青皮煎剂预防大鼠急性化学性肝损伤的实验研究

目的研究青皮煎剂预防急性化学性肝损伤的作用。方法将大鼠随机分为4组,低剂量组和高剂量组分别灌喂0.4g.kg-1.d-1和0.8g.kg-1.d-1青皮煎剂,正常对照组和模型组灌喂等量蒸馏水,5d后以0.2g/kg四氯化碳(CCl4)造模,处死大鼠。检测大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性和肝组织均浆中丙二醛(MDA)含量及超氧化物岐化酶(SOD)活性,并观察肝细胞形态结构的变化。结果不同剂量的青皮煎剂均能降低血清AST、ALT活性,降低MDA含量,增加SOD活性,并能有效地减轻肝细胞的变性、坏死,呈现明显的量效依赖性。结论青皮煎剂具有预防化学性肝损伤的保护作用。

损毁孤束核对电针足三里穴抗大鼠应激性胃溃疡作用的影响

目的:探讨孤束核(NTS)在电针(EA)足三里穴抗大鼠应激性胃溃疡中的作用.方法:健康♂SD大白鼠56只随机分为应激组、EA+应激组、NTS电损毁组、NTS假损毁组.通过脑立体定向仪电损毁大鼠孤束核,采用束缚-浸水制备大鼠应激性胃溃疡模型,分别测定各组胃黏膜损伤指数(UI)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量.结果:与应激组比较,EA+应激组UI明显减少(t=9.5071,P<0.01),SOD活性升高(t=3.8729,P<0.01),MDA降低(t=2.3578,P<0.05).NTS电损毁组分别与假损毁组和EA+应激组比较UI提高(t=4.4223,7.2579,均P<0.01),SOD活性降低(t=3.5625,3.7242,均P<0.01),MDA含量升高(t=2.9045,2.4960,均P<0.05).结论:电损毁孤束核后,电针足三里穴对应激性胃黏膜损伤的保护作用减弱.

精氨酸加压素参与电针对大鼠应激性胃黏膜损伤的保护作用

目的：探讨精氨酸加压素(AVP)参与电针(EA)对应激性大鼠胃黏膜损伤保护作用及机制.方法：健康SD大鼠98只,随机分为模型组、电针组、生理盐水对照组、AVP 100ng组、AVP 200ng组、AVP 300ng组和AVP-V_1受体阻断剂组.采用束缚冷应激胃黏膜损伤大鼠模型,观察孤束核微量注射AVP,AVP-V_1受体阻断剂,大鼠胃黏膜血流量(GMBF)、溃疡指数(UI)、胃液酸度的变化.结果：与模型组比较,电针组大鼠UI减少(t= 7.5201,P＜0.01),GMBF(mv)增加(t=2.9606,P＜0.05),胃液酸度降低(t=4.2090,P＜0.01). AVP 100,200,300ng组分别与生理盐水对照组比较,UI明显减少(t=2.2718,t=4.9082,t =6.0413：P＜0.05-0.01),GMBF明显增加(t= 2.6845,t=3.8269,t=4.8795；P＜0.05-P＜0.01),胃液酸度明显降低(t=3.0526,t=3.8565,t= 5.6251；P＜0.05-P＜0.01),并且表现明显的剂量-效应依赖关系(r=0.9978,r=0.9980,r= 0.9829；P＜0.05).AVP-V_1受体阻断剂组与生理盐水对照组比较UI增大(t=5.6815,P＜0.01),GMBF减少(t=2.3750,P＜0.05),胃液酸度增高(t=2.2046,P＜0.05).结论：孤束核内AVP参与了电针对大鼠应激性胃黏膜损伤保护作用过程.

亚低温复合缺血预处理对大鼠肠缺血再灌注肝损伤的保护作用

目的:观察复合预处理对肠缺血再灌注大鼠模型肝组织细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达的影响,分析复合预处理防治缺血再灌注肝损伤的作用途径。方法:实验于2002-05/12在咸宁学院医学院中心实验室完成。选用Wistar健康雄性大鼠30只,由咸宁学院医学院动物室提供[实验动物机构许可证号:SCXK(鄂)2004-007]。将30只大鼠按随机数字表法分为3组,即假手术组、缺血再灌注组、复合预处理组,每组10只。肠缺血再灌注模型制备:麻醉后暴露大鼠肠系膜上动脉用无损伤动脉夹夹闭其根部导致缺血,松夹即为再灌注。①假手术组:仅暴露肠系膜上动脉而不夹闭,共2h结束实验后取材。②缺血再灌注组:夹闭肠系膜上动脉60min后,松夹60min再取材。③复合预处理组:在小肠周围充填碎冰造成小肠亚低温(33～35℃),再夹闭肠系膜上动脉5min和松夹5min作为预处理,余同缺血再灌注组。动物模型制备后,在各时段处死大鼠,同时取少许肝左中叶组织,一部分常规切片,采用SABC法进行免疫组化染色,胞浆出现棕黄色颗粒为Bcl-2,Bax蛋白染色阳性细胞,计算Bcl-2,Bax蛋白的阳性表达指数;另一部分行光、电镜观察,观察各组大鼠的肝脏组织学改变。结果:30只大鼠全部进入结果分析,无脱失。①各组大鼠肝组织Bcl-2,Bax蛋白的阳性表达指数比较:缺血再灌注组大鼠肝组织Bcl-2,Bax蛋白的阳性表达指数显著高于假手术组(5.31±1.15)%,(15.16±1.35)%;(1.01±0.09)%,(0.98±0.07)%(P<0.01);复合预处理组大鼠的肝组织Bcl-2蛋白阳性表达指数(12.21±1.17)%显著高于缺血再灌注组(P<0.01),Bax蛋白的阳性表达指数(7.45±1.61)%显著低于缺血再灌注组(P<0.01)。②各组大鼠肝脏组织学改变:光镜下缺血再灌注组肝细胞水肿,肝窦淤血变窄;复合预处理组肝细胞索及肝窦排列整齐,未见肝细胞水肿。电镜下缺血再灌注组肝细胞有空泡形成,线粒体肿胀,胞浆疏松化,部分肝细胞核固缩、变小;复合预处理组肝细胞损伤减轻,内未见空泡,线粒体稍肿胀。结论:亚低温复合缺血预处理可通过上调Bcl-2蛋白与下调Bax蛋白表达以保护缺血再灌注肝损伤,这可能是复合预处理保护肠缺血再灌注肝损伤的作用途径之一。

亚低温缺血预处理对大鼠肠缺血再灌注诱导细胞凋亡的保护(英文)

背景:细胞凋亡在肠缺血再灌注损伤中起关键性作用,细胞凋亡的发生与凋亡抑制基因Bcl-2和凋亡促进基因Bax蛋白表达程度密切相关。目的:探讨亚低温缺血预处理对大鼠肠组织缺血再灌注后凋亡相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。设计:随机对照实验。单位:湖北省咸宁学院医学院外科学教研室与生物化学教研室。材料:实验于2002—04/12在咸宁学院医学院中心实验室完成。选用Wistar健康雄性大鼠32只,术前禁食24h,自由饮水。随机分为假手术对照组、缺血再灌注组、缺血预处理组、亚低温预处理组,8只/组。方法:除假手术对照组外,其余3组建立缺血再灌注模型。①假手术对照组仅暴露肠系膜上动脉而不夹闭,共2h,结束实验后取材;缺血再灌注组夹闭肠系膜上动脉60min后松夹60min再取材;缺血预处理组夹闭肠系膜上动脉5min和松夹5min作为预处理,余同缺血再灌注组;亚低温预处理组实施缺血预处理前在小肠周围充填碎冰造成小肠亚低温(33～35℃),余同缺血预处理组。②各组大鼠取中段小肠4cm,分为两段,分别置于甲醛和戊二醛中固定,制作电镜标本。免疫组化后显微镜下用图像分析系统检测各组吸光度值,每组选10个视野进行测量,计算平均值,肠黏膜损伤按Chiu标准进行分级。0级:正常黏膜绒毛;Ⅰ级:上皮下间隙增大,通常在绒毛的尖端,常伴有毛细血管淤血;Ⅱ级:上皮下间隙扩张伴随上皮层同固有层中度分离;Ⅲ级:绒毛两侧上皮层大量的同固有层分离,部分绒毛顶端破损;Ⅳ级绒毛破损伴随固有层毛细血管暴露,可能观察到固有层的细胞成分增多;Ⅴ级:固有层破坏和不完整、出血和溃疡。主要观察指标:①各组肠缺血再灌注后Bcl-2与Bax蛋白吸光度值的变化。②各组肠黏膜损伤分级。③各组肠黏膜组织学变化。结果:32只大鼠全部进入结果分析,中途无脱落。①各组肠缺血再灌注后Bcl-2与Bax蛋白吸光度值的变化:与假手术对照组比较,缺血再灌注组均明显升高(4.03±1.02,9.56±1.32,P<0.01;5.67±1.34,19.07±1.63,P<0.01);与缺血再灌注组比较,缺血预处理组Bcl-2表达升高(9.56±1.32,15.03±1.44,P<0.01),Bax表达降低(19.07±1.63,14.11±1.21,P<0.01);与缺血预处理组比较,亚低温预处理组Bcl-2表达仍有所升高(15.03±1.44,18.17±2.03,P<0.05),Bax表达仍降低(14.11±1.21,11.58±1.04,P<0.05)。②各组肠黏膜损伤分级情况:假手术对照组肠黏膜基本正常,损伤均为0级;缺血再灌注组肠黏膜损伤Ⅱ级2只,Ⅲ级3只,Ⅳ级3只,明显高于假手术对照组(P<0.01);缺血预处理组肠黏膜损伤Ⅰ级2只,Ⅱ级4只,Ⅲ级2只,明显低于缺血再灌注组(P<0.01);亚低温预处理组肠黏膜损伤0级1只,Ⅰ级3只,Ⅱ级4只,低于缺血预处理组(P<0.05)。③各组肠黏膜组织学形态电镜观察结果:假手术对照组肠黏膜上皮微绒毛排列整齐,各细胞器形态正常;缺血再灌注组肠黏膜上皮微绒毛稀疏、变短、脱落,线粒体明显肿胀,空泡变性,内质网排列紊乱、肿胀;缺血预处理组肠黏膜上皮微绒毛排列基本整齐,线粒体内质网轻度肿胀;而亚低温预处理组肠黏膜上皮微绒毛排列整齐,线粒体内质网肿胀不明显。结论:肠缺血再灌注前进行缺血预处理可以上调Bcl-2蛋白的表达,并下调Bax蛋白的表达,从而抑制肠缺血再灌注诱导的细胞凋亡以保护缺血再灌注肠损伤。亚低温状态能增强缺血预处理的保护作用。

茵陈煎剂保肝作用机理的实验研究

目的 研究茵陈煎剂对实验性肝损伤大白鼠的保护作用及其机制。方法 采用急性CCl4肝损伤模型,实验设茵陈效剂大、中、小剂量试验组,对照组和正常组,观察各组大白鼠血浆中丙二醛含量及超氧化物歧化酶(SOD),山梨醇脱氢酶(SDH)活性变化。结果 茵陈煎剂三个剂量治疗组均能降低血MDA含量和SDH活性,增加SOD活性,减轻肝损伤程度,且有明显的量效关系。结论 茵陈煎剂具有良好的保护CCl4致大鼠急性肝损伤的作用,其机理可能与抑制体内的过氧化反应有关。

虎杖对大鼠急性四氯化碳肝损伤保护作用的量效关系

目的观察不同剂量虎杖煎剂对四氯化碳(CCl4)致大鼠肝损伤的影响。方法将40只大鼠随机分为5组,即正常对照组、模型对照组及虎杖煎剂高、中、低剂量组,分别腹腔注射等容积的生理盐水、生理盐水及虎杖煎剂(0.8g/ml,0.4g/ml,0.2g/ml)。连续6d,每日1次。末次给药后,除正常对照组皮下注射生理盐水外,其他大鼠皮下注射CCl4原液1次,复制大鼠急性肝损伤模型,检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,并取肝组织作病理学检查。结果不同剂量的虎杖煎剂均可明显降低CCl4致大鼠血清ALT和AST活性升高,并呈明显的量效关系。虎杖煎剂组大鼠肝组织变性、坏死的程度与模型对照组比较明显减轻。结论虎杖煎剂对CCl4所致大鼠急性肝损伤具有明显的保护作用和量效关系。

表皮生长因子受体基因突变与晚期非小细胞肺癌的分子靶向治疗

目的探讨以表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂getfinibi为代表的靶向治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的可行性。方法31例经铂类治疗方案失败的晚期NSCLC患者应用getfinibi 250 mg/d治疗,采用RECIST标准评价疗效,并对接受gefitinib治疗的患者的肿瘤组织进行EGFR酪氨酸激酶域基因突变检测。结果31例标本中共检测出12例基因突变。4例为19号染色体缺失突变,其中3例为2235～2249核苷酸缺失造成E746-A750氨苷酸改变,1例为2240～2257核苷酸缺失,造成L747-P753insS氨苷酸改变。8例为21号染色体错义突变,均为L858R变异(T>G)。经gefitinib治疗后EGFR基因突变组的客观有效率达66.7%,疾病控制率达100.0%,均高于无EGFR基因突变组(分别为10.5%、15.8%)(P<0.05)。结论getfinibi靶向治疗晚期NSCLC疗效明显,gefitinib治疗效果明显的患者中EGFR基因突变的发生率高,因此,EGFR酪氨酸激酶域突变检测可作为患者应用getfinibi疗效的一个预测指标。

参附注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注后NO、NOS的影响

目的观察参附注射液对局灶性脑缺血再灌注大鼠一氧化氮 (NO)、一氧化氮合酶 (NOS)活性的影响。方法Wistar大鼠随机为分假手术组、脑缺血再灌注组、参附注射液小剂量组、参附注射液大剂量组。采用改良的Longa′s法制作大脑中动脉脑缺血再灌注模型 ,分别测定各组血清、脑组织NO含量和脑组织NOS的活性。结果大鼠脑缺血 2h再灌注 2 4h血清、脑组织NO含量和脑组织NOS的活性明显升高。不同剂量的参附注液能使脑缺血再灌注大鼠血清、脑组织的NO含量及NOS活性明显降低。结论参附注射液能降低NOS活性 ,降低NO含量 。

重组IL-12腺病毒载体对肺炎小鼠NK细胞功能的影响

目的:探讨重组IL-12腺病毒载体(AdCMV IL-12)对肺炎小鼠NK细胞功能的影响。方法:90只BALB/c小鼠随机分为4组,A组:空白对照组15只,不给予病毒,滴鼻生理盐水。B组:对照组25只,每只鼻腔滴入105TCID50/0.1mL的Ad3悬液100μL。C组:AdCMV IL-12组25只,每只鼻腔滴入105TCID50的Ad3/0.1mL悬液100μL,3d后滴鼻给药吸入AdCMV IL-12(5×108PFU/只)100μL。D组:AdCMVLacZ组25只,每只鼻腔滴入105TCID50/0.1mL的Ad3悬液100μL,3d后滴鼻给药吸入AdCMVLacZ(5×108PFU/只)100μL。开始滴入病毒定为0d。于第5天,摘眼球取血,颈椎脱臼处死,无菌条件下取肺,用于转染及病毒毒力检测。无菌条件下取脾脏做NK细胞活性检测。测定血清IL-12及FIN-γ含量。结果:含有目的基因的腺病毒载体能有效转染支气管及肺组织并在局部表达目的基因。血清IL-12浓度为C组>A组>B组、D组,NK、FIN-γ浓度为C组>B组、D组>A组。病毒滴度:A组细胞生长良好。B、D组于10-4出现细胞病变,C组于原液中出现病变。结论:重组IL-12腺病毒载体可通过滴鼻给药成功转染至肺组织,升高血液IL-12浓度,通过增加NK细胞活性而增加了IFN-γ的释放,从而导致病毒滴度下降,限制CVB病毒复制的作用。

SOCS3基因沉默对高脂餐大鼠脂质代谢紊乱的影响

目的:探讨通过RNA干扰技术下调SOCS3表达防治高脂餐大鼠代谢紊乱的作用.方法:取SD6wk龄大鼠45只,随机分为3组:普通饮食对照组(n=15),下丘脑注射空白质粒,普通饲料喂养;高脂饮食对照组(n=15),下丘脑注射空白质粒,高脂饲料喂养;实验组(n=15),下丘脑注射shR-NA-SOCS3序列慢病毒重组体,高脂饲料喂养.每周测体质量1次.饲养8wk末,测空腹血糖和体质量,处死后立即取心脏血进行血清胰岛素、三酰甘油、总胆固醇、血清瘦素测定.结果:实验组体质量、三酰甘油、总胆固醇低于高脂饮食对照组(P<0.01),高于普通饮食对照组(P<0.05).实验组血清瘦素、血清胰岛素浓度低于高脂饮食对照组组(P<0.01),与普通饮食对照组比较无统计学差异.结论:下调SOCS3基因表达可以降低体质量、三酰甘油、血清胰岛素、总胆固醇及血清瘦素水平,对肥胖症、糖尿病及慢性并发症可能有预防和治疗作用.

7-氯苄基四氢巴马汀对L-甲状腺素诱发大鼠心肌肥厚及左心室肌原纤维Na^+-K^+-ATPase活力的影响

目的观察 7 氯苄基四氢巴马汀 (7 chlor BTHP)对大鼠心肌肥厚和心室肌原纤维质膜Na+ K+ ATPase活力的影响。方法用L 甲状腺素 (1mg·kg 1·d 1× 7d)诱发大鼠心肌肥厚 ,然后观察 7 chlor BTHP对大鼠心肌肥厚及左心室肌原纤维Na+ K+ ATPase的影响 ,以普萘洛尔 (Pro)作为阳性对照。结果经过 7 chlor BTHP(5mg·kg 1·d 1或 10mg·kg 1·d 1,ip)治疗 5天后 ,心肌肥厚明显改善 ,Na+ K+ ATPase活力明显降低。结论 7 chlor BTHP能明显消退L 甲状腺素诱发的大鼠心肌肥厚 ,并能显著降低心室肌原纤维膜Na+ K+ ATPase活力的升高。

唾液富组蛋白5克隆载体的构建

目的将唾液富组蛋白5(histatin5)的cDNA克隆至T载体,获取大量酶切后的目的片段。方法选用大肠杆菌偏爱密码子编码histatin 5氨基酸,设计5′端带酶切位点、3′端互补的两条引物,通过overlap PCR获取histatin 5的cDNA,将cDNA与T载体连接后转化大肠杆菌,筛选阳性克隆,PCR、酶切、测序鉴定。酶切重组T载体,获取目的片段。结果Histatin 5的cDNA正确克隆至T载体,无突变。结论克隆载体构建成功,有利于目的片段的酶切和回收。

醋酸和刀片铁锈对银染蛋白质脱色的影响

目的探讨银染蛋白质脱色失败的原因。方法比较有无醋酸、不同切胶工具的脱色效果,并检测刀片有无铁锈。结果用手术刀片切碎凝胶时,洗去凝胶中的醋酸,脱色成功,不洗醋酸,脱色失败;用塑料吸头捣碎凝胶,脱色成功;刀片有铁锈存在。结论醋酸和刀片铁锈是导致银染蛋白质脱色失败的原因。

唾液Histatin5突变体在巴斯德毕赤酵母中的优化表达

目的通过优化重组毕赤酵母GS115-pPICZα-A-HRP5′表达条件,提高表达水平,增强产物抗菌活性。方法将培养基甘油含量、pH、诱导前培养时间、甲醇诱导量、诱导后培养时间设置不同梯度,采用琼脂孔穴扩散法比较各梯度下表达产物抗菌活性。结果以pH6.0、甘油含量2.0%YEPG培养基、培养30h后用1.5%甲醇诱导培养48h,表达产物抗菌活性最高。结论优化条件为HRP5′的大规模发酵奠定了基础。