Hedgehog-Gli信号通路在肝星状细胞激活中的作用

Hedgehog信号通路是生物体内重要的调节昆虫和哺乳动物胚胎发育的经典通路之一。其调控发育过程中及组织损伤过程中干细胞的分化、移行和增殖。肝纤维化是慢性肝脏疾病共同的病理过程,也是慢性肝病向肝硬化发展的必经阶段,其核心环节为肝星状细胞的异常活化。然而长期以来Hedgehog通路在肝纤维化过程中对肝星状细胞的调控作用未得到认识。近年来,学者逐渐意识到经典的Hedgehog信号通路与肝星状细胞的活化有关,然而作用机制尚不明确。

Hedgehog-Gli1信号通路对肝星状细胞增殖和凋亡的调控作用

目的研究肝星状细胞（HSC）中hedgehog（Hh）信号通路成员Shh、patched、smoothened（Smo）和Gli—1的表达，及Hh通路抑制剂环耙明对HSC—T6细胞株增殖、凋亡及其激活的影响。方法体外培养HSC株，提取细胞总RNA，用RT—PCR扩增Shh、patched、Smo、Gli1基因；用环耙明作用HSCT6后采用四甲基偶氮唑盐法检测其在体外对HSCT6的抑制情况，流式细胞仪检测其对HSCT6细胞周期的影响，碘化丙啶和膜联蛋白-V双染荧光标记法及提取细胞DNA检测HSCT6细胞凋亡，荧光定量聚合酶链反应检测Gli1、转化生长因子D1、血小板衍生生长因子、Bcl-2mRNA的表达水平。结果HSC—T6中表达有Hh通路家族成员。环耙明在50、100、150、200、250μmol／L作用下，4值分别为1．55±0．07、1．19±0．05、0．78±0．06、0．48±0．03、0．38±0．04，正常对照组为1．74±0．03，环耙明组与正常对照组相比，F=636．81，P〈0．01，差异有统计学意义。流式细胞术测出干预后环耙明G0／G1期细胞所占比例为65．08％±1．50％，正常对照组为55．41％±2．54％，两组比较，f=-8．05，P〈0．01。药物干预后提取DNA及碘化丙啶和膜联蛋白V双染荧光标记均检测出HSC—T6细胞凋亡。荧光定量结果表明，经环耙明干预后，HSCT6细胞中Gli1、转化生长因子β1、血小板衍生生长因子、Bcl-2mRNA的目的基因相对表达量分别0．28±0．05、0．13±0．04、0．07±0．04、0．17±0．02，正常对照组为1，各基因表达量较正常对照组均明显降低，f值分别为23．09、31．34、43．87和59．10，P值均〈0．01，差异有统计学意义。结论HSCT6中存在Hh信号通路，环耙明能抑制HSC增殖及增殖周期，促进活化的HSC凋亡，其抑制HSC活化可能是通过抑制Hh—Gli-1信号通路的结果。

Hedgehog通路与肝纤维化及肝星状细胞活化的关系研究

目的探讨Hedgehog通路与肝纤维化及肝星状细胞（HSC）活化的关系。方法清洁级SD雄性大鼠20只，均分为模型组和对照组。模型组采用腹腔注射四氯化碳（CCh）和高脂饮食诱导肝纤维化，对照组予以正常饮食。第8周末取模型组存活大鼠与对照组中大鼠各5只处死，取左叶肝脏组织。HE、Masson染色观察两组肝组织病理变化；逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）检测纤维化大鼠肝脏中表达Hedgehog通路成员超音速Hedgehog信号通路（Shh）、膜受体patched（Ptc）、smoothened（Smo）和核转录因子Gli表达；实时荧光定量PCR法检测Hedgehog通路成员及HSC活化标志基因α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）mRNA在两组大鼠肝脏中的表达差异。体外培养HSC-T6细胞，RT-PCR检测HSC-T6细胞株中Hedgehog通路成员的表达；四甲基偶氮唑盐比色分析（MTT）法检测不同浓度．环耙明（Cyclopamine，Cyc）对HSC-T6增殖的影响；分别用0、100μmol／L的Cyc干预HSC-T6，实时荧光定量PCR法检测Shh、Smo、Ptc、Gli-1及α-SMAmRNA表达差异。结果模型组大鼠肝脏有大量脂质及胶原沉积，且肝脏组织中均有Shh、Smo、Ptc、Gli-1表达。荧光定量PCR结果示模型组大鼠Shh、Smo、Gli-1及ccSMAmRNA表达均较对照大鼠升高（20．45±3．31、12．78±0．53、10．88±2．41、4．91±2．59比1；P值均〈0．05）。Cyc在体外对HSC-T6有明显的抑制作用，且抑制作用呈剂量依赖性（F=636．81，P〈0．01）。荧光定量PCR结果示，用Cyc100μmol／L干预的HSC-T6中，Ptc、Smo、Gli-1和fSMA表达量分别为0．20±0．11、0．21±0．08、0．28±0．05和0．27±0．10，与Cyc0μmol／L干预比较差异均有统计学意义（P值均〈0．01）。结论肝纤维化过程中Hedgehog通路成员表达增高，抑制Hedgehog通路可抑制HSC活化，推测Hedgehog通路通过活化HSC促进肝纤维化的发生。

糖原累积症-Ib型合并克罗恩病样肠炎一例

糖原累积症(GSD)-Ib型是常染色体隐性遗传性疾病, 常伴发炎症性肠病。现报道1例GSD-Ib合并克罗恩病样肠炎的病例, 希望诊疗过程有助于提高临床医师对此罕见病的认识。