内源性芳香烃配体ITE对宫颈癌细胞生物学行为的影响及机制

目的 探讨内源性芳香烃配体2-(1’H-吲哚-3’-羰基)噻唑-4-羧酸甲酯(ITE)对宫颈癌细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法 免疫组化检测芳香烃受体(AhR)在宫颈癌及正常宫颈组织的表达及定位;采用ITE处理宫颈癌细胞,MTS实验检测增殖能力,Transwell实验检测迁移能力,qRT-PCR及Western blot检测AhR及下游基因CYP1A1、CYP1B1 mRNA和蛋白的表达变化,通过RNA-seq技术和生物信息学筛选参与AhR影响宫颈癌细胞增殖、迁移相关基因及相关信号通路;采用siRNA敲减PKN1后,检测宫颈癌细胞增殖及迁移能力,KEGG分析富集的与增殖及迁移相关的通路,Western blot检测ITE处理后PI3K-AKT通路蛋白表达。结果 AhR在宫颈癌组织中表达高于正常宫颈组织,ITE激活AhR及下游基因CYP1A1和CYP1B1且呈剂量和时间依赖性抑制宫颈癌细胞SiHa和CaSki的增殖和迁移能力(P <0.05)。RNA-seq技术和生物信息学筛选显示,经ITE处理后,与宫颈癌增殖、迁移功能密切相关的PKN1表达下调(P <0.05),且Western blot结果显示,SiHa和CaSki宫颈癌细胞系中PKN1蛋白表达在ITE处理后显著降低(P <0.05)。通过敲低细胞PKN1表达后,SiHa和CaSki细胞的增殖及迁移能力显著下降(P <0.05)。KEGG信号通路富集分析结果显示,差异表达基因相关的信号通路主要集中在PI3K-AKT信号通路。PI3KAKT通路抑制剂LY294002可阻断ITE诱导的P-AKT水平的增加(P <0.05),并逆转ITE对宫颈癌细胞增殖及迁移的抑制作用(P <0.05)。结论 内源性芳香烃配ITE可以抑制宫颈癌细胞增殖和侵袭能力,可能与下调PKN1及激活PI3K-AKT通路有关。

芳香烃受体(AhR)内源性配体ITE对胎盘滋养层细胞的增殖抑制作用及其机制

目的研究芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)的内源性配体2-(1′H-吲哚-3′-羰基)噻唑-4-羧酸甲酯(ITE)对胎盘滋养层细胞增殖的影响及其机制。方法用免疫组织化学及Western blot检测AhR在早期绒毛和晚期胎盘组织中的表达,利用人胎盘滋养层细胞系JEG-3和JAR作为细胞模型研究ITE对胎盘滋养层细胞增殖的影响。结果 AhR主要分布于人胎盘合体滋养层细胞的胞质中,并且晚期胎盘组织中AhR蛋白的表达水平高于早期绒毛组织(P<0.05)。AhR蛋白质在JEG-3中表达较高,而在JAR中几乎检测不到。ITE可诱导JEG-3细胞中AhR下游靶基因细胞色素P4501A1(CYP1A1)mRNA的表达,该诱导作用具有剂量和时间依赖性。同时,ITE使JEG-3细胞滞留于细胞周期的S期,进而抑制细胞的增殖。结论 ITE通过激活AhR信号通路抑制胎盘滋养层细胞的增殖,该抑制作用主要通过调节细胞周期的改变来实现。

Tie2基因过表达对单核细胞功能的影响

目的:探讨过表达Tie2基因后单核细胞功能的变化及对内皮细胞增殖、迁移、小管形成的影响,初步研究TEMs(Tie2-expressing monocytes)促血管生成的机制。方法:建立过表达Tie2单核细胞系,荧光倒置显微镜下观察U937细胞的感染情况,RT-PCR、Western blot分别检测感染后U937细胞Tie2 mRNA和蛋白水平的表达情况;实时定量PCR检测感染后空载组NC-L.V-U937和实验组TEK-L.V-U937细胞mRNA水平表达的差异;ELISA检测NC-L.V-U937和TEK-L.V-U937细胞上清中细胞因子分泌的异同;增殖、迁移、小管形成实验分别观察TEK-L.V-U937细胞对内皮细胞增殖、迁移、小管形成的影响。结果:首次建立了转染Tie2基因的单核细胞系;RT-PCR及Western blot结果显示,与空载组NC-L.V-U937细胞相比,实验组TEK-L.V-U937细胞在mRNA和蛋白水平Tie2的表达显著增加,而NC-L.V-U937细胞几乎不表达Tie2;Real time-PCR结果显示,TEK-L.V-U937细胞IL-8的表达较空载组显著增加(P<0.01),IL-10的表达也有所上升(P>0.05);与空载组相比,TEK-L.V-U937细胞IL-8蛋白分泌明显增多(P<0.05),VEGFA蛋白分泌量也有上升的趋势(P>0.05),但两组细胞几乎都无EGF的分泌;TEK-L.V-U937的条件培养基刺激内皮细胞形成的小管数较多,IL-8中和抗体能抑制内皮小管的形成;NC-L.V-U937、TEK-L.V-U937饥饿培养上清对内皮细胞的迁移作用不明显(P>0.05);增殖的第3天,与空载组相比,TEK-L.VU937的条件培养基能显著地引起内皮细胞的增殖(P<0.05)。结论:过表达Tie2基因后显著地增加U937单核细胞系IL-8的表达,并进一步促进了内皮细胞的增殖与小管形成。

MTA3通过β-hCG调控上皮性卵巢癌侵袭转移的机制研究

目的探讨上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)转移相关基因3(metastasis associated gene 3,MTA3)的表达及其与肿瘤侵袭转移的关系。方法收集晚期(FIGOⅢ-Ⅳ期)EOC术中冰冻标本(8例)及石蜡标本(21例),qRT-PCR和IHC检测卵巢部位肿瘤组织和转移瘤组织中MTA3的表达;Transwell细胞迁移实验观察下调MTA3、下调β-hCG、同时下调MTA3和β-hCG的EOC细胞株(SKOV3和ES-2)体外迁移力的变化。EOC细胞体外分别转染50、100、200 nmol/L siRNA-MTA3,qRT-PCR检测分析MTA3和β-hCG的表达相关性;qRT-PCR及Western印迹法检测分析下调MTA3对β-hCG以及上皮间质转化(EMT)标记物E-cadherin、N-cadherin表达的调控作用。结果qRT-PCR、IHC示EOC转移瘤组织中MTA3的表达显著低于卵巢部位肿瘤组织(P<0.05);Transwell细胞迁移实验示下调MTA3显著增强了EOC细胞的迁移能力(P<0.001),下调β-hCG显著降低了EOC细胞的迁移能力(P<0.001),下调MTA3下调β-hCG显著降低了EOC细胞的迁移能力(P<0.001);qRT-PCR示MTA3与β-hCG的表达呈显著负相关(P<0.05);qRT-PCR、Western印迹法示MTA3下调时,β-hCG和N-cadherin的表达显著上调,而Ecadherin的表达则显著下调。结论 MTA3可能通过β-hCG干预EM T进程,进而调控上皮性卵巢癌侵袭转移。

中国细胞重编程和多能干细胞研究进展

近几十年是干细胞领域飞速发展的重要时期。随着中国经济实力的发展壮大,科研实力也在稳步增强,干细胞研究领域达到了国际并跑甚至领跑的水平。本文从体细胞核移植、诱导多能干细胞、单倍体多能干细胞和胚胎早期发育研究4个方面,对中国细胞重编程和干细胞领域的研究进展进行了历史性回顾,总结了中国科学家在相关领域所取得的重要科研成果。随着单细胞测序技术的发展,各种发育过程将实现更为深入的解读,干细胞的临床应用在中国也会大放异彩。

Wnt信号通路与子宫内膜癌研究进展

Wnt信号通路是一条复杂而保守的信号通路,由一系列相互作用的蛋白组成,作为细胞间信号转导途径之一,调控细胞增殖、分化、黏附、运动等,在胚胎发育、组织修复等过程中发挥重要作用。Wnt信号通路的异常激活可引起细胞异常增殖、分化而导致肿瘤的发生。此外,Wnt信号通路也是诱导肿瘤细胞发生上皮间充质转化(EMT)过程的关键通路之一,从而影响肿瘤的进展和转移。本文就Wnt信号通路与子宫内膜癌发生和进展的研究情况做一综述,为未来子宫内膜癌的治疗提供理论参考。

子宫内膜癌中DNA双链断裂修复的研究进展

基因组不稳定是癌症的特征之一,而细胞DNA损伤应答及其修复机制异常是导致基因组不稳定的重要原因。所有类型的DNA损伤中,DNA双链断裂是最严重的一种,DNA双链断裂修复机制与多种肿瘤的发生发展和治疗密切关联,现就子宫内膜癌中的DNA双链断裂修复研究进展做一综述,以期为未来靶向DNA修复通路的研究和治疗提供理论参考。

基于生物信息学方法分析MUC1基因在卵巢癌中的表达及意义

目的探索黏蛋白1(MUC1)在卵巢癌中的表达及其预后和靶向治疗价值。方法联合多数据库分析MUC1在卵巢癌中的表达水平;绘制Kaplan-Meier生存曲线分析MUC1对卵巢癌患者预后的影响;应用LinkedOmics数据库寻找MUC1共表达基因及其上游miRNA,进行功能富集分析;利用CMap分析寻找可以抑制MUC1表达的小分子药物。结果多数据库证实MUC1在卵巢癌中表达明显升高;Kaplan-Meier生存分析显示MUC1高表达组患者的生存时间明显短于低表达组;LinkedOmics数据库揭示MUC1与肿瘤免疫过程密切相关,并且可能通过多种致癌通路加速恶性进程。最后,CMap分析找到了对MUC1具有负性调控作用的小分子药物。结论MUC1在卵巢癌中异常高表达,且与卵巢癌患者预后相关。

胎盘11β-HSD2在子代成年后高血压病发生中的作用

胎盘是介导母体与胎儿血氧、营养物质及代谢物传递的一个重要器官。根据DOHaD理论,胎儿宫内生长环境的变化会影响胎儿的发育,导致子代成年后罹患高血压病等风险增加。大量研究显示,胎盘11β-羟类固醇脱氢酶(11β-HSD2)能有效地将母体糖皮质激素在通往胎儿的过程中灭活,使胎儿免受糖皮质暴露。因此,胎盘11β-HSD2水平降低会引起胎儿宫内糖皮质激素过度暴露,导致子代成年后发生高血压病的风险显著增高。本文拟阐述胎盘11β-HSD2在胎盘中的结构和功能及其在子代成年后高血压病发生机制中的作用。深入了解胎盘11β-HSD2的变化与子代高血压病之间的关系对研究胎盘功能及代谢、产前诊断、胎源性成人疾病防治等具有重要意义。

大麻对生殖系统及孕期的影响

大麻是世界上滥用最多的毒品之一,其中最主要的精神活性物质是(-)-Δ9-四氢大麻酚(THC)。大麻影响人体多系统功能,并与多种疾病相关。研究普遍认为,吸大麻所造成的生殖系统损伤主要是由THC造成的。部分妇女在妊娠期间吸大麻,根据DOHa D理论,胎儿宫内生长环境的变化会影响胎儿的发育,甚至造成一系列疾病的发生。本文就大麻功能、对生殖系统影响,以及孕期暴露于大麻环境对孕妇及胎儿所造成的危害进行综述。

宫颈脱落细胞蜡块在宫颈病变初筛中的作用

目的探索价格低廉、制片简便且可长期保存的宫颈脱落细胞蜡块制片在宫颈病变初筛中的临床意义。方法收集宫颈病理诊断与新柏氏液基细胞学技术(thinprep cytologic test,TCT)诊断相符的TCT剩余样本,分为未见上皮内病变或恶性细胞(negative for intraepithelial lesion or malignancy,NILM)、低级别鳞状上皮内病变(lowgrade squamous intraepithelial lesion,LSIL)、高级别鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)及鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma of cervix,SCC)各30例,将同一样本分别进行TCT制片及细胞蜡块制片,H-E染色法、免疫组织化学法(mmunohistochemistry,IHC)分别检测Ki-67、P16INK4的表达,分析细胞蜡块制片对比TCT制片在宫颈病变初筛中的临床意义。结果宫颈脱落细胞蜡块制作的成功率约90. 8%,H-E染色病理阅片满意度不差于TCT制片; IHC检测Ki-67、P16INK4的表达与TCT制片差异无统计学意义(P>0. 05)。结论宫颈脱落细胞蜡块制片用于宫颈病变初筛的技术方法具有临床可行性,结合其优势可考虑替代TCT制片在临床推广。

我国生物样本库运营规划现状

目的评估我国生物样本库的运营规划现状。方法对国内63个主要生物样本库展开问卷调查。问卷内容包括生物样本库基本信息、运营规划、样本利用率、用户/客户群体、市场推广/广告、成本回收和业绩指标等6个类别,对6个类别的调查数据进行描述性分析。结果 63个生物样本库中,96.8%(61/63)属于学术机构或公立医院;19.0%(12/63)已有运营规划,39.7%(25/63)正在筹备运营规划,41.3%(26/63)尚无运营规划;85.0%(34/40)实际利用率低于20%,且97.5%(39/40)低于目标利用率;88.6%(1084/1223)的样本仅用于样本库或所属机构内部使用,不对外共享。结论本次调查结果初步反映,我国生物样本库运营规划情况不容乐观,样本实际利用率较低,且普遍低于其目标利用率,对外共享不足,未来应进一步加强国内生物样本库的合作和共享。

GPR30与AMF正向反馈调控促进子宫内膜癌进展的机制研究

目的:探讨子宫内膜癌(EC)中G蛋白偶联跨膜受体30(GPR30)与自分泌移动因子(AMF)正向反馈的调控机制。方法:免疫组化和免疫荧光法检测EC患者子宫内膜组织中AMF和GPR30的表达情况。Western blot法检测雌激素及GPR30特异激动剂G1对RL95-2细胞、KLE细胞及SPEC-2细胞AMF分泌的调控。使用shRNA干扰、qRT-PCR、Western blot及细胞免疫荧光验证雌激素膜受体GPR30介导的AMF表达和分泌。qRT-PCR和Western blot法检测AMF刺激前后细胞GPR30的表达情况。使用信号通路蛋白芯片筛选AMF表达下调前后G蛋白相关信号通路变化,并通过Western blot验证。结果:AMF和GPR30在内膜癌组织中呈高表达,且两者表达水平呈正相关。雌激素刺激后,子宫内膜癌细胞分泌的AMF均显著增多,且与雌激素浓度呈正相关。GPR30特异激动剂G1上调了AMF的分泌。干扰GPR30表达致AMF的表达和分泌下降。外源性AMF刺激可上调GPR30 mRNA及蛋白水平。AMF表达下调后MAPK-ERK信号通路明显受到抑制,同时阻断MAPK-ERK信号通路可消减AMF对GPR30的上调作用。结论:内膜癌细胞中雌激素通过GPR30能显著上调AMF的表达及分泌; AMF可激活MAPK信号通路正向反馈调控GPR30表达。E2-GPR30-AMF轴为内膜癌雌激素致瘤理论提供重要补充,进而为寻找能阻断雌激素作用靶点关键因子的分子靶向治疗提供可靠的实验依据。

肠道细菌与癌症关系的研究进展

人类与大量细菌、真菌和病毒共同生存、进化了数百万年,已初步从分子水平了解了极少数特定细菌与癌症之间的病原学关系。二代测序技术的逐步成熟,将进一步推动对微生物尤其是肠道细菌的深入研究,从而解析细菌与癌症之间的分类学和代谢组学关系。本文主要综述了肿瘤组织及其周边微环境中的细菌以直接和(或)免疫调节方式介导肿瘤发生发展的机制。

复发性流产患者胎盘绒毛组织中差异表达蛋白的蛋白质组学分析

目的通过蛋白质组学及生物信息学分析等技术手段,探索复发性流产(recurrent spontaneous abortion, RSA)的发病机制。方法对RSA组和正常妊娠组的胎盘绒毛组织进行蛋白组学分析,鉴定二者中差异表达的蛋白,同时对这些差异表达的蛋白进行基因相互作用(KEGG)富集分析、信号网络分析(ingenuity pathway analysis, IPA)、蛋白互作(protein-protein interaction, PPI)分析等,找出富集通路。通过PPI网站及cytoscape软件,从这些差异蛋白中找出了一些枢纽蛋白,将得分前20的枢纽蛋白和富集最明显KEGG富集通路进行匹配,取它们的交集,从3个通路里分别挑选出对应的3个蛋白,最后用Western印迹法对这3个蛋白进行验证。结果在两组绒毛组织中总共鉴定出了6 438种蛋白质,其中有342个在两组绒毛组织中是差异表达的,共208个上调,134个下调。关于差异表达蛋白的KEGG富集分析显示,上调的蛋白富集最明显的通路为补体和凝血系统,而下调的蛋白富集最明显的通路为核糖体通路,这3个通路对应的枢纽蛋白分别为补体C3、抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)、线粒体核糖体蛋白S7(MRPS7)。对这3个蛋白进行的Western印迹法结果显示,MRPS7在RSA组绒毛组织中下调,补体C3、AT-Ⅲ在RSA组中上调,这一结果与蛋白组学检测的结果一致。结论在RSA胎盘绒毛组织中存在补体系统和凝血系统的上调以及核糖体通路的下调,表明补体系统、凝血系统和核糖体通路的失调可能是导致RSA的重要原因之一。

肿瘤来源胞外囊泡在肿瘤微环境中的作用

肿瘤来源胞外囊泡(CCEVs)是肿瘤细胞产生并释放到胞外的脂质双层囊泡,内含多种脂质、蛋白质、RNA等物质,与肿瘤微环境(TME)中的肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)、免疫细胞、内皮细胞及胞外间质等进行信息交换,从而影响肿瘤进展。本文根据近年有关CCEVs的研究,总结了CCEVs在TME中的作用,即:CCEVs通过所携带的遗传物质和活性分子作用于TME中的各种细胞,促进肿瘤增殖、侵袭转移、血管新生、胞外间质重塑及调控肿瘤免疫反应。基于CCEVs在TME和肿瘤进展中的作用及自身分泌的特异性,CCEVs或将成为肿瘤分子诊断的有效生物标志物和肿瘤靶向治疗的新靶点。

胰岛素样生长因子系统在胎儿生长发育中的作用

胰岛素样生长因子(insulin-like growth factors,IGFs)作为一类多功能的促生长调节因子,在细胞的增殖、分裂以及个体的生长、发育中具有重要的促进作用。IGFs分为1型和2型,主要通过与IGF-1受体结合,参与调控妊娠过程中滋养细胞侵袭、物质转运、胎盘血管重塑以及胎儿生长发育等一系列重要生理过程。其中,IGF-1、IGF-2及其相关受体的表达和功能异常可导致胎盘功能不全及胎儿功能生长受限。深入了解IGFs与胎儿生长发育之间的关系对研究胎盘功能代谢、物质转运、胎儿生长发育等具有重要意义。

2000年至2009年我国剖宫产率和剖宫产指征的变化

目的了解2000年至2009年10年间国内不同等级、不同地区医院剖宫产率及主要剖宫产指征的变化情况。方法检索万方数据库和中国知网全文数据库中关于2000年至2009年间剖宫产率及剖宫产指征变化的文献，用Cochran-Armitage法对剖宫产率进行趋势性检验分析。应用卡方检验分析不同等级医院和不同地区医院间各年剖宫产率之间的差异。结果共纳入文献49篇。2000年至2009年间剖宫产率呈持续上升趋势（Z=-20．8267，P〈O．01），2000年剖宫产率为32．1％（10353／32258），2009年最高，达52．5％（3674／6992）。2000年至2008年问，一级甲等医院平均剖宫产率为45．7％（3754／8214），高于三级甲等医院的34．5％（25015／72507）和二级乙等医院的32。3％（28140／87121），差异均有统计学意义（P〈0．05）。2003年至2008年间，除三级甲等医院的剖宫产率轻微下降外，其他级别医院的剖宫产率均呈上升趋势。2000年至2007年东北地区平均剖宫产率为58．6％（4982／8502），高于其他各地区，而华中和华南地区的平均剖宫产率分别为27．5％（12264／44595）和33．0％（23239／70421），低于其他各地区，差异均有统计学意义（P〈0．01）。社会因素剖宫产的比例逐年上升，由2000年的11．3％（1170／10353）上升到2008年的27．1％（2094／7726），自2004年以后始终保持在20：0％（5159／24691）以上，并逐渐替代难产，成为剖宫产的主要指征。瘢痕子宫的比例由2000年的6．7％（694／10353）上升到2009年的12．5％（459／3674），总体呈上升趋势。结论我国剖宫产率上升迅速，剖宫产指征发生较大变化，需要根据这些特点，开展针对性措施予以控制。

芳香烃受体(AHR)在胎盘生成中的作用

胎盘是连接母体与胎儿的重要器官,在维持正常的妊娠过程中发挥着重要的作用。胎盘的结构和功能异常不仅易引发妊娠期高血压和糖尿病等妊娠并发症,还易导致早产、胎儿宫内生长受限(intrauterine growth retardation,IUGR)、流产等不良妊娠结局。芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AHR)作为一种配体激活性转录蛋白,参与了生殖调控、免疫功能调节、血管重塑等一系列重要的生理活动。AHR与滋养细胞的增殖和凋亡密切相关,并且具有调节滋养细胞细胞周期的作用。AHR在胎盘血管的生成及血流量的调节中也发挥着重要的作用,它通过调节促血管生成因子与血管生成抑制因子的平衡,参与胎盘血管的正常发育生长;同时AHR还很可能在胎盘的生长发育中介导了胎盘血管的生成以及滋养细胞的侵袭能力;AHR表达异常直接导致了相关妊娠期疾病的发生。

外泌体在子痫前期发病机理中的研究进展

外泌体(exosome)是由多种细胞分泌的膜性纳米囊泡,携带蛋白、m RNA、mi RNA和脂质等内含物,通过靶细胞传递内含物,介导细胞与细胞之间的通讯。孕妇血浆中由胎盘释放的外泌体浓度是未孕女性的50倍,子痫前期患者体内外泌体的蛋白和mi RNA的表达水平发生了变化,使母体滋养细胞侵袭能力不足、降低内皮细胞的功能和血管生成能力,导致子痫前期等病理性妊娠。所以孕妇血浆中外泌体表达谱的改变可应用于胎盘功能紊乱的临床诊断。