一种由piggyBac转座子介导高效构建稳定细胞株的策略

构建稳定细胞株的关键是如何提高外源目的基因插入基因组的效率。piggyBac转座子(简称PB)通过"切离-粘贴"的机制实现在基因组上的转座,其本质是在基因组的不同位点间进行插入。利用PB转座子高效插入基因组的特性,并通过改造该转座系统,即分别在PB转座酶的3’端和5’端加入核定位信号肽,然后在人源胚胎肾293细胞系中评价改造后的PB转座子介导获得稳定细胞株的能力。结果表明,野生型PBase组的克隆形成率是对照组的6.7倍,3’NLSPBase组比野生型PBase组再提高1.3倍。利用人宫颈癌HeLa细胞进一步验证上述结果。可见,经改造后的PB转座子能够提高外源目的基因插入基因组的效率,实现高效构建稳定细胞株。

阿尔茨海默病动物模型的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是最常见的老年性神经退行性疾病之一,严重威胁着老年人的健康。目前被批准用于治疗AD的药物只能缓解AD的症状,不能治愈AD或阻止其恶化。近40年来,虽然AD的治疗方法层出不穷,包括阻止脑淀粉样蛋白沉积或清除已有淀粉样蛋白斑块的化合物,但是它们的临床疗效并不显著。因此,需要更多的基础和临床研究来深入探讨AD疾病生物学机制。实验动物模型不仅对AD发病机制的研究,还对AD药物的开发都非常重要。本综述从AD病理组织学特征和遗传因素出发,论述已有的AD动物模型以及其评价方法。

Isl1在后肢发育过程中的表达及作用

目的研究Isl1在后肢发育过程中的表达及作用。方法使用Isl1-nLacZ、Isl1-Cre、HoxB6-Cre和Isl1^(f/f)小鼠模型,以及X-gal染色、骨染色、组织分析方法研究Is1l在后肢发育过程中的表达及作用。结果随着小鼠后肢开始发育,在胚胎期第10.5天,Isl1在后肢原基高表达。在胚胎逐渐发育至胚胎期第12.5天的过程中,Isl1在后肢的表达逐渐下调。在胚胎期第12.5天,Isl1仅在后肢的最后部表达。但在胚胎期第13.5、15.5天,Isl1在后肢的后半部表达明显升高,主要在后肢骨骼肌细胞中表达。Isl1-Cre谱系研究显示,lsl1参与后肢的骨和骨骼肌细胞的形成。利用HoxB6-Cre在后肢中敲除Isl1可导致突变鼠后肢发育严重异常,伴有坐骨,耻骨,腓骨和跟骨及脚趾骨发育不良或缺失,突变鼠5号脚趾缺失最多见,而1号脚趾缺失累及较少。突变鼠后肢骨骼肌细胞的中央核比例远高于对照组。结论 Isl1在小鼠后肢发育过程中动态表达,参与后肢骨骼肌细胞和骨细胞的发育,对后肢发育过程中近一远和前后轴的建立起重要作用。