噪声性耳聋：基础研究进展和展望

噪声性耳聋是一种十分常见的感音性聋。其发病原因是噪声引起耳蜗内组织机械损伤,进而引起一系列组织生物、病理及分子改变。这些因素相互作用造成以毛细胞为主的耳蜗组织损伤,进而导致听觉敏感度及分辨力下降,并可引发耳鸣、声耐受能力下降等症状,极大地影响患者的生活质量。因此,噪声性耳聋的防治具有十分重要的临床及社会意义。近年来,噪声性耳聋研究领域出现了许多令人瞩目的新进展,这些进展对认识噪声性耳聋的发病机制和寻找有效的防治方法具有十分重要的意义,并为今后的研究指明了方向,本文对此进行简要综述。

海人酸致鸡耳蜗传入神经元迟发性死亡

目的 观察不同剂量谷氨酸(Glu)类似物海人酸(kainic acid,KA)导致鸡基底乳头(以下称为叫“耳蜗”)传入神经元迟发性神经元死亡(delayed neuron death,DND)及相应的耳蜗电生理改变,探讨兴奋性神经元死亡的发生规律。方法 34只成年来亨鸡分3组。第一组经左耳蜗鼓阶灌注高剂量KA(5 mM,KA-H组)后测量不同时点的CAP、CM和DPOAE,并观察耳蜗显微和超微结构变化;第二组灌注低剂量KA(0.3mM,KA-L组)后只观察各时点耳蜗形态变化;第三组灌注Hank氏液(HBSS)作对照。结果 ①KA灌注后,KA-H和KA-L组高毛细胞(THC)下方的传入树突均迅速水肿,CAP振幅大幅下降;矮毛细胞(SHC)的形态不受影响。②KA灌注后,KA-H组大量传入神经元于2～4周后发生DND并有不可逆听力损伤,但THC长期存活;面KA-L组传入神经元数目无明显减少,且神经元和髓鞘病变在1周后开始恢复。结论 ①KA以剂量依赖性方式选择性损伤鸡耳蜗传入神经元;局部高浓度可造成DND,其发生的时间在KA处理2～4周后;②鸡耳蜗THC可在没有传入突触联系的情况下长期存活,这可能用作实验模型;③为推测人类耳蜗兴奋性损伤及其机理,有必要用生理性递质Glu对哺乳动物进行在体实验。

顺铂耳毒性小鼠模型的建立

【目的】建立一种可靠的、重复性好的顺铂耳毒性小鼠模型,为进一步从分子学和基因方面研究顺铂的耳毒性机制提供可能。【方法】20只听力正常的健康小鼠,随机平分为2组,A组小鼠先行200 mg/kg呋塞米腹腔注射,1 h后腹腔注射1.0 mg/kg顺铂;B组小鼠先行200 mg/kg呋塞米腹腔注射,1 h后腹腔注射0.5 mg/kg顺铂。6只同年龄小鼠做正常对照组。治疗后第10天所有小鼠行听觉脑干电反应(ABR)测听和畸变产物耳声发射(DPOAE)检查,之后取双侧耳蜗,分别行全耳蜗基底膜铺片和环氧树脂包埋半薄切片,观察内外毛细胞、血管纹和螺旋神经节细胞等的病变。【结果】2组小鼠治疗后各频率ABR平均听阈都提高,DPOAE值都降低,其中A组的ABR平均听阈显著提高,各频率振幅明显降低,高频区DPOAE消失;B组的ABR平均听阈稍提高,高频(16、20、32 kHz)振幅轻度降低,低频(4、8、12 kHz)振幅无变化,高频DPOAE稍下降,低频DPOAE无变化。全耳蜗基底膜铺片结果 A组蜗底外毛细胞全部破坏,蜗尖大部分外毛细胞破坏;B组仅蜗底外毛细胞大部分被破坏,蜗尖外毛细胞形态和数目接近正常,两组内毛细胞均无明显减少。半薄切片结果显示A、B两组小鼠的耳蜗血管纹和螺旋神经节细胞的形态和数目都接近正常。【结论】1.0 mg/kg顺铂联合200 mg/kg呋塞米单次腹腔注射法可引起小鼠内耳组织显著损伤,主要表现为耳蜗外毛细胞损失。

大鼠耳蜗器官培养及其组织学检查技术

目的探讨大鼠耳蜗器官体外培养的方法和观察毛细胞、神经纤维及螺旋神经节细胞的组织学检查技术。方法将出生3天的SASCO Sprague Dawley大鼠耳蜗取出平铺培养。应用神经丝免疫组织化学方法对螺旋神经节细胞及神经纤维染色,同时应用鬼笔环肽染色特异性显示耳蜗毛细胞的静纤毛和表皮板。在共聚焦显微镜下应用不同的激发荧光分别显示耳蜗毛细胞、螺旋神经节和神经纤维。结果耳蜗器官经1～3天离体培养,内、外毛细胞生长良好,无衰亡和缺损;神经纤维排列有序;螺旋神经节细胞形态正常。结论本文介绍的耳蜗器官体外培养方法和组织学检查指标,将在常规评估耳蜗毛细胞、螺旋神经节细胞和神经纤维的离体培养损害实验模型中,有一定应用价值。

CBA/CaJ和C57BL/6J小鼠全耳蜗毛细胞随着年龄增长不同损害模式的比较

目的探讨和比较CBA/CaJ与C57BL/6J小鼠全耳蜗毛细胞随着年龄增长不同损害模式与规律。方法选择年龄在6个月、12个月、18个月和24个月的CBA/CaJ和C57BL/6J小鼠各32只,其中每个年龄各8只,全身麻醉下取耳蜗,进行全耳蜗基底膜铺片,将全耳蜗内、外毛细胞计数结果输入计算机并应用耳蜗图软件,按照对应的不同年龄进行两个鼠种耳蜗毛细胞密度对比和统计学分析。结果CBA/CaJ小鼠于12月龄耳蜗顶部外毛细胞开始出现轻度损失,伴随着年龄增加,外毛细胞损失继续扩大,以顶部向中部发展为主,后期内毛细胞也出现损失。从18月龄开始,耳蜗外毛细胞损失与上个年龄组比较均增加显著(P<0.05)。而C57BL/6J小鼠于6月龄耳蜗底部均已出现外、内毛细胞损失,而且以外毛细胞损失为主,此后伴随着年龄增加,毛细胞损失不断扩大,于6月龄开始,耳蜗外、内毛细胞损失与同龄CBA/CaJ小鼠比较均明显增加(P<0.05),12月龄开始与同鼠种上个年龄组比较均明显增加(P<0.05)。结论CBA/CaJ小鼠耳蜗毛细胞损害遵循着从顶部和底部两端开始,向中部延伸,但顶部毛细胞损害比底部严重的病变规律。C57BL/6J小鼠耳蜗毛细胞损害遵循着主要从耳蜗底部开始,逐渐向中部和顶部扩展的病变规律。外毛细胞损害比内毛细胞早。C57BL/6J小鼠毛细胞损害比CBA/CaJ小鼠早。提示两个鼠种均可作为老年性毛细胞凋亡研究动物模型,但以C57BL/6J小鼠模型更适合短期观察研究,两者间所出现的毛细胞变化差别可能与Cdh23基因是否变异和缺失有关。

狼蛛毒素在胆红素诱导的耳神经毒性中作用的实验研究

目的观察狼蛛毒素(psalmotoxin-1)对胆红素诱导的耳蜗组织毒性作用。方法新生3 d的SD大鼠,断头解剖获得耳蜗基底膜离体培养24 h,将耳蜗组织随机分5个组,对照组、50μmol/L胆红素组、100μmol/L胆红素组、100 ng/ml psalmotoxin-1组和100μmol/L胆红素+100 ng/ml psalmotoxin-1组。实验组培养基按各分组浓度,加入相应胆红素和(或)psalmotoxin-1溶液,对照组加入相应体积生理盐水。所有耳蜗样本继续培养24 h后终止,进行组织固定和免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜观察,最后进行统计学分析。结果不同浓度胆红素作用后,50μmol/L胆红素组基底膜螺旋神经节神经元细胞(spiral ganglion neurons,SGNs)开始出现不同程度减少,但耳蜗毛细胞(hair cells,HCs)形态及数量完整;100μmol/L胆红素组耳蜗组织SGNs出现细胞体积明显缩小,伴随细胞核浓缩或碎裂,细胞数目明显减少,HCs出现不同程度损伤,SGNs数目与对照组比较,差异有统计学意义(t=18.89,P<0.0001)。100 ng/ml psalmotoxin-1组基底膜SGNs和HCs形态及数量较对照组均未出现明显改变(P均>0.05);100μmol/L胆红素+100 ng/ml psalmotoxin-1组SGNs形态变化及数量减少较单纯100μmol/L胆红素组明显减轻(t=21.63,P<0.0001)。结论在耳蜗器官培养中,胆红素以剂量依赖性方式损伤新生大鼠耳蜗SGNs和HCs;胆红素对耳蜗SGNs的损伤较HCs发生早,损伤程度重。在耳蜗器官培养中,psalmotoxin-1可减弱胆红素诱导的耳蜗毒性作用。

卡铂引起的灰鼠耳蜗内毛细胞缺损模式

目的:研究卡铂损害灰鼠耳蜗内毛细胞(IHCs)的模式,即IHCs何时出现缺损、给药后不同时间基底膜上IHCs缺损的范围、基底膜上IHCs最大缺损部位以及致绝大部分IHCs缺损所需时间等。方法:对成年灰鼠采用一次性卡铂腹腔注射(100mg/kg),给药后不同时间处死动物,常规制备耳蜗铺片和耳蜗图,以定量观察灰鼠耳蜗毛细胞的缺损情况。结果:注射卡铂后从24h～3个月,灰鼠的外毛细胞基本无缺损。IHCs损伤模式的特征:①注射卡铂后24h耳蜗毛细胞完整无损,IHCs从注药后第3天开始出现缺损;②从注射卡铂后3d到3个月期间,IHCs的最大缺损率均出现在第1回和第2回交界处;③IHCs缺损从第1回和第2回交界处开始,范围逐渐向底回和顶回扩展,与顶回相比,底回的IHCs缺损出现早且更严重;④至注射后3个月基底膜上IHCs的缺损呈平坦型。结论:100mg/kg卡铂腹腔注射对各回IHCs的破坏是不均等的,对卡铂的敏感度不一致可能造成了各回IHCs缺损在时间上的差异。

小鼠自然老化过程中耳蜗的糖代谢障碍

应用定量组织化学技术分析了CBA和C57BL小鼠耳蜗中糖元代谢的改变，发现18个月和36个月龄CBA小鼠的毛细胞（HC）和血管纹（SV）中，糖元含量比6周龄CBA正常小鼠明显增高，说明在自然老化CBA小鼠耳蜗中存在糖元储积现象。6周龄C57BL小鼠SV中糖元含量也比6周龄CBA正常小鼠高，但HC中糖元含量在两种小鼠无差异。提示耳蜗糖代谢的改变在自然老化型CBA小鼠不同于耳蜗遗传缺陷型C57BL小鼠。