差。在不同器官转移中,肝转移及骨转移患者OS及PFS较差,提示预后不良。

非小细胞肺癌组织表皮生长因子受体基因第19外显子突变研究

目的研究非小细胞肺癌的表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）基因第19外显子突变情况。方法提取72例手术切除肺癌基因组DNA，用巢式PCR扩增EGFR基因第19外显子并测序，分析EGFR基因第19外显子突变及其与临床特征的相关性。结果检测到13例肿瘤组织存在EGFR基因第19外显子多核苷酸的缺失突变，共有4种突变类型，突变率为18．1％，所检测的突变均为杂合型；EGFR基因第19外显子突变与肺腺癌、女性患者与不吸烟者相关。结论EGFR基因第19外显子存在多核苷酸的框架缺失突变，以女性、腺癌和不吸烟患者为主。

环氧合酶2的DNA疫苗构建及其在COS-7细胞中表达

构建了环氧合酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)的DNA疫苗载体pVAX1-COX-2,并考察在COS-7细胞中表达.用RT-PCR法从肺癌A549细胞中获得环氧合酶-2基因片段,此片段插入pVAX1载体构建pVAX1-COX-2真核重组表达质粒,脂质体介导法转染COS-7细胞,以pVAX1为对照,收集稳定转染细胞,利用RT-PCR和West-ern-blot分别在mRNA和蛋白水平上考察COX-2表达.实验结果表明:RT-PCR法从A549细胞mRNA中扩增1.8 kb的COX-2基因片段,酶切与测序结果表明所构建的真核表达载体pVAX1-COX-2与预期相符,质脂体法成功地将质粒DNA转染到COS-7细胞中.RT-PCR和Western-blot分析结果表明COX-2已表达.因此,所构建的真核表达载体pVAX1-COX-2正确,且在COS-7细胞中表达.

DNA修复基因XRCC3多态性与肺癌易感性的关系

目的研究 DNA 修复基因 XRCC3多态性与肺癌易感性的关系。方法采用病例-对照研究,于2006年9月至2007年1月收集上海肺科医院原发性肺癌患者291例及同期住院的非肿瘤患者273例,应用 Taqman 探针结合实时荧光 PCR 方法分析病例组和对照组 XRCC3基因Thr241Met 的多态性分布,比较不同基因型与肺癌易感性的关系以及基因多态性与吸烟对肺癌的交互作用。对照组与病例组的比较用 X^2检验,以调整比值比及95%可信区间表示相对危险度,所有统计检验均为双侧概率检验,所有资料均用 SPSS 软件进行统计。结果与携带 XRCC3密码子241野生纯合基因型(Thr/Thr)且不吸烟者相比,携带同样基因型且吸烟者患肺癌的风险会增加,其调整比值比(OR 值)为2.47[95%可信区间(CI)为1.49～4.08,P<0.01];携带有杂合基因型(Thr/Met)且吸烟者患肺癌的风险也会增加,其调整 OR 值为2.28(95%CI 为1.21～6.60,P=0.017)。野生纯合基因型(Thr/Thr)且吸烟量少于30包年可能对肺腺癌有较弱的保护作用(OR=0.49,95%CI 为0.26～0.93,P=0.03)。携带有 XRCC3密码子241Met 等位基因且吸烟者患肺鳞癌的风险明显增加(调整 OR=9.69,95%CI 为3.27～28.72,P<0.01)。携带241Met 等位基因且吸烟剂量<30包年和≥30包年的患者患肺鳞癌的风险也不同,OR 值分别为8.00(95%CI 为1.97～32.52,P<0.01)和11.67(95%CI 为2.98～45.73,P<0.01)。结论 DNA 修复基因 XRCC3多态性可能对肺癌易感性产生影响,并可能与吸烟有一定的协同作用。

非小细胞肺癌EGFR基因第19外显子突变的特征分析

吉非替尼（gefitinib）是针对肺癌表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）设计的肿瘤靶向药物，已使众多的非小细胞肺癌（NSCLC）患者获益，但其疗效与EGFR基因突变相关。通过EGFR基因第19外显子可筛选gefitinib药物的最适合患者进行个体化治疗，提高疗效，减少盲目用药。我们检测了62例NSCLC患者的EGFR基因第19外显子突变，并分析突变DNA特征及氨基酸变化规律。