应用酶联免疫法检测组织工程骨牛血清白蛋白残余量的实验研究

目的检测常规体外构建的组织工程骨中牛血清白蛋白残余量,并探讨减少其残留量的方法。方法体外分离培养人骨髓基质干细胞,取第2代细胞(P2)接种于完全脱钙骨支架材料并成骨诱导培养2周,体外构建组织工程骨。成骨诱导液为含10%胎牛血清的条件培养液,并于检测前1天更换为无血清的条件培养液。待测组织工程骨先经1:100(v:v)生理盐水浸洗3次,然后加入磷酸盐缓冲液(PBS),37℃振荡浸提24h,获取浸提液。同法获取未接种细胞的单纯支架材料的浸提液作为对照组。采用酶联免疫法检测样品浸提液中牛血清白蛋白的残余量,比较两者牛血清白蛋白残余量的差异。结果经生理盐水洗涤3次后,洗涤液中的牛血清白蛋白含量明显降低。酶联免疫法测定的组织工程骨与单纯支架材料的牛血清白蛋白残余量分别为(15.57±5.82)ng和(14.85±5.06)ng,单位重量的牛血清白蛋白残余量分别为(0.254±0.088)ng/mg和(0.306±0.079)ng/mg,两组相比均无显著性差异(P>0.05,n=10)。结论酶联免疫法适用于组织工程骨中牛血清白蛋白残余量的检测。因为支架材料较细胞更易吸附牛血清白蛋白,现有条件下构建的组织工程骨牛血清白蛋白残余量仍然较高,需要继续探索降低其残余含量的新方法。

组织工程骨的牛血清白蛋白残余量检测

目的检测体外构建的组织工程骨中的牛血清白蛋白（Bovine serum albumin,BSA）残余量,并探讨减少残余量的方法。方法体外分离培养hBMSCs,将第2代细胞消化、离心、洗涤3次,获取细胞洗涤液样品。取第2代h BMSCs接种于β-TCP支架材料,体外成骨诱导2周,构建组织工程骨。生理盐水浸洗3次,获取洗涤液样品。然后加入PBS,37℃振荡浸提24h,获取浸提液样品。同法获取未接种细胞的单纯支架材料的浸提液样品作为对照。采用酶联免疫法检测洗涤液与组织工程骨样品浸提液中BSA的残余量,观察洗涤次数与洗涤液中BSA含量的变化关系。结果随洗涤次数增多,洗涤液与浸提液中的BSA含量明显降低。酶联免疫法测定的组织工程骨与单纯支架材料浸提液中BSA残余量分别为（19.54±6.70）ng和（15.67±5.49）ng,单位重量的残余量分别为（0.656±0.213）ng/mg和（0.796±0.205）ng/mg,两组无显著差异（P〉0.05）。结论酶联免疫法适用于组织工程骨中BSA残余量的检测。因为支架材料较细胞更易吸附BSA,现有条件下构建的组织工程骨BSA残余量仍然较高,需要进一步探索降低残余量的方法 。

mTOR及其信号通路与视神经再生的关系

雷帕霉素靶蛋白(mTOR)是一种丝/苏氨酸蛋白激酶,已证实其在调节细胞生长、增殖和调控细胞周期等多个方面起到重要作用。mTOR信号通路的活化与视神经损伤后轴突再生的发生密切相关,可能是视神经损伤临床治疗的一个重要的潜在靶点。本文就mTOR信号通路与视神经再生的关系进行综述。

成骨分化的人脐带血间充质干细胞免疫原性研究

目的研究经成骨诱导分化的人脐带血间充质干细胞(umbilical cord blood derived mesenchymal stem cells,UCB-MSCs)表面免疫分子的表达以及体外调节T淋巴细胞增殖反应的功能。方法取自愿捐赠的脐静脉血分离获取UCB-MSCs,体外扩增至第3代,行成骨诱导培养2周。流式细胞仪检测成骨诱导分化前后UCB-MSCs免疫分子人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)Ⅰ类分子、HLA-Ⅱ类分子的表达。首先以成骨分化的UCB-MSCs刺激异体T淋巴细胞增殖,未诱导的UCB-MSCs设为对照。共设立UCB-MSCs 1×102、1×103、1×104和1×105个/孔4种不同细胞密度,分为IFN-γ预处理组和未处理组。然后以植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)刺激T淋巴细胞增殖,分别加入上述不同数量级的未诱导与成骨诱导分化的UCB-MSCs,观察对T淋巴细胞增殖的影响,并同时加入IL-2检测对UCB-MSCs抑制T淋巴细胞增殖作用的逆转。最后建立Transwell共培养体系,研究成骨诱导分化的UCB-MSCs对混合T淋巴细胞反应的抑制作用是否为接触抑制性。结果未诱导的UCB-MSCs高表达HLA-Ⅰ类分子,不表达HLA-Ⅱ类分子;经成骨诱导分化的UCB-MSCs HLA-Ⅱ类分子的阳性表达率升高。未诱导的UCB-MSCs对异体T淋巴细胞增殖有显著抑制效果,而成骨诱导分化的UCB-MSCs对T淋巴细胞增殖的抑制作用明显减弱(且无细胞数量依赖性),并且在IFN-γ作用后,有刺激T淋巴细胞增殖的效果。密度为1×104个/孔及1×105个/孔时未诱导的UCB-MSCs可抑制PHA刺激的T淋巴细胞增殖,但加入IL-2后该抑制作用被逆转;而成骨诱导分化的UCB-MSCs则不具有抑制T淋巴细胞增殖的作用。Transwell共培养结果表明,与直接接触培养相似,未诱导的UCB-MSCs可显著抑制T淋巴细胞增殖反应,而成骨诱导分化的UCB-MSCs抑制能力明显减弱。结论经成骨诱导分化的UCB-MSCs抑制混合T淋巴细胞增殖反应的效果明显低于未经成骨诱导分化的UCB-MSCs,不适合作为骨组织工程或细胞治疗的同种异体种子细胞来源。

拒绝夏日的“体味”

夏天是一个容易出汗的季节。有时挤上地铁时,各种各样的气味从四面八方涌来,熏得人窒息,汗味、烟味、姑娘们身上的香水味令人头晕目眩。狐臭汗臭有不同夏天在人际交往中最常见的气味就是汗味,狐臭患者一到这个季节就藏不住了,但也有的人坚称自己这不是狐臭,只是汗味。普通的汗臭味与狐臭有时会相互混淆,难以区分。

大油头,别怪头发

头皮爱出油,容易扁塌,毁造型……有人说“只要洗头速度够快,头油就追不上我”,但头发洗完之后可能坚持不到一天又油了,这是很多人都会遇到的心塞难题。这该怪头发吗?头发为什么会“出油”所谓头发油,并不是头发出油,而是头皮出油,确切地说是皮脂腺出油。