自建微流控-芯片法检测布鲁氏菌的性能验证及评价

目的采用自建微流控-芯片法检测系统对本实验室于2021年5月至2022年8月期间收集保存的布鲁氏菌阳性菌株、阳性血清、阴性血清进行检测,验证自建系统检测布鲁氏菌核酸的主要性能是否满足相关标准。方法依据CNAS-GL039:2019《分子诊断检验程序性能验证指南》、《实验室自建分子诊断项目基本要求专家共识》、《布鲁菌病诊疗专家共识》相关要求,对自建微流控-芯片法检测系统的符合率、重复性、检出限、交叉反应、抗干扰能力、敏感性及特异性进行验证及评价。结果自建检测系统与经血培养鉴定为布鲁氏菌阳性菌株、体检者阴性标本检测结果的阳性符合率为100%,阴性符合率为100%,总符合率为100%;1.50×10^(8)CFU/mL、500 CFU/mL布鲁氏菌阳性标本重复性检出率均为100%;检出限浓度(1000 copies/mL)企业参考品20次重复检测结果均为阳性;七种交叉反应病原体标本检测中,布鲁氏菌核酸结果均为阴性;在混有干扰物质的弱阳性布鲁氏菌标本检测中,布鲁氏菌核酸结果均为阳性;在布鲁氏菌感染检测中的敏感性和特异性分别为89.88%、95.74%。结论微流控-芯片法检测系统的符合率、重复性、检出限、抗干扰能力、交叉反应、敏感性及特异性性能指标均符合相关标准及检测要求,可用于临床检测工作。

微流控芯片技术在布鲁氏菌检测中的应用

目的建立并评估基于微流控芯片(MC)技术检测布鲁氏菌(简称布氏菌)核酸的方法,以提高布鲁氏病(简称布病)的诊断能力。方法设计MC核酸提取、PCR和DNA反向斑点杂交相结合的检测布氏菌DNA的全自动技术流程。设计微流控全自动核酸检测(MC⁃PCR)与基因测序符合性测试、与实时荧光定量核酸扩增检测(qPCR)、TaqMan探针法检测比较实验;评估MC⁃PCR法检测布氏菌的重复性、准确性、特异性、最低检出限。结果研究组与对照组核酸溶解曲线图纵坐标峰值所对应的横坐标一致,呈现单一的溶解峰,温度相同,表示为相同的扩增产物。核酸不同提取方法之间Ct值差异有统计学意义(P<0.05)。经两两比较,NaI(机提)的Ct值低于AXYGEN、天净沙、济凡、NaI(手提),差异有统计学意义(P<0.05);NaI(机提)的Ct值与全式金、天根、德诺杰亿差异无统计学意义(P>0.05)。基因测序的Kappa值为0.659,与MC⁃PCR具有高度的一致性,MC⁃PCR与基因测序阳性结果符合率100%,总符合率82.5%。准确性:结果符合率为100%;特异性:结果阴性率100%;重复性:结果均可以检出布氏菌;检出限:浓度为825 copies/mL时,MC⁃PCR与qPCR、TaqMan探针法检出率差异有统计学意义(χ^(2)=24.699,P<0.05),经两两比较,MC⁃PCR检出率高于qPCR和TaqMan探针法。精密度:结果均可以检出布氏菌。结论MC⁃PCR检测布氏菌核酸的检测方法安全、快捷、及时、精准,可以应用于临床。这将提高布病诊断率,对布鲁氏菌病的防治起到重要作用。

基于16S rDNA测序技术分析利福平致大鼠肝损伤中肠道菌群变化特征

目的采用16S rDNA测序技术分析利福平(RFP)致大鼠抗结核药物性肝损伤(ADLI)中肠道菌群的变化。方法将24只雄性SD大鼠随机均分为对照组(D0组)、RFP灌胃10 d组(R10组)、RFP灌胃28 d组(R28组)。用随机数字表法每组选取4只大鼠的粪便标本进行16S rDNA测序。结果与D0组比较,R10组和R28组α多样性和β多样性均发生改变(P<0.05),门水平上拟杆菌门(Bacteroidetes)丰度增加,厚壁菌门(Firmicutes)丰度减少(P<0.05);属水平上unclassified_f_Prevotellaceae、特氏菌属(Blautia)、Prevotellaceae_NK3B31_group、Erysipelotrichaceae_uCG-003、Fournierella丰度增加,乳杆菌属(Lactobacillus)、Romboutsia、Ruminococcaceae_uCG-014丰度减少(P<0.05)。结论RFP致大鼠ADLI过程中,肠道菌群数量减少,结构和组成均发生改变,有益菌减少,致病菌增多,但其菌群多样性未见改变。

基于细胞焦亡理论研究白细胞介素-1β与白细胞介素-18在抗结核药物性肝损伤中的临床意义

目的基于细胞焦亡(pyroptosis)理论研究白细胞介素(IL)-1β与IL-18在抗结核药物性肝损伤(ADLI)中的表达及临床意义。方法选取2016年1月至2017年1月于唐山市第四医院接受住院治疗的肺结核初治患者,收集符合ADLI的41患者为病例组,按照年龄、性别、用药方案匹配的原则选取用药后非ADLI(non-ADLI)患者41例为对照组。酶联免疫法(ELISA)检测ADLI组和非ADLI组患者血清IL-1β及IL-18水平,用受试者工作特征曲线下面积(ROC-AUC)评估IL-1β预测ADLI的价值。结果2组患者血清IL-1β水平差异有统计学意义(P<0.05),IL-18水平无统计学差异(P>0.05);IL-1β与天冬氨酸转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)及碱性磷酸酶(ALP)存在正相关(均P<0.05),IL-1β水平预测ADLI的AUC为0.889。结论IL-1β可能是与ADLI发生发展相关的分子标记物,可以成为ADLI诊断的一个新作用靶点。

25(OH)D水平与高血压的相关性研究

目的:探讨扎兰屯市受检人群的25(OH)维生素D[25(OH)D]水平及与高血压病之间的相关性。方法:选取2017年7月至2019年7月就诊于我院的高血压患者和体检者446例(其中男243例,女203例),按照是否患有高血压分为高血压组(246人)和非高血压组(200人)。收集研究对象的一般资料,并且检测25(OH)D水平。结果:高血压组25(OH)D[(8.43±6.48)ng/mL]低于正常对照组[(14.15±11.69)ng/mL](P<0.05),且该地区女性人群血清25(OH)D低于该地区男性水平(P<0.05);多元logistic回归分析发现,25(OH)D缺乏是高血压患病的独立危险因素(OR=3.601,95%CI:1.053-12.652)(P<0.05)。结论:扎兰屯市受检人群普遍存在25(OH)D缺乏且女性缺乏较男性严重;25(OH)D水平与高血压之间存在相关性,是高血压的独立危险因素。

抗结核药物性肝损伤患者外周血基因组DNA甲基化差异的筛查和验证

目的采用基因甲基化芯片技术筛选抗结核药物性肝损伤(anti-tuberculosis drug induced liver injury,ADLI)患者与非肝损伤患者间DNA差异甲基化基因位点。探讨DNA甲基化与ADLI发病机制的关系。方法选取2016年1月至2017年7月间唐山市第四医院治疗的肺结核初治患者共137例,分为ADLI组(n=65)、非ADLI组(n=72)。收集研究对象的临床一般资料及全血标本。选择其中14例(7例ADLI,7例非ADLI)患者,提取全血标本的DNA,利用Illumina 850K芯片技术检测病例组和对照组DNA的差异甲基化情况。对芯片筛选出差异较大的甲基化基因DUSP22、HLA-C,进一步在剩余的65例病例组和58例对照组中采用甲基化特异PCR(MSP)方法验证甲基化水平,并采用荧光定量PCR检测DUSP22、HLA-C基因的m RNA水平。结果共检测853 307个CpG位点,病例组和对照组差异显著的位点共1 012个,其中高甲基化位点254个,低甲基化位点758个,主要位于基因体区。聚类分析结果显示,在细胞黏附、金属离子结合等过程中存在大量甲基化差异基因。病例组与对照组人类双特异性磷酸酶DUSP22基因、人类白细胞抗原HLA-C基因的甲基化率差异均有统计学意义(65. 6%vs 36. 9%、37. 9%vs 58. 5%,P <0. 05),对照组中DUSP22 m RNA表达水平高于病例组,而HLA-C m RNA表达水平低于病例组。结论外周血中DUSP22、HLA-C基因DNA甲基化与ADLI的发生相关。

基于16S rDNA测序技术分析吡嗪酰胺致肝损伤大鼠肠道菌群的变化

目的 采用16S rDNA测序技术检测分析吡嗪酰胺(PZA)致药物性肝损伤(DILI)大鼠肠道菌群的变化。方法 将24只雄性SD大鼠随机均分为对照组(D0)、PZA灌胃10 d组(Z10)和PZA灌胃28 d组(Z28)。采用随机数字表法每组选取4只大鼠的粪便标本进行16S rDNA测序,分析肠道菌群的变化特征。结果 与D0组比较,Z10组和Z28组大鼠肠道菌群α多样性和β多样性均发生改变(均P<0.05;门水平上拟杆菌门(Bacteroidetes)丰度增加,厚壁菌门(Firmicutes)丰度减少(P<0.05);属水平上Ruminococcus_1丰度增加,Lactobacillus、Akkermansia丰度减少,Treponema_2、norank_f_norank_o_Mollicutes_RF39、Dubosiella、Ruminococcaceae_NK4A214_group丰度先增加后减少,Prevotellaceae_UCG-001、Allprovetella、Prevotellaceae_Ga6A1_group丰度先减少后增加(均P<0.05)。结论 在PZA致大鼠DILI过程中,其肠道菌群数量、结构和组成均发生改变,主要特征为有益菌减少,致病原菌增多,但其菌群多样性未见改变。