炎症因子白介素-6对骨细胞表达RANKL的影响

目的 :通过研究炎症因子白介素-6对骨细胞表达核因子-κB受体活化因子配基(RANKL)的影响,为更好地理解炎症因子在骨细胞参与骨重塑中的作用,提供理论基础。方法:体外培养MLO-Y4细胞系细胞,并应用不同浓度的人工合成白介素-6(IL-6)和白介素-6受体(IL-6R),共同作用刺激骨细胞24 h后,采用实时荧光定量PCR、免疫印迹试验、免疫荧光等方法,检测RANKL以及酪氨酸激酶2(JAK2)的磷酸化蛋白的表达变化。结果:应用不同浓度人工合成的IL-6和IL-6R,共同作用刺激骨细胞后,RANKL的表达水平随着IL-6的浓度增加而增加,并且IL-6通路中的JAK2蛋白磷酸化亦增加,提示IL-6及其受体可以促进骨细胞表达RANKL,并且与JAK2的活化密切相关。结论 :炎症因子IL-6可以通过增加JAK2蛋白的磷酸化,来促进骨细胞表达RANKL。

低氧状态下骨细胞参与破骨细胞形成的作用机制研究

目的探究低氧状态下骨细胞对破骨细胞形成的作用及其机制。方法用去铁胺甲磺酸(DFO)刺激骨细胞系MLO-Y4建立体外低氧骨细胞培养体系。CCK-8实验检测DFO对MLO-Y4细胞增殖活性的影响;采用DFO处理后的MLO-Y4细胞培养液制备条件培养基诱导RAW264.7细胞分化,行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测;利用实时荧光定量聚合酶链反应、细胞免疫荧光和蛋白质印迹(Western blot)检测DFO作用下MLO-Y4表达低氧诱导因子(HIF)-1α与核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的情况;检测HIF-1α siRNA转染对MLO-Y4表达HIF-1α和RANKL的影响。结果 100 μmol·L^-1 DFO作用24 h时MLO-Y4增殖活性升高,之后随着时间延长细胞增殖活性下降(P<0.01)。加入可溶性RANKL后,低氧组可见破骨细胞形成明显增加(P<0.001)。100 μmol·L^-1 DFO作用下,HIF-1α mRNA表达稳定,RANKL mRNA的表达随时间明显变化,24 h时最高(P<0.01);HIF-1α、RANKL蛋白表达升高(P<0.01)。低氧状态下siHIF-1α转染可降低HIF-1α和RANKL的表达(P<0.01),破骨细胞减少(P<0.01)。结论低氧状态下MLO-Y4可通过上调HIF-1α的蛋白水平促进RANKL的生成,进而加速RAW264.7细胞向破骨细胞分化。

基于基因芯片整合分析筛选慢性牙周炎相关基因和转录因子

目的利用生物信息学技术分析中重度牙周炎患者炎性病变牙龈组织与健康牙龈组织间基因表达的差异。方法使用基因表达数据分析工具GEO2R从牙周炎数据集GSE10334与GSE16134中筛选差异表达基因并取交集。应用g:Profiler功能富集分析工具,分别对上调及下调基因进行基因本体分析和通路分析。利用在线STRING检索工具构建蛋白相互作用(PPI)网络,并在Cytoscape软件中进行可视化及进一步分析,包括使用cytoHubba、MCODE和iRegulon等插件进行核心基因、关键模块鉴定和转录因子预测。结果共筛选出196个牙周炎差异基因,其中上调基因139个,下调基因57个;上调基因参与了免疫系统、病毒蛋白与细胞因子及细胞因子受体的相互作用、细胞因子-细胞因子受体相互作用、白细胞跨内膜迁移和趋化因子受体结合趋化因子等免疫反应相关途径,而下调基因则涉及了角质化包膜形成、角化等途径。PPI网络中处于核心位置的基因为CXC基序趋化因子配体(CXCL)8、CXCL1、CXC基序趋化因子受体(CXCR)4、选择素(SEL)L、CD19和IKAROS家族锌指(IKZF)1。PPI网络关键模块分别参与趋化因子应答、B细胞受体信号通路和白细胞介素应答。iRegulon预测结果显示,转录因子干扰素调节因子(IRF)4可信度最高。结论牙周炎的发病机制与牙龈组织中CXCL8、CXCL1、CXCR4、SELL、CD19和IKZF1等基因的表达变化密切相关,转录因子IRF4可能是重要的上游调控因子。

低氧状态下IL-6对骨细胞表达RANKL的影响

目的探讨低氧状态下炎症因子白介素-6(IL-6)对骨细胞分泌核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的影响及相关机制。方法建立大鼠下颌截骨术模型,应用IL-6和氯化钴(CoCl2)建立体外低氧炎症微环境培养MLO-Y4小鼠长骨骨细胞系,采用苏木素-伊红(HE)染色、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色和免疫荧光染色观察术后大鼠下颌骨破骨细胞活化情况和低氧诱导因子(HIF-1α)、RANKL的表达水平;利用实时荧光定量聚合酶链反应(RT qPCR)、细胞免疫荧光、蛋白质印迹(Western blot)和小干扰RNA(si RNA)转染实验检测低氧状态下IL-6对MLO-Y4小鼠长骨骨细胞系细胞分泌HIF-1α和RANKL的影响。结果术后2周及4周大鼠下颌骨破骨细胞活化水平和HIF-1α、RANKL表达水平均提高。低氧状态下,IL-6可使MLO-Y4细胞HIF-1α、RANKL的表达水平提高。低氧状态下IL-6转染组的HIF-1α和RANKL蛋白表达水平均低于转染对照组和对照组。结论低氧状态下IL-6可以通过上调MLO-Y4细胞的HIF-1α表达水平促进RANKL的分泌。