上海地区粒细胞缺乏伴肺部感染血液病患者呼吸道分离细菌及耐药性多中心回顾性研究

目的了解上海地区中性粒细胞缺乏(粒缺)伴肺部感染血液病患者呼吸道分泌物检出病原菌的分布及耐药情况。方法回顾性收集2012年1月-2014年12月上海市12所医院血液科粒缺伴肺部感染住院患者呼吸道分泌物分离菌株的临床资料、药敏结果,分析病原菌分布及其药敏数据,比较不同原发疾病病原菌分布之间的差异。结果共分离病原菌623株,其中革兰阳性菌138株(22.2%),革兰阴性菌485株(77.8%),非发酵菌占革兰阴性菌的60.2%(292株)。淋巴瘤患者标本中分离革兰阳性菌构成比(35.0%)高于急性髓系白血病和急性淋巴细胞白血病患者。居前5位的细菌分别是嗜麦芽窄食单胞菌(104株,16.7%)、肺炎克雷伯菌(88株,14.1%)、鲍曼不动杆菌(62株,10.0%)、铜绿假单胞菌(56株,9.0%)、金黄色葡萄球菌(48株,7.7%)。肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素敏感率>98%,铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为24.3%、8.9%,嗜麦芽窄食单胞菌对左氧氟沙星、米诺环素、复方磺胺甲口恶唑敏感率>90%,鲍曼不动杆菌对阿米卡星、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率低于10%。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)检出率为71.4%,未发现耐万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺的金黄色葡萄球菌。结论粒缺伴肺部感染患者呼吸道分泌物分离菌株以革兰阴性菌占多数,其中非发酵菌占50%以上,细菌耐药率整体低于CHINET全国医院大样本监测结果。

SIRT1与血液系统肿瘤关系的研究进展

SIRTl(silent mating-type information regulation 2 homologue 1)是一种组蛋白去乙酰化酶,通过对底物的去乙酰化修饰,参与细胞的生理、病理过程,进而影响多种疾病的发生发展。SIRT1参与血液系统肿瘤的发生,并表现出促进和抑制的双重作用,这可能与肿瘤的类型及其复杂的上下游信号通路有关。SIRT1及其通路有望为复发、难治血液系统肿瘤的治疗提供一条新的途径。

DICE方案治疗难治和复发性非霍奇金淋巴瘤的疗效分析

背景与目的:目前对于难治性和复发性非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin)slymphoma,NHL)尚无标准解救化疗方案,本文旨在探讨DICE方案(地塞米松,异环磷酰胺,顺铂及VP-16)治疗难治和复发性NHL的疗效和不良反应。方法:80例难治和复发性NHL患者,其中T细胞NHL25例,B细胞NHL55例,既往均接受过6个周期的CHOP化疗方案无缓解。现采用DICE方案对患者进行解救治疗,并对毒副反应加以评估、预防及治疗。结果:80例患者接受6个周期DICE方案化疗后,总体有效率为56.3%,完全缓解率为27.5%;T、B细胞NHL有效率分别为48.0%、60.0%,完全缓解率为16.0%、32.7%(P>0.05);经DICE方案治疗的患者出现骨髓抑制、消化系统反应、脱发以及电解质紊乱发生率增高,经过治疗均恢复,无治疗相关死亡。结论:DICE方案治疗难治和复发性NHL有效。

超低剂量地西他滨和环孢素对低危及中危-1型骨髓增生异常综合征的临床疗效比较

目的:比较地西他滨与环孢素治疗低危及中危-1型骨髓增生异常综合征(MDS)的临床疗效和不良反应的差别。方法:回顾性分析上海市同济医院血液内科在近3年中收治的27例中低危MDS患者临床资料;患者分为两组:地西他滨组(11例)和环孢素组(16例),分别采用超低剂量地西他滨和环孢素治疗对其临床疗效和不良反应进行了评估。结果:接受超低剂量地西他滨(DAC)治疗的11例中、低危MDS患者中,血液学改善4例(36.4%);无效7例(63.6%),总有效率36.4%,无效者包括未缓解6例(54.5%),死亡1例(9.1%);1年内死亡3例,总生存(overall survival,OS)率为72.7%,其死亡的主要原因为骨髓抑制及感染。接受环孢素(CsA)治疗的16例患者中,获得血液学改善10例(62.5%),无效6例(37.5%),总有效率62.5%,无效者全部为未缓解病例;1年内死亡患者0例,1年的OS值为100%。两组患者治疗期间中性粒细胞、血红蛋白、血小板的变化无统计学差异。结论:地西他滨治疗中低危MDS临床疗效未表明优于环孢素(P=0.252),且感染及骨髓抑制副作用明显,1年总生存率低于环孢素(P=0.027),但本研究病例数少,随访时间短,仍需扩大病例长期随访观察。

阿柔比星联合中剂量阿糖胞苷诱导治疗难治和复发性急性髓样白血病的疗效

目的:探讨阿柔比星(aclacinomycin,Acla)联合中剂量阿糖胞苷(intermediate-dose cytarabine,IDAra-C)治疗难治和复发性急性髓样白血病(acute myeloid leukemia,AML)的疗效和不良反应。方法:26例难治和复发性AML患者接受Acla联合IDAra-C方案进行解救治疗,评估不良反应和疗效。结果:26例患者接受2个周期Acla联合IDAra-C方案的化疗后,12例完全缓解,7例部分缓解,7例无缓解,1例因治疗过程中发生严重感染而死亡。结论:Acla联合IDAra-C方案可作为难治和复发性AML再诱导治疗的一种选择,患者大多耐受良好。

利用siRNA靶向沉默Jeko-1细胞survivin mRNA基因的实验研究

本研究旨在探讨Survivin基因在淋巴瘤细胞中的生物学作用,为将来以Survivin为靶点治疗套细胞淋巴瘤提供实验室证据。体外化学合成针对survivin mRNA基因的siRNA片段,通过DMRIE-C转染Jeko-1细胞,以无关siRNA、未转染的细胞为对照,采用RT-PCR和Western blot方法检测siRNA的抑制效果,利用流式细胞术检测细胞的凋亡率,用CCK-8法检测转染24、48、72 h对细胞增殖的影响。结果表明,与未转染的空白组相比,siRNA转染Jeko-1细胞后24、48、72 h survivin mRNA的相对表达量分别为0.49±0.03、0.38±0.02和0.17±0.02;细胞增殖抑制率分别为(31.2±2.1)%、(43.3±3.4)%和(52.6±2.5)%;细胞凋亡率分别为(6.3±0.5)%、(13.5±1.1)%和(23.6±1.6)%;survivin蛋白表达水平逐步减低。结论:靶向survivin的siRNA能在体外特异性下调目的基因survivin mRNA和蛋白的表达,表现出抑制Jeko-1细胞增殖和促使其凋亡的生物学效应,survivin基因有望成为淋巴瘤治疗的一个药物靶点。

同济96方案序贯治疗Ph染色体阴性成人急性淋巴细胞白血病疗效分析

目的探讨Ph染色体阴性成人急性淋巴细胞白血病（Ph-aALL）的系统序贯治疗方案（同济96方案）的疗效。方法回顾性分析2004年1月至2012年12月收治的95例初治Ph-aALL患者的临床资料，并随访生存期。结果95例Ph-aALL患者总的完全缓解（CR）率为92．6％，7年总体生存（OS）率为（39．3~5．9）％，7年无事件生存（EFS）率为（31．5~5．3）％，中位生存期28个月；多因素COX比例风险回归模型分析，预后差核型组患者的死亡风险是预后良好组的3．380倍（95％CI1．530～7．463，P=0．003），≥2个疗程获得CR者是单疗程获得CR者的3．005倍（95％C11．522～5．933，P=0．002）：Kaplan—Meier法及Log．rank检验分析，〈60岁患者的7年OS率和EFS率明显高于≥60岁患者；单疗程获得CR者的7年OS率和EFS率明显高于〉12个疗程获得CR者；正常核型组和超二倍体核型组患者的2年OS率和EFS率明显高于复杂核型组、t（4；11）组和其他核型组。结论年龄（60岁为界点）、获得CR的疗程数和细胞遗传学成为影响Ph-aALL患者生存的相关因素。同济96方案系统序贯治疗ph-aALL，CR率达到发达国家水平，远期疗效令人满意，可以实现部分Ph-aALL患者的长期生存，减少其复发，改善预后。

1例由原发性骨髓纤维化转化为急性巨核细胞白血病患者骨髓MRI及相关基因的表达变化

目的报告1例我院诊治的由原发性骨髓纤维化转变为急性巨核细胞白血病的病例,并讨论原发性骨髓纤维化与急性巨核细胞白血病在MRI骨髓表现的改变及部分相关基因表达。方法对我院1例由原发性骨髓纤维化转化为急性巨核细胞白血病(AML-M7)的患者在转化前后进行骨髓细胞形态学、遗传学、相关基因检测和髂骨骨髓的MRI检查,并予以化疗。结果患者染色体核型在转化前后均为正常核型;GFI1/GFI1B、VEGF及其受体表达在缓解前后均有明显改变;处于原发性骨髓纤维化阶段时髂骨骨髓在MRI上表现为T1WI及T2WI上的片状低信号,转化为AML-M7后T2WI上表现为散在高信号;患者经IDA+HAE两疗程后缓解。结论原发性骨髓纤维化与AML-M7的骨髓MRI表现有明显的改变,引起该改变的原因与构成骨髓的细胞成分及局部微血管环境的改变有关;转化后的AML-M7生物学特征发生明显改变,经HAE治疗仍可能达到完全缓解。

TCOP联合平阳霉素治疗中高度非霍奇金淋巴瘤的临床研究

目的:探讨TCOP-P(TCOP联合平阳霉素)方案治疗中、高危非霍奇金淋巴瘤的疗效。方法:将66例患者随机分为两组。TCOP-P方案35例(A组)和CHOP方案31例(B组)。每21天重复疗程,全部患者接受6～8个周期治疗。结果:A组完全缓解(CR)、总有效率、3年生存率分别为57.1%、88.5%和73.5%,均明显高于B组(P<0.05);3年复发率和心肌损害率均明显低于B组。结论:TCOP-P方案治疗中高危非霍奇金淋巴瘤疗效明显优于CHOP方案,可以提高完全缓解率、延长生存时间、减少复发率。

地西他滨联合CAG方案治疗老年急性髓系白血病疗效观察

目的比较地西他滨联合CAG方案与标准IA方案治疗老年急性髓系白血病患者的临床疗效及安全性。方法回顾性分析20例接受地西他滨联合CAG方案、23例接受IA方案治疗的初发老年AML患者的临床资料,分别比较两组患者的总反应率（ORR）、总生存率（OS）及不良反应发生率。结果 43例患者的ORR为58.14%,地西他滨联合CAG组及IA组的ORR分别为65%、52.2%,两组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。截至2015年8月31日,16例存活,25例死亡,2例失访,中位随访时间10（1-34）个月,2年OS率为11.63%,两组1年OS率分别为50%、39.13%,差异无统计学意义（P〉0.05）。39例患者出现感染,25例有出血,两组患者在感染发生率、出血发生率差异无统计学意义。两组的红细胞输注量分别为5.35 U、8.30 U,单采血小板输注量分别为1.85 U、3.48 U,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论地西他滨联合CAG方案和IA方案治疗老年AML患者均有较好的疗效,地西他滨联合CAG方案CR率及OR率相对较高。两组治疗副反应相当,但地西他滨联合CAG组骨髓造血恢复较快。

2种CCK-8试剂最佳实验条件比较

在细胞学实验中，MTT（噻唑蓝）比色法常用于细胞毒性、细胞活性和细胞增殖的检测。因MTT法具有简便、经济、安全等特点，而被广泛使用，但其操作较繁琐，需加入二甲基亚砜（DMSO）溶解甲腆颗粒，且往往因溶解不全而对实验结果造成影响，为克服MTT法的不足，近年来出现了另外一些检测试剂，如XTr试剂、MTS试剂，国外研发出了1种新型的检测方法CCK-8（cellcountingkit-8），其原理为活细胞线粒体脱氢酶转化的黄色结晶为高度水溶性，

卷曲螺旋结构域蛋白74B对纤毛生成和细胞周期调控作用研究

背景卷曲螺旋结构域蛋白(CCDC)参与基因转录、细胞凋亡及细胞周期过程,并调控恶性肿瘤细胞的侵袭和转移等多种生物学行为,然而多数CCDC的生物学功能目前尚未明确。目的探讨CCDC74B的细胞定位及对纤毛生成和细胞周期的影响。方法 2013年3—9月通过构建在人视网膜色素上皮(RPE1)中的Tet-On表达系统,实现CCDC74B在细胞内的蛋白表达,然后通过细胞免疫荧光染色观察CCDC74B的细胞定位,通过小干扰RNA(siRNA)转染敲除CCDC74B在RPE1细胞中的表达,分为对照组、siRNA#1组、siRNA#2组,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测CCDC74B mRNA表达水平;采用细胞免疫荧光染色及流式细胞术观察下调CCDC74B表达后纤毛生成情况和对细胞周期分布的影响。结果在正常上皮细胞中,CCDC74B位于中心体,细胞免疫荧光染色示,下调CCDC74B表达后细胞初级纤毛生成。siRNA#1组及siRNA#2组转染后36 h及48 h纤毛生成率分别高于对照组(P<0.05)。RT-PCR法结果显示,siRNA#1组及siRNA#2组均有效抑制了CCDC74B mRNA表达。细胞免疫荧光染色示,下调CCDC74B表达后cyclin A表达减少,提示存在细胞周期停滞;流式细胞术检测示,下调CCDC74B表达后G_1期细胞比例增高,S期及G_2/M期细胞比例减少。结论中心体蛋白CCDC74B在细胞增殖过程中参与对纤毛生成和细胞周期的调控。

《嵌合抗原受体T细胞疗法的免疫相关不良事件管理:ASCO指南》解读

免疫疗法革新了多种癌症的治疗现状。嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T-cell,CAR-T)疗法在血液肿瘤包括白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤等疾病的治疗中取得巨大成功。与传统化疗不同的是,CAR-T疗法有独特的不良反应包括细胞因子释放综合征和中枢神经毒性等。自2021年6月以来我国已经批准两款CD19为靶点的CAR-T细胞产品上市,用于治疗难治复发B细胞淋巴瘤;此外,我国有数百项CAR-T治疗血液肿瘤和实体瘤的临床试验正在开展。随着CAR-T疗法在肿瘤治疗中的应用和相关临床研究日益广泛,其不良反应管理的必要性和重要性日益凸显。美国临床肿瘤学会(American Society of Clinical Oncology,ASCO)于2021年11月推出了首部《嵌合抗原受体T细胞疗法的免疫相关不良事件管理:ASCO指南》。本文将结合临床实践对ASCO指南进行解读,以期为CAR-T疗法不良反应的管理带来更深入的理解。

构建shRNA慢病毒载体抑制U937细胞株VEGFR-1基因的表达

目的构建针对血管内皮生长因子受体1(vascular endothelial growth factor receptor 1,VEGFR-1)基因的siRNA前体表达载体,鉴定其对U937细胞株VEGFR-1基因干扰效率。方法体外设计并合成针对VEGFR-1基因的慢病毒shRNA干扰载体,通过PCR及测序证实载体构建成功。将慢病毒颗粒以最适滴度转染人单核白血病细胞株U937,应用Real-Time PCR、Western印迹法检测抑制效率。结果构建的慢病毒载体的序列通过PCR、测序等鉴定,与设计序列相同。Real-Time PCR检测显示U937细胞干扰组VEGFR-1 mRNA表达率下降75.98%,Western印迹法显示U937细胞干扰组VEGFR-1蛋白表达量较空白载体对照组明显减少。结论构建的shRNA表达载体可在mRNA和蛋白水平上有效抑制U937细胞株VEGFR-1基因的表达。

以骨质破坏为主的儿童恶性淋巴瘤的临床疗效

目的 :探讨以骨质破坏为主的儿童恶性淋巴瘤临床治疗方案和疗效。方法 :6例经病理活检 ,免疫分型和影像学检查后 ,选择化疗方案 ,观察疗效。结果 :6例患儿经CT和MRI检查均有不同程度骨质破坏 ,免疫分型为B型。应用MCP方案化疗后 1例死亡 ,5例持续完全缓解 (CCR)。结论 :以骨质破坏为主的儿童恶性淋巴瘤临床罕见 ,经影像学检查 ,病理活检和免疫分型可早期确诊 ,预后与临床分期有关 。

FA方案巩固强化治疗急性髓系白血病的临床观察

目的探讨氟达拉滨联合中剂量阿糖胞苷即FA方案巩固强化治疗急性髓系白血病(acute myeloidleukemia,AML)的临床疗效及副作用。方法观察组28例AML患者采用FA方案进行巩固强化治疗,氟达拉滨30 mg/m2(1～3 d),静脉滴注,阿糖胞苷2 g/m2,(1～3 d),静脉滴注,阿糖胞苷在氟达拉滨结束后4 h应用。同期对照组10例AML患者采用大剂量阿糖胞苷进行巩固强化治疗,即Ara-C 3 g/m2,q12 h×3 d。结果 FA组28例AML患者CR时间为109～1 735 d,14例患者持续完全缓解(continuous complete remission,CCR)2年以上,(3年)生存率为21.4%,1 300 d(>3年)的生存率为14.3%,与大剂量阿糖胞苷组没有统计学差异。7例患者于CCR后3～47个月复发,复发患者均存在各种不良预后因素,至少处于中高危分级。不良反应主要为骨髓抑制和继发感染,但总体而言骨髓抑制时间较短,非血液毒性较轻,住院时间在3周左右。结论氟达拉滨能提升胞内Ara-CTP浓度,增强抗白血病作用。FA方案多疗程巩固治疗低中危AML,能减少AML复发,提高总体生存率和无病生存率,临床疗效肯定,不良反应较少,值得进一步深入研究。

白血病细胞株K562中HIF1-α的表达及其对下游基因的影响

目的探讨白血病细胞株K562中低氧诱导因子1-α(HIF-1α)表达的增加对下游靶基因的影响及意义。方法氯化钴(CoCl_2)做化学缺氧诱导剂,加入K562细胞培养基,分别培养0、4、8、16 h。Real-Time RT-PCR及Western印迹法分别检测HIF-1αmRNA和蛋白水平的表达。Real-Time RT-PCR检测不同时间HIF-1α下游靶基因VEGF、MDR1/MDR3、survivin、Bcl-2、Caspase-3、Bax等的表达。分析HIF-1α表达的变化对下游基因转录活性的影响和意义。结果随着CoCl_2作用时间的增加,K562细胞HIF-1αmRNA水平表达略有增加,但变化不大(P>0.05),蛋白水平增加明显。下游VEGF、MDR1/MDR3、survivin、Bcl-2转录活性增加(P<0.05),而Bax、Caspase-3表达先增加后减少。结论 CoCl_2主要增加K562细胞株HIF-1α蛋白的表达。HIF-1α蛋白使VEGF、MDR1/MDR3、survivin、Bcl-2等促肿瘤存活基因的转录活性增加,而最终减少了Caspase-3、Bax等促肿瘤细胞凋亡基因的表达。因此,HIF-1α可能是调控白血病进展的关键调节因子。

难治性白血病的细胞遗传学进展

近年来,随着相关基础研究的深入,化学治疗方案的不断改进,急性白血病(AL)的远期疗效有了显著提高[1～3].但仍有部分高危型急性淋巴细胞白血病(ALL)和部分急性髓系白血病(AML),即难治性白血病远期疗效极不理想.

血浆VEGF蛋白含量与儿童急性白血病的临床意义

目的 检测急性白血病患儿外周静脉血浆中血管内皮生长因子(serumvascularendothelialgrowthfactor ,sVEGF)蛋白含量,分析sVEGF含量与儿童急性白血病(acuteleukemia,AL)不同类型、不同疾病状态及临床特征的关系,探讨sVEGF在AL的诊断、预后中的作用。方法 使用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(sandwichenzyme linkedimmunoabsorbentassay ,ELISA)检测2 9例初发AL患儿、6例难治性AL患儿、2 0例缓解后AL患儿及2 0例健康儿童的sVEGF水平,采用t检验或t′检验比较各组之间的差异。检测值与相关临床因素分析采用相关回归分析及SAS统计软件分析。结果 初发组sVEGF水平明显高于缓解组、正常对照组,差别有统计学意义(t′=5 .15 ,7.2 3,P <0 .0 1) ;难治型AL患儿sVEGF水平均值明显高于初发组、缓解组(t′=2 .39,P <0 .0 5 ;t′=4 .94 ,Pρ<0 .0 1)及正常对照组(t′=5 .6 4 ,P <0 .0 1) ,差别具有统计学意义;缓解组与正常对照相比差别无统计学意义(t′=1.6 81,P >0 .0 5 )。此外,sVEGF水平与下列AL危险因素指标呈正相关或统计学意义:①化疗达缓解时间的长短(r=0 .80 3,P <0 .0 1) ;②发病时外周血白细胞数的高低(r =0 .75 6 4 ,P <0 .0 1) ;③髓外浸润(t=2 .15 3,P <0 .0 5 ) ;④血浆LDH水平(t =2 .4 97,P <0 .0 5 )。