CRISPR-Cas9技术在疾病治疗中的应用

CRISPR-Cas系统广泛存在于细菌中,是一种高效、特异、操作简单易行、可对多种生物的基因组进行遗传改造的工具。与其他功能缺失的筛选技术(如RNAi、TALEN)相比,全基因组CRISPR-Cas9敲除技术显示出更大的优势。这种技术被广泛应用于世界各地的实验室以及各个领域,尤其是在疾病研究中。利用CRISPR-Cas系统,科学家在艾滋病、癌症、亨廷顿氏病研究中取得了重大突破。本文将就CRISPR-Cas系统的最新进展,尤其是在疾病研究中的最新应用成果作一综述,并对此技术在人类战胜病魔的斗争中将起到的关键作用进行探讨。

动态肺功能测试与哮喘控制测试不同症状感知类型支气管哮喘患者的相关性研究

目的通过动态肺功能测试与哮喘控制测试(asthma control test,ACT)评分对不同症状感知类型的支气管哮喘(以下简称哮喘)进行研究,探讨ACT在临床使用的准确性。方法对42例不同症状感知类型哮喘患者在动态肺功能监测前和监测期间(第14天)各进行一次ACT问卷调查。同时每天用动态肺量记录仪测定肺功能,连续监测14天,对监测前和监测期间不同症状感知类型哮喘患者的ACT评分和第一秒用力肺活量占预计值百分比(FEV1%pred)进行相关性分析。结果 42例患者ACT评分与FEV1%pred进行相关分析发现,监测前和监测期间两者均存在相关性(前:r=0.317,P<0.05;期间:r=0.360,P<0.05)。症状感知正常型哮喘患者在监测前和监测期间两次ACT评分与FEV1%pred之间均存在显著相关性(前:r=0.647,P<0.01;期间:r=0.698,P<0.01)。而迟钝型和敏感型ACT评分与FEV1%pred之间均不存在相关性,其中迟钝型(前:r=-0.453,P>0.05;期间:r=0.468,P>0.05),敏感型(前:r=0.487,P>0.05;期间:r=0.253,P>0.05)。结论 ACT是一种简易有效的评价哮喘控制的方法,与症状感知正常的哮喘患者肺功能具显著的相关性和一致性,但ACT在症状感知迟钝型和敏感型哮喘患者控制水平的测试效能和准确性较低,容易出现偏差,使用前应考虑受试者的依从性及症状感知是否正常。

腺病毒“衣壳嵌合”策略在疫苗研究中的应用

腺病毒(adenovirus)作为基因治疗和重组疫苗研究的载体已经有广泛的应用,但抗载体免疫限制了其应用。近年来,采用"衣壳嵌合"方法制备的重组腺病毒载体已成为艾滋病、疟疾等疫苗研究的热点,该策略在不影响病毒的感染性及稳定性的前提下,在腺病毒载体衣壳中嵌入外源性抗原从而获得具有新的抗原特性的重组腺病毒粒子。六邻体、五邻体基座、纤维蛋白、多肽Ⅸ、多肽Ⅲa等多种衣壳蛋白的适当位点可以嵌入外源抗原并诱导特异性的免疫应答。本文主要综述了腺病毒"衣壳嵌合"策略应用于疫苗研究中的最新进展。

慢性阻塞性肺疾病-哮喘重叠综合征慢性阻塞性肺疾病和支气管哮喘临床特征差异研究

目的探讨慢性阻塞性肺疾病-哮喘重叠综合征(ACOS)、慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)和支气管哮喘(哮喘)临床特征的差异。方法收集2011年3月至2014年4月广州医科大学第一附属医院收治的47例ACOS、59例慢阻肺及53例哮喘患者的一般情况、肺功能检查结果、诱导痰细胞嗜酸粒细胞(EOS)百分比、呼出气一氧化氮(FENO)水平、圣乔治呼吸问卷(SGRQ)评定和2年内急性加重和住院次数。结果 ACOS组和慢阻肺组平均年龄分别为(68.0±12.3)岁和(62.0±9.7)岁,均大于哮喘组(43.0±6.2)岁(P<0.05)。ACOS组和慢阻肺组吸烟指数分别为(387±127)年支和(472±91)年支(P<0.05),均大于哮喘组[(72±16)年支](P<0.05)。ACOS和慢阻肺患者儿童时期下呼吸道感染频繁者(每年≥1次)比例分别为21.3%和15.3%,而哮喘患者为7.5%。ACOS组患者2年内第一秒用力呼气容积(FEV1)为(53.7±6.6)m L,下降较慢阻肺(42.8±10.4)m L和哮喘患者(24.2±7.9)m L明显。ACOS和慢阻肺患者一氧化氮肺泡弥散量占预计值(DLCO/VA%)分别为(58.4±9.2)%和(64.7±7.1)%,均低于哮喘患者(91.0±7.3)%(P<0.05)。ACOS和哮喘患者诱导痰EOS百分比分别为(11.3±3.9)%和(14.9±11.7)%,均高于慢阻肺组(1.4±0.8)%(P<0.05)。ACOS和哮喘患者FENO水平分别为(39.2±18.7)×10-9mol/L和(46.6±15.4)×10-9mol/L,均高于慢阻肺组(19.5±5.2)×10-9mol/L(P<0.05)。ACOS患者的SGRQ为69.5±9.2,高于慢阻肺组47.0±11.7和哮喘组(31.3±9.7)(P<0.05)。ACOS患者2年内急性加重次数为(3.1±1.2)次,多于慢阻肺组(1.4±0.6)次(P<0.05);ACOS患者因急性加重住院次数为(2.83±0.96)次,多于慢阻肺组(1.10±0.72)次(P<0.05)。结论 ACOS常见于有特应症特征基础上常年吸烟的老年患者。ACOS临床上肺功能下降更快,健康相关生活质量差,易于反复急性加重。

长效支气管舒张剂——慢性阻塞性肺疾病稳定期治疗的一线基础药物

慢性阻塞性肺疾病（简称慢阻肺）是常见的慢性呼吸道疾病。世界卫生组织估计，2020年慢阻肺将成为世界第3大死亡原因，位居世界经济负担第5位。我国40岁以上人群的慢阻肺患病率约为8．2％，每年致残人数达500万～1000万，致死人数达100万。

呼吸力学导向的机械通气策略

机械通气是各种原因所致呼吸衰竭非常重要的对症支持治疗手段,其极大程度地改善了患者预后.然而,不恰当的机械通气往往会引起呼吸机所致肺损伤（ventilator induced lung injury,VILI）,因此恰当的制定通气策略是机械通气成功的关键因素.由于呼吸运动过程本身就是在中枢调控、神经反射等的调节下,呼吸肌肉收缩（或舒张）进而驱动气体吸入（或呼出）的力学过程.呼吸力学在机械通气中的意义越来越引起广大学者的关注.呼吸力学就是研究与呼吸运动有关的压力、容积和流量三要素及其相关的顺应性、阻力和呼吸做功等力学参数的一门科学.呼吸系统的各种疾病都会引起呼吸力学的改变,从而使呼吸运动发生异常.因此,呼吸力学是呼吸生理学的重要组成部分,也是机械通气的理论基础,是恰当的制定通气策略的重要依据.

呼吸力学导向的机械通气策略在急性呼吸窘迫综合征中的应用研究进展

急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome,ARDS）是临床常见的急危重症,机械通气是ARDS患者最重要的支持治疗手段.无论是自主呼吸还是机械通气,肺通气的本质都是呼吸的动力克服阻力并驱动气体运动的力学过程.认识ARDS患者的呼吸力学特征,对于理解ARDS的病理生理机制、把握呼吸机治疗的原理、指导制定恰当的肺保护性通气方案、减少不恰当的机械通气引起呼吸机所致肺损伤（ventilator induced lung injury,VILI）具有举足轻重的意义.

床旁实时浓度监测氦气稀释法检测功能残气量的实验观察

目的探讨床旁实时浓度监测氦气稀释法（RHe法）检测功能残气量的准确性、精度及重复性。方法选择18例健康比格犬，利用静脉注射油酸制作急性呼吸窘迫综合征（ARDS）动物模型，在制作动物模型前后采用床旁RHe法及胸部CT扫描法检测功能残气量，实验过程中，实时监测实验动物呼吸、心率、血压等生命体征，选用Bland-Altman分析法及配对t检验进行统计学分析。结果对于造模前健康肺，CT扫描法检测功能残气量（FRCCT）与床旁RHe法检测功能残气量（FRCRHe）呈线性相关，回归方程为FRCRHe=0．959×FRCCT＋23．3（R^2=0．89，P〈0．0001）。RHe法与CT法的偏倚为（6．3±27．6）ml（1．5％±7．1％），95％可信区间为-47．7-60．3ml；对于造模后ARDS肺，直线回归方程为FRCRHe=0．693×FRCCT＋66．4（R^2=0．507，P〈0．001）。RHe法与CT法的偏倚为（7．9±27．1）ml（4．5％±13．6％），95％可信区间为-45．3～61．1ml。两次FRCRHe之间的差别在健康肺和ARDS肺分别为（-0．1％±5．8％）和（0．2％±9％）。结论床旁RHe法用于检测健康及ARDS模型肺功能残气量均具有良好的准确性、精度及重复性。

慢性阻塞性肺疾病诱导痰细胞分类特点及其与治疗反应性的相关性分析

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)诱导痰细胞分类特点及其与治疗反应性的相关性。方法检测65例初诊慢阻肺患者诱导痰细胞分类特点,分析其与肺功能、功能性呼吸困难评分、圣乔治呼吸问卷评分(SGRQ)的相关性,并分析嗜酸粒细胞(Eos)百分比与慢阻肺治疗反应性的相关性。结果慢阻肺稳定期患者诱导痰中性粒细胞(Neu)、巨噬细胞、Eos、淋巴细胞百分比分别为(86.24±15.04)%、(5.75±6.96)%、(4.71±4.79)%、(1.30±1.09)%,其中Eos百分比≥3%者31例(60.78%)。Neu百分比与FEV_1、FEV_1%pred、FVC、FVC%pred呈负相关(P均<0.01),与SGRQ症状评分呈正相关(r=0.304,P=0.034)。Eos百分比与FEV_1/FVC呈负相关(r=-0.399,P=0.004)。给予丙酸氟替卡松+沙美特罗治疗后,Eos百分比≥3%者肺功能及症状改善较Eos百分比<3%者更加显著(P均<0.05)。结论部分稳定期慢阻肺可表现为嗜酸粒细胞性炎症,诱导痰Eos百分比与慢阻肺气流受限呈负相关,对长效型糖皮质激素联合β2受体激动剂治疗反应较好。

肺应变对犬急性呼吸窘迫综合征模型肺水肿的影响

目的 初步探讨肺应变大小对犬急性呼吸窘迫综合征（ARDS）模型肺水肿的影响.方法 选取20只健康比格犬,利用静脉注射油酸制作ARDS模型,按随机数字表法均分为4组,肺应变分别为1.0、1.5、2.0及2.5并分别命名为S1.0、S1.5、S2.0、S2.5组,根据肺应变、功能残气量及呼气末正压引起的肺复张容积计算潮气量,以此潮气量进行机械通气24 h,采用热稀释法测量血管外肺水指数（EVLWI）、肺血管通透性指数（PVPI）等肺水肿指标,称重法测量肺组织湿干比.结果 S1.0、S1.5、S2.0、S2.5组潮气量分别为（7.5±1.7）、（13.9±5.8）、（17.9±4.7）、（20.3±7.9） ml/kg,机械通气治疗4h后,S2.0、S2.5组的EVLWI均显著高于S1.0、S1.5组[（38.9±6.5）、（40.1±7.7）比（26.6±5.2）、（28.8±5.4） ml/kg;F=5.627,P=0.009].实验结束时S2.5组的PVPI均显著高于S1.0、S1.5、S2.0组（16.7±5.4比7.0±2.3、9.2±2.2、11.5±6.0;F=4.329,P=0.022）;S2.0、S2.5组肺组织湿干比均显著高于S1.0、S1.5组（10.4土1.2、10.8±1.5比8.3±1.2、8.0±2.2;F=5.627,P =0.009）.结论 肺应变＞2.0时明显加重ARDS模型肺水肿,肺应变＜1.5时对于肺水肿的影响较小.

沙美特罗／氟替卡松改善慢性阻塞性肺疾病患者肺功能的预测因素的初探

目的探讨影响吸入糖皮质醇激素（ICS）＋长效β受体激动剂（LABA）（沙美特罗/氟替卡松）改善COPD患者肺功能的预测指标。方法实验分两组，实验组COPD患者166例，对照组COPD患者73例，实验组所有COPD患者吸入50／500μg沙美特罗／氟替卡松（1吸，2次／d），对照组吸入安慰剂，两组均治疗6个月。所有患者在治疗前后均进行诱导痰嗜酸粒细胞、IL-8、呼出气一氧化氮检测（FeNO）和肺功能的检测。应用单因素和非条件Logistic多因素回归分析方法，分析影响FEV1改善的可能因素。结果实验组患者吸入50／500μg沙美特罗替卡松（1吸，2次／d）治疗后FEV1改善值为（86±11）ml，而对照组FEV1改善值为（19±16）ml（t=6．205，P〈0．05）。我们对影响ICS＋LABA改善FEV1值的可能因素，包括诱导痰中嗜酸粒细胞、炎性介质IL-8水平、反应气道炎症水平的FENO，基础肺功能FEV1等因素进行分析，结果显示诱导痰中炎性介质IL-8水平、FENO基础水平和基础肺功能与FEV1改善无相关；而嗜酸粒细胞〉2．5％（χ^2=3．181，P〉0．05）及治疗后FeNO下降〉10bbp（χ^2=17．237，P〉0．05）与FEV1改善相关。进一步多因素Logisitc分析显示诱导痰嗜酸粒细胞〉2．5％和治疗后FeNO降低〉10ppb是影响ICS＋LABA改善FEV1的重要因素。结论诱导痰嗜酸粒细胞、治疗后FENO下降的水平可成为ICS＋LABA改善COPD患者FEV1的预测因素。

现代综合立体教学在呼吸内科临床见习中的应用

目的：探索现代综合立体教学在呼吸内科教学中的应用及效果。方法将以问题为基础的学习（ problem-based learning ， PBL ）、基于标准化病人的练习（ stan-dardized patient experiences/exam，SPE/Xs）和迷你临床检查练习方法（mini clinical examination exercise，Mini-CEX）等有机结合应用于呼吸内科临床见习，并将其命名为“现代综合立体教学”。将60名学生随机分为现代综合立体教学组（30名）和传统教学组（30名），分别采用现代综合立体教学和以主题为基础的学习（subject based learning，SBL）进行呼吸内科见习带教。教学结束后，采用成绩测试和受试者问卷调查评价两组学生的教学效果。组间比较采用SPSS行t检验。结果现代综合立体教学组学生的测试成绩为（86.91±4.77）分，高于对照组的（79.00±7.51）分（t=12.4，P=0.0260）。其中主观题（如论述题和病例分析）成绩方面，现代综合立体教学组（47.63±2.14）分，明显优于传统组的（36.00±6.71）分（t=21.6，P=0.0019）。对两组学生进行调查问卷显示：相比传统教学，现代综合立体教学更能提高学生的主观能动性和对学习的积极性；提高学生综合分析问题的能力和促进临床思维的形成；有利于学生高效、全面掌握呼吸内科基本知识和基本技能（χ2=16.2，P=0.0160）。结论针对呼吸内科临床见习实施现代综合立体教学有助于提高教学效果。

慢性阻塞性肺疾病急性加重合并静脉血栓栓塞症研究进展

慢性阻塞性肺疾病（慢阻肺）发病率高,每年约300万患者死亡,位居全球疾病死亡原因第4位,预计2020年将上升至第3位,仅次于缺血性心脏病和脑卒中[1-2],已成为全球主要的社会负担问题.在我国40岁以上人群慢阻肺发病率为8.2％[3].慢阻肺急性加重可导致呼吸功能急剧恶化,慢阻肺相关的死亡多发生于急性加重期,其中50％ ～ 70％存在感染因素,10％归因为环境污染,约30％原因不明[4].慢阻肺是肺栓塞的独立危险因素,但及时确诊率低[5],肺栓塞引起的呼吸困难等症状常被慢阻肺病情掩盖,这也可能是急性加重被忽略的病因,由于缺乏及时的抗凝治疗使患者预后更差[6-8].

细颗粒物载带组分与呼吸系统健康的关系

随着工业发展和城市化进程加快，大气污染给人类健康带来的威胁越来越大。大气污染包括悬浮颗粒物污染、气态污染和气味污染，其中悬浮细颗粒物（PM2.5）由于形状不规则，在大气中悬浮时间较长，粒径小而比表面积大易于富集空气中的有毒有害物质，并可随呼吸进入体内，甚至进入肺泡或血液循环系统，直接导致心血管和呼吸系统等疾病，因此引发了全世界的广泛关注。现将对PM2.5的载带组分与呼吸系统健康的关系综述如下。

无创通气用于肺性脑病患者疗效的Meta分析

目的系统评价无创通气（NIV）对慢性阻塞性肺疾病急性加重期（AECOPD）等所致高碳酸血症性呼吸衰竭（呼衰）引起肺性脑病（HES）患者的疗效。方法计算机检索美国国立医学图书馆PubMed、荷兰医学文摘EMBASE、Cochrane临床试验数据库、中国期刊网全文数据库、万方数据库，从建库起至2015年1月发表的有关NIV与经典有创通气（CMV）用于HES患者疗效比较的随机对照试验（RCT）及病例对照研究，采用严格技术评价项目（CASP）清单进行质量评价，提取病死率、气管插管率、机械通气持续时间、并发症发生率等资料，利用RevMan5．3软件进行荟萃分析（Meta分析）。结果共纳入6篇文献、225例患者，NIV组112例，CMV组113例；Kelly—Matthay昏迷评分均值为3分。与CMV组比较，NIV组可明显降低患者病死率[20．5％（23／112）比32．7％（37／113），相对危险度（RR）=0．63，95％可信区间（95％CI）=0．40。0．98，P=0．04]、气管插管率[35．7％（40／112）比100．0％（113／113），RR=0．38，95％CI=0．26～0．55，P〈0．00001]、机械通气相关并发症发生率[26．2％（21／80）比50．6％（42／83），RR=0．52，95％CI=0．34～0．79，P=0．002]，缩短机械通气时间[d：7．1比16．2，加权均数差（SMD）=-0．93，95％CI=-1．39—-0．46，P=0．0001]。结论在密切监测下NIV可降低AECOPD等所致高碳酸血症性呼衰引起HES患者的总体住院病死率、气管插管率，减少机械通气相关并发症的发生。

无创与有创正压通气联合应用——机械通气的新时代

机械通气是危重症救治和呼吸衰竭治疗中最常用的技术之一，近20多年来有了长足的进展，其中无创通气无疑是最重要进展之一。现代的机械通气应该包括有创通气和无创通气，两者的互补和配合应用可最大限度提高机械通气的效果并减少其不良作用。

乘风破浪一甲子春华秋实六十载

60年在历史的长河中只是一瞬问，但对于一位刚走出大学校门的青年人来说，再走过60年就到了该享受“夕阳无限好”的时光了。2013年《中华结核和呼吸杂志》迎来了创刊60周年华诞，但她依然年轻，依然充满活力。

头罩无创通气研究进展

无创通气(non invasive ventilation,NIV)技术因其无需建立人工气道而具有独特的优点,目前得到越来越广泛的应用.对于慢性阻塞性肺疾病急性加重期、心源性肺水肿、免疫功能受损合并呼吸衰竭及辅助撤机的患者,NIV既可以起到良好的呼吸支持作用,又能降低患者的住院病死率、气管插管率、缩短住院时间[1-4].在NIV技术中,各种面罩在呼吸机和患者之间起到桥梁作用,是NIV成功实施的保障.然而,尽管在面罩的材质、形状、型号、头带等方面进行了多种的改进[5],面罩NIV仍存在鼻面部皮肤损伤、口咽干燥、漏气、排痰障碍、不适感、误吸与胃胀气等不良反应[1,6],甚至造成患者的不耐受及通气失败.研究表明面罩引起NIV的失败率可达到18％[2],使患者的住院病死率上升3倍[8].为了改善NIV的性能、减少并发症,头罩NIV应运而生,其采用全新设计的头罩作为NIV与患者的连接装置,引起了越来越多研究者的关注,但其疗效、应用指征尚存在争议,本文对其研究现状综述如下.

低氧对小鼠肺组织内Follistatin和Follistatin-like3表达的影响

目的 观察低氧对小鼠肺组织中骨形态发生蛋白4（BMP4）内源性拮抗蛋白基因Follistatin（FSN）和follistatin-like 3 （FSRP） mRNA表达的影响.方法 将30只5周龄雄性同种系BMP4＋/＋C57BL/6J野生型小鼠按照随机数字表法分为对照组、低氧1d组、低氧3d组、低氧7d组和低氧21 d组,每组6只;6只BMP4＋/-C57BL/6J杂合子小鼠按照随机表法分成常氧1d杂合组和低氧1d杂合组.分别给予小鼠不同时长低氧环境后处死并采集肺组织,采用实时定量PCR检测肺组织中FSN和FSRP mRNA的表达水平.结果 FSN和FSRP mRNA的表达随小鼠缺氧的时间呈先上升后下降的趋势,低氧第1天表达增加尤其明显,FSN mRNA的表达趋势较FSRP mRNA明显.常氧及低氧状态下,野生型小鼠与杂合子小鼠肺组织内FSN和FSRP mRNA的表达无明显差异,低氧1d组FSN和FSRP mRNA相对表达量分别为（28.0±9.4）和（2.0±0.4）,低氧3d组分别为（6.3±3.2）和（1.7±0.7）,低氧7d组分别为（1.77±0.36）和（1.22 ±0.15）,低氧21 d组分别为（1.04±0.27）和（0.85±0.10）,均高于对照组,差异有统计学意义（均P＜0.05）.常氧1d杂合组小鼠肺组织的FSN和FSRP mRNA相对表达量分别为（0.95±0.05）和（1.11 ±0.03）,低氧1d杂合组分别为（1.10±0.40）和（0.85±0.18）.结论 FSN和FSRP作为内源性拮抗蛋白对低氧状态下mRNA的表达上调依赖于BMP4 mRNA的表达上调,FSN可能在低氧性肺动脉高压发病机制中具有重要的调节作用.

继发性肺泡蛋白沉积症二例报告并文献复习

肺泡蛋白沉积症（PAP）是以肺泡内过碘酸雪夫（PAS）染色阳性脂蛋白类物质异常沉积为特征的一种综合征，分为先天性、特发性（IPAP）和继发性（SPAP）。SPAP病例罕见，目前国内对SPAP的研究以个案报道为主，没有关于SPAP的系统报道。本研究报道广州医科大学第一附属医院呼吸内科2012年3—9月收治的2例SPAP患者并结合文献进行复习，分析SPAP的临床资料、继发因素及治疗预后。