启东肝癌的早诊早治及筛查效果评价

目的通过启东地区的肝癌筛查实践，探讨在肝癌高发区开展高风险人群肝癌筛检的筛查效果。方法根据中国癌症基金会癌症早诊早治专家委员会制订的方案，对启东地区筛查发现的乙肝表面抗原（HBsAg）阳性者，采用甲胎蛋白（AFP）联合超声检测的方法开展每年2次的诊断性筛查，评估筛查效果的指标为任务完成率、肝癌检出率、早诊率和治疗率。对筛查患者开展随访，随访截至2016年3月31日。采用寿命表法计算观察生存率，并比较反复筛查组和自动就诊组患者的生存率。结果2007年以来，启东地区筛查目标人群38 016人，发现HBsAg阳性者3 703人，阳性率为9.74%。排除初筛时发现的29例肝癌患者，实际随访队列人数为3 674人，共完成诊断性筛查33 199人次，发现肝癌268例，肝癌检出率为1.61%。其中通过反复筛检发现的肝癌186例，检出率为1.12%；早期病例149例，肝癌早诊率为80.11%；186例肝癌患者中，接受治疗167例，治疗率为89.78%。按HBsAg阳性者队列共随访25 452.00人年计，肝癌年均发生率为1 052.96/10万，其中男性和女性分别发生肝癌187和81例，发生率分别为1 488.45/10万和628.46/10万。队列中所有肝癌患者的1、3、5、8年生存率分别为64.55%、40.50%、32.54%和19.65%。反复筛查组患者的1、3、5、8年生存率分别为77.16%、49.04%、38.53%和24.25%；自动就诊组患者的1、3、5、8年生存率分别为36.25%、21.21%、21.21%和0%，两组患者的生存率差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论启东肝癌的筛查实践证实，严格按照专家方案，采用AFP联合超声检测的方法，对肝癌高风险人群开展每年2次的筛查，可以提高肝癌的检出率、早诊率，通过积极的治疗，可以提高患者的生存率，提高肝癌筛查的效果。

泛素结合酶UBE2T基因在肝癌细胞迁移和侵袭中的作用及其临床意义

目的:探讨泛素结合酶E2 T(ubiquitin conjugating enzyme E2 T,UBE2T)在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义,并研究UBE2T基因表达在肝癌细胞迁移和侵袭过程中的作用。方法:采用实时荧光定量PCR法检测54对肝细胞癌及相应癌旁肝组织中UBE2T mRNA的表达水平。应用免疫组织化学法检测233例肝细胞癌组织中UBE2T蛋白的表达水平,并分析UBE2T表达与患者临床病理参数之间的关系。构建含有UBE2T基因序列的pWPXL重组慢病毒载体(pWPXLUBE2T)并将其转染肝癌Hep3B和SMMC-7721细胞系,另一方面将靶向UBE2T基因的shRNA慢病毒载体(GV248-shUBE2T-1和GV248-shUBE2T-2)及阴性对照慢病毒载体(GV248-NC)转染肝癌MHCC-LM3和SK-Hep1细胞系,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法验证UBE2T基因过表达和干扰效率,然后采用Transwell小室法分别检测UBE2T基因过表达和干扰表达对肝癌细胞迁移和侵袭的影响。结果:54对肝细胞癌组织中UBE2T mRNA表达水平明显高于相应癌旁肝组织(P<0.000 1)。在233例肝细胞癌组织中,UBE2T高表达与肝细胞癌的肝内转移有关(P=0.004)。与对照组相比,过表达UBE2T基因能够明显促进肝癌细胞Hep3B和SMMC-7721的迁移与侵袭(P值均<0.01)。与阴性对照组相比,干扰UBE2T基因表达能够明显抑制肝癌细胞MHCCLM3和SK-Hep1的迁移与侵袭(P值均<0.05)。结论:肝细胞癌中UBE2T高表达与肿瘤肝内转移有关,而过表达UBE2T基因可以促进肝癌细胞的迁移和侵袭。

沉默脂肪甘油三酯脂肪酶基因表达可抑制肝细胞癌细胞的增殖、迁移与侵袭

目的:分析肝细胞癌组织及细胞系中脂肪甘油三酯脂肪酶(adipose triglyceride lipase,ATGL)的表达水平,探讨ATGL在肝细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭过程中的作用。方法:采用蛋白质印迹法检测57对肝细胞癌组织和相应癌旁正常肝组织,以及12种肝癌细胞系中ATGL的表达水平。将靶向ATGL基因的shRNA重组慢病毒(GV248-shATGL-1、-2和-3)及其阴性对照慢病毒(GV248-shNC)分别感染肝癌Huh7和MHCC-97L细胞系,然后采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法验证ATGL基因沉默效率。采用CCK-8法和Transwell小室法分别检测ATGL基因沉默对肝癌Huh7和MHCC-97L细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果:57例肝细胞癌患者中,有28例(49%)肝癌组织的ATGL表达水平明显高于其相应癌旁肝组织,16例(28%)肝癌组织的ATGL表达水平低于相应癌旁肝组织,而13例(23%)无明显变化。与阴性对照组相比,沉默ATGL基因表达能够明显抑制肝癌Huh7和MHCC-97L细胞增殖(P值均<0.05),同时细胞迁移和侵袭能力均明显降低(P值均<0.01)。结论:肝细胞癌组织中ATGL相对高表达,而沉默ATGL基因表达可以抑制肝细胞癌Huh7和MHCC-97L细胞的增殖、迁移和侵袭。

CLEC4M在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨C型凝集素域家族4,成员M(C-type lectin domain family 4,member M,CLEC4M)在正常肝、肝硬化、肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织及其配对癌旁肝组织中的表达及其临床意义。方法:利用肿瘤基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)和基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)等数据库,筛选各个肝癌数据库中在HCC组织中表达明显下调的基因。利用GEO数据库分析正常肝、肝硬化及HCC组织中CLEC4M mRNA的表达水平。采用实时定量PCR检测83对HCC组织及其配对癌旁肝组织中CLEC4M mRNA的表达水平。利用肝细胞癌癌基因图谱数据库(Integrative Molecular Analysis of Hepatocellular Carcinoma,HCCDB)分析CLEC4M mRNA在多种肿瘤中的表达情况。分别采用免疫组织化学法检测236对HCC及其配对癌旁肝组织、10例正常肝组织和12例肝硬化组织中CLEC4M蛋白的表达水平;蛋白质印迹法检测8对HCC及其配对癌旁肝组织中CLEC4M蛋白的表达水平;再用Kaplan-Meier法分析癌旁肝组织中CLEC4M表达与患者总生存期之间的关系。结果:对GEO和TCGA数据库的检索结果以及对83对临床样品的检测结果显示,HCC组织中CLEC4M mRNA的表达水平明显低于癌旁肝组织(P值均<0.0001)。对GEO数据库的检索结果显示,CLEC4M mRNA在正常肝、肝硬化及HCC组织中的表达呈逐渐下降的趋势(P<0.05)。免疫组织化学法检测结果显示,236例HCC组织中仅6例为CLEC4M蛋白高表达,而配对癌旁肝组织中有157例为CLEC4M高表达。Kaplan–Meier生存期分析显示,癌旁肝组织中CLEC4M高表达患者的总生存期较CLEC4M低表达者明显延长(P<0.0001)。结论:HCC组织中CLEC4M低表达,而癌旁肝组织中CLEC4M高表达提示患者预后较好。