急性血管性异种排斥反应中心肌的病理变化与T细胞的免疫组织化学研究

目的用仓鼠对小鼠心脏移植模型 ,探讨T细胞在异种急性血管性排斥反应中的作用。方法建立仓鼠对小鼠颈部异位心脏移植模型。分三组 :仓鼠—Balb/c小鼠 ,仓鼠—Balb/c裸小鼠 ,仓鼠—裸小鼠 (移植术后第 1 0 0日自小鼠尾静脉输 3× 1 0 7Balb/c脾细胞 )。观察移植物的平均存活时间及病理学变化 ,移植心组织内CD4+及CD8+T细胞的浸润。结果各组移植心的平均存活时间分别为 3 .3 8± 0 .5 2、>1 0 0、8.3 3± 2 .1 4日 ;排斥的移植心病检提示为典型的异种急性血管性排斥反应 ,可见CD4+T细胞浸润 ;而移植于裸鼠的长期存活移植心结构完整 ,未见细胞浸润。结论排斥反应依赖于T细胞的存在 。

实验性脑出血大鼠脑组织形态学的动态变化

目的研究大鼠脑出血后神经元改变及胶质增生的动态变化特征以及变化规律对行为学的影响。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、出血组(分12h组、24h组、48h组、72h组4个时相组,每组5只)。采用自体股动脉血注入尾状核建立大鼠脑出血模型,通过对脑血肿周围脑组织坏死神经元计数和Longa行为学评分,动态观察各组大鼠脑血肿周围组织形态学的变化及神经功能状态。结果脑出血组12h即出现血肿周围脑组织部分神经元变性坏死,少数炎性细胞浸润,48h达高峰,72h后可见血肿周围胶质细胞、血管增生。脑出血组各时点的神经功能障碍评分均高于正常对照组和假手术组(P均<0.05)。结论脑出血后神经元变性、坏死,胶质细胞和血管增生可能是脑水肿加重和病情加重的主要原因之一;神经行为学变化与神经元病变及神经胶质细胞的增生性反应之间存在明显相关。

电针足三里穴抗大鼠应激性胃黏膜损伤作用与NTS内受体的关系

目的:探讨(EA)足三里穴抗大鼠应激性胃黏膜损伤作用与NTS(NTS)内受体关系．方法:健康♂SD大白鼠56只随机分为8组:应激模型组、EA-应激组、生理盐水(NS)-EA-应激组、哌唑嗪-EA-应激组、育亨宾-EA-应激组、心得安-EA-应激组、阿托品-EA-应激组、纳络酮-EA-应激组．采用束缚-冷方法制备大鼠应激性胃溃疡模型,观察NTS内微量注入不同受体阻断剂,胃溃疡指数(UI)的变化．结果:NS-EA-应激组、EA-应激组大鼠胃黏膜损伤明显减轻,UI分别为26．3±3．5,25．4±3．1,与应激模型组37．5±4．2比较有显著性差异(t= 5．42,t=6．13,P<0．01)．哌唑嗪-EA-应激组UI为34．6±3．4明显高于NS-EA-应激组(t=4．50, P<0．01)．育亨宾-EA-应激组和心得安-EA-应激组分别与NS-EA-应激组比较,UI无显著性差异．阿托品-EA-应激组大鼠UI为33．1±3．7明显高于NS-EA-应激组(t=3．53,P<0．01),纳络酮-EA-应激组与NS-EA-应激组比较,UI无显著性意义．结论:EA对大鼠应激性胃黏膜损伤的保护作用部分是通过NTS内α1,M受体介导的,而与α2,β和阿片肽受体无明显关系．

精氨酸加压素参与电针对大鼠应激性胃黏膜损伤的保护作用

目的：探讨精氨酸加压素(AVP)参与电针(EA)对应激性大鼠胃黏膜损伤保护作用及机制.方法：健康SD大鼠98只,随机分为模型组、电针组、生理盐水对照组、AVP 100ng组、AVP 200ng组、AVP 300ng组和AVP-V_1受体阻断剂组.采用束缚冷应激胃黏膜损伤大鼠模型,观察孤束核微量注射AVP,AVP-V_1受体阻断剂,大鼠胃黏膜血流量(GMBF)、溃疡指数(UI)、胃液酸度的变化.结果：与模型组比较,电针组大鼠UI减少(t= 7.5201,P＜0.01),GMBF(mv)增加(t=2.9606,P＜0.05),胃液酸度降低(t=4.2090,P＜0.01). AVP 100,200,300ng组分别与生理盐水对照组比较,UI明显减少(t=2.2718,t=4.9082,t =6.0413：P＜0.05-0.01),GMBF明显增加(t= 2.6845,t=3.8269,t=4.8795；P＜0.05-P＜0.01),胃液酸度明显降低(t=3.0526,t=3.8565,t= 5.6251；P＜0.05-P＜0.01),并且表现明显的剂量-效应依赖关系(r=0.9978,r=0.9980,r= 0.9829；P＜0.05).AVP-V_1受体阻断剂组与生理盐水对照组比较UI增大(t=5.6815,P＜0.01),GMBF减少(t=2.3750,P＜0.05),胃液酸度增高(t=2.2046,P＜0.05).结论：孤束核内AVP参与了电针对大鼠应激性胃黏膜损伤保护作用过程.

维生素E对多柔比星所致生殖毒性雄性大鼠的保护作用

目的探讨维生素E对多柔比星致生殖毒性雄性大鼠的保护作用。方法通过一次性静脉注射多柔比星7.5 mg.kg-1制备多柔比星致雄性大鼠生殖毒性损伤模型。维生素E组(n=8)从造模前1 d起,灌服维生素E 100mg.d-1连续14 d。模型组(n=8)造模后,每日经腹腔注射0.9%氯化钠溶液1 mL。对照组(n=8)不造模,每日经腹腔注射0.9%氯化钠溶液1 mL。通过观察大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和睾丸病理组织学变化评估多柔比星对雄性大鼠生殖毒性作用。结果与对照组比较,模型组大鼠血清SOD活性降低,MDA含量升高(P<0.05),睾丸重量和睾丸系数降低(P<0.05),精曲小管生精细胞明显减少,精母细胞和精子细胞退变,部分坏死、脱落。维生素E组大鼠血清SOD活性和MDA含量与对照组比较差异无显著性(P>0.05),睾丸重量和睾丸系数的变化和睾丸病理损伤程度轻于模型组。结论维生素E对多柔比星所致生殖毒性雄性大鼠具有保护作用,其药理作用机制与提高机体抗氧化能力、抑制脂质过氧化反应有关。

BDNF对慢性应激性大鼠海马神经元损伤的保护作用

目的研究脑源性神经营养因子(BDNF)对大鼠海马神经元的保护作用。方法40只成年Wistar大鼠随机分为对照组、应激组、BDNF低剂量组和高剂量组,每组10只。用电击足底结合噪声建立慢性应激大鼠模型,Morris水迷宫观察动物的空间学习和记忆能力,Nissl染色观察和计数海马神经元数量,Fara-2荧光法测海马突触体内游离钙浓度。结果在双海马注射BDNF后,对于因慢性应激引起的空间学习和记忆能力下降,海马神经元数量减少,海马突触体内游离钙浓度增高有明显保护作用。结论BDNF对应激海马损伤有保护作用,其机制可能是通过调节海马细胞内的钙浓度,防止海马神经细胞丢失有关。

褪黑素对大鼠应激性胃粘膜损伤的保护作用及其机理

目的探讨中枢褪黑素(MT)对大鼠应激性胃粘膜损伤的保护作用及其机制。方法采用束缚-冷应激复制大鼠应激性溃疡模型,通过脑立体定位仪进行侧脑室注射,检测各组大鼠胃溃疡指数(UI)、胃粘膜血流量(GMBF)、胃液量和胃液酸度。结果与正常组比较,应激组UI增大,GMBF下降,胃液量和胃液酸度升高(P<0.05,P<0.01)。MT+应激组UI减小,GMBF增多,胃液量和胃液酸度降低,与应激组和生理盐水(NS)+应激组比较差异有显著性,P<0.05、P<0.01。结论中枢MT对胃粘膜损伤有保护作用,其机制与增加胃粘膜血流量及抑制胃酸分泌有关。

大鼠胃窦部延髓内脏带机能结构区定位定性研究

目的探讨大鼠胃窦部延髓内脏带机能结构区的相对部位和化学性质。方法大鼠经麻醉后 ,在直视下将 3 0 %霍乱毒素B亚单位 -辣根过氧化物酶 (HRP)注入胃窦部浆膜下层和肌层内。术后动物存活 48小时 ,然后再次麻醉、灌流、固定、取材、切片 ,进行HRP逆行追踪法和免疫细胞化学法联合染色。对HRP标记细胞及HRP/VIP、HRP/ENK、HRP/CGRP双标记细胞在大鼠延髓内脏带的分布进行观察。结果在弧束核 (NTS)中下段的内侧核的外侧部有HRP标记纤维和HRP/VIP、HRP/ENK、HRP/CGRP双重标记细胞。其中细胞体大多数呈梭形 ,直径约 40～ 60 μm。在NTS尾段内侧核可见少量胞体较大的多极神经细胞 ,直径约 80～ 1 0 0 μm。 结论NTS的中下段和尾段内侧核的外侧部是胃窦部的对应机能结构中枢 ,而且ENK、VIP。

烫伤大鼠肠肌间神经丛Bax/Bcl-2的表达与大蒜素的干预

本研究观察了烫伤大鼠肠肌间神经丛Bax/Bcl-2蛋白的表达特征,并了解了大蒜素注射液的作用及作用机制。实验动物分成(1)对照组,(2)烫伤组,(3)药物组。(2)、(3)组又分烫伤后24、48、72h三个不同时间点。经麻醉、灌注、取材(空肠10cm)、后固定,制成铺片标本。采用免疫组织化学方法,对各时间点肠肌间神经丛进行Bax/Bcl-2检测。结果显示:(1)烫伤组Bax/Bcl-2的表达是以烫伤后24h阳性最强,48h有所下降,72h下降最明显;(2)药物组Bax阳性信号较对应时间点的烫伤组明显减弱,Bcl-2阳性信号较对应时间点的烫伤组明显增强。结果提示:(1)细胞凋亡是大鼠严重烫伤后小肠肌间神经丛神经元丢失的重要原因,而bax/bcl-2是参与神经细胞凋亡的重要凋控基因;(2)大蒜素注射液具有显著的保护作用,其机制可能与改善血循环,清除自由基,影响bax/bcl-2基因表达而起到抑制烫伤后迟发性神经元死亡有关。

孤束核微量注射一氧化氮合酶抑制剂对应激性大鼠胃黏膜损伤的影响

目的:观察孤束核微量注射选择性诱导型一氧化氮合酶抑制剂氨基胍和非选择性一氧化氮合酶抑制剂NG-硝基-L-精氨酸甲酯对应激大鼠胃黏膜损伤的影响。方法:实验于2005-09/12在咸宁学院医学院生理教研室完成。①选用70只雄性SD大鼠,2～3月龄。按随机抽签法将大鼠分为5组:正常对照组、模型组、氨基胍组、精氨酸甲酯组、生理盐水组,每组14只。正常对照组正常饲养。模型组大鼠造成应激性溃疡模型:禁食24h,禁水2h后,乙醚轻度麻醉,四肢及头部束缚于木板上,待大鼠清醒后,将木板垂直浸入23℃水中,水面平胸骨剑突处,浸水6h。生理盐水组、氨基胍组、精氨酸甲酯组大鼠于浸水应激前30min通过脑立体定位仪分别进行孤束核微量注射生理盐水0.2μL,氨基胍2μg(0.2μL),NG-硝基-L-精氨酸甲酯2μg(0.2μL),2种药品均为Sigma公司产品。②大鼠浸水6h后,应用LDF-3型激光多普勒血流仪测量胃黏膜血流量,参照Guth标准计算胃溃疡指数(数值越大,损伤越严重),以精密pH试纸和NaOH溶液滴定法分别测定胃液pH、胃液量及胃液酸度。③组间计量资料差异比较采用t检验。结果:大鼠70只均进入结果分析。①胃溃疡指数:氨基胍组明显低于生理盐水组和模型组犤(21.1±4.2),(34.9±5.1),(35.2±4.7)分,P<0.01犦;精氨酸甲酯组与生理盐水组和模型组比较,差异不明显(P>0.05)。②胃黏膜血流量:模型组和生理盐水组明显低于正常对照组和氨基胍组犤(158.2±39.4),(161.7±38.6),(312.6±34.5),(251.3±39.1)mV,P<0.01犦;精氨酸甲酯组高于模型组和生理盐水组,但差异不明显(P>0.05)。③胃液量和胃液酸度:模型组和生理盐水组明显多于或高于正常对照组和氨基胍组(P<0.05～0.01),精氨酸甲酯组与模型组和生理盐水组相近(P>0.05)。④pH值:模型组和生理盐水组明显低于正常对照组和氨基胍组(1.24±0.27,1.32±0.28,2.34±0.23,2.25±0.25,P<0.05～0.01),精氨酸甲酯组与模型组和生理盐水组相近(P>0.05)。结论:孤束核微量注射一氧化氮合酶抑制剂对应激大鼠胃黏膜损伤有保护作用,氨基胍的作用效果优于NG-硝基-L-精氨酸甲酯。

慢性复合应激对成年大鼠海马NeuroD表达的影响

本实验通过观察慢性复合应激对成年大鼠海马NeuroD表达的影响,探讨慢性复合应激与海马神经发生的关系。将成年雄性大鼠32只随机分为慢性复合应激组(简称应激组)和正常对照组(简称对照组)。应激组动物每天不规律交替暴露于四种复合应激原中,共持续6周。然后运用免疫组织化学染色、Western-blot和RT-PCR技术分别观察海马内NeuroD阳性神经元数量、NeuroD蛋白水平和核酸水平的变化。结果显示:慢性复合应激组动物海马齿状回NeuroD阳性神经元数量明显增多(P<0.05);海马NeuroD蛋白的表达明显增强(P<0.05);海马NeuroD mRNA水平明显上调(P<0.05)。表明慢性复合应激可引起海马NeuroD阳性神经元数量增多和NeuroD表达水平升高,提示慢性复合应激可能促进大鼠海马的神经发生。

大鼠孤束核微量注射L-精氨酸对电针抗应激性胃黏膜的损伤

目的:L-精氨酸在一氧化氮合酶的催化作用下生成内源性一氧化氮,观察孤束核内一氧化氮对电针抗应激性胃黏膜损伤的影响。方法:实验于2005-05/12在咸宁学院医学院生理教研室完成。84只健康SD大鼠随机分为正常对照组、单纯应激组、电针+应激组、生理盐水+电针+应激组、L-精氨酸+电针+应激组、L-硝基精氨酸甲酯+电针+应激组,每组14只,7只用于溃疡指数检测,7只用于胃黏膜血流量、胃液酸度和胃黏液量的测定。孤束核微量注射:动物麻醉后固定在脑立体定位仪上,参照paxinos和watson图谱进行定位。注射溶液体积为0.2μL(L-硝基精氨酸甲酯2μg,L-精氨酸5μg),20s内注射完毕。注射完毕后30min再电针。用生理盐水作参照注射。电针方法:将大鼠放置大小适当的特制有机玻璃笼中,双后肢充分暴露。选取双侧足三里穴,1寸毫针刺入。以电针仪给予电刺激,频率为20Hz,强度以大鼠下肢轻微抖动为度,连续电针30min再应激造模。采用冷束缚法制备大鼠应激性溃疡模型,测定各组大鼠胃黏膜的溃疡指数、胃黏膜血流量、胃壁结合黏液量、胃液酸度。组间比较采用t检验。结果:84只大鼠均进入结果分析。与正常对照组比较,单纯应激组胃黏膜溃疡指数、胃液酸度增高,胃黏膜血流量和胃黏液量减少[0分,(41.32±7.20)mmol/L,(323.10±32.40)mV,(1.56±0.30)mg;(37.50±4.20)分,(60.15±9.40)mmol/L,(179.40±41.20)mV,(1.13±0.40)mg,P<0.05～0.001]。与单纯应激组比较,电针+应激组胃黏膜溃疡指数和胃液酸度明显降低,胃黏膜血流量和胃黏液量明显升高[(37.50±4.20)分,(60.15±9.40)mmol/L,(179.40±41.20)mV,(1.13±0.40)mg;(25.40±3.10)分,(49.25±6.50)mmol/L,(234.30±39.10)mV,(1.65±0.30)mg,P<0.05～0.001]。与生理盐水+电针+应激组比较,L-精氨酸+电针+应激组大鼠胃黏膜溃疡指数、胃液酸度增高,胃黏膜血流量和胃黏液量减少[(26.30±3.50)分,(48.63±6.30)mmol/L,(233.20±35.40)mV,(1.61±0.20)mg;(33.20±3.90)分,(58.36±6.90)mmol/L,(191.30±32.30)mV,(1.21±0.30)mg,P<0.05,P<0.01],L-硝基精氨酸甲酯电针+应激组胃黏膜溃疡指数、胃液酸度明显降低,胃黏膜血流量和胃黏液量明显增加[(26.30±3.50)分,(48.63±6.30)mmol/L,(9233.20±35.40)mV,(1.61±0.20)mg;(21.10±3.20)分,(41.45±6.00)mmol/L,(284.50±36.30)mV,(2.01±0.40)mg,P<0.05,P<0.01]。结论:孤束核内一氧化氮参与了电针抗应激性胃黏膜损伤的病理生理过程。

慢性捆绑应激对大鼠学习记忆及海马I-B4表达的影响

目的探讨小胶质细胞在应激中的作用。方法把大鼠分为应激组和正常对照组 ,应激组大鼠每天捆绑6h ,持续 2 1d ,然后用Y迷宫测试两组大鼠学习记忆能力 ,应用免疫组织化学方法测定两组大鼠海马小胶质细胞I-B4的表达。结果应激组大鼠学习记忆能力明显受损 (P <0 .0 5 ) ,其海马小胶质细胞I -B4免疫阳性产物较对照组明显增加 (P <0 .0 5 )。结论慢性捆绑致大鼠学习记忆受损可能与海马小胶质细胞I-B4表达增加有关。

大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马c-fos表达和神经元的凋亡

目的研究大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马c fos表达和神经元的凋亡。方法wistar大鼠双侧颈总动脉夹闭 30min ,造成全脑缺血 ,松开动脉夹再灌注。动物均于再灌注 1h行c fos原位杂交 ,再灌注 4 8h行TUNEL染色 ,观察海马神经元的凋亡情况。结果缺血再灌注后 ,大鼠海马CA1区c fos基因表达增强 ,缺血再灌注大鼠的TUNEL染色可见CA1区有大量阳性细胞 ,与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论脑缺血再灌注后导致海马c fos基因的表达显著增强 ,细胞凋亡明显增加。

慢性捆绑应激致大鼠学习记忆受损及海马胶质细胞GFAP表达的变化

目的探讨星形胶质细胞在应激过程中的作用。方法大鼠随机分成应激组和正常组 ,应激组大鼠每天捆绑 6h ,持续 2 1d ,第 2 2d采用Y迷宫测试两组大鼠空间学习记忆能力 ,用免疫组织化学方法测定其海马胶质细胞GFAP的表达。结果应激组大鼠学习记忆能力下降 (P <0 .0 5 ) ,其海马胶质细胞GFAP阳性细胞数比正常组显著增多 (P <0 .0 5 )。

慢性捆绑应激致大鼠海马CA_3区锥体细胞超微结构的变化

目的观察慢性捆绑应激紧张对大鼠海马神经元超微结构的影响。方法实验组采用捆绑器每天捆绑 6h ,2 1d后用透射电镜观察海马CA3区锥体细胞超微结构的变化。结果实验组海马CA3区锥体细胞细胞器减少 ,粗面内质网局部扩张并脱颗粒 ;线粒体肿胀 ,嵴数量减少 ;脂褐素增加 ;核膜内陷 ,核内外有空泡。

烫伤大鼠小肠肌间神经丛bax/bcl-2的表达及其意义

目的观察烫伤大鼠小肠肌间神经丛bax/bcl 2蛋白的表达特征与烫伤性细胞凋亡的关系。方法动物分成对照组和烫伤组 ,烫伤组又分 2 4、4 8、72h等几个不同时间点 ,每组于不同时间点进行麻醉、灌注、取材、后固定 ,制成肠肌间神经丛铺片标本。采用免疫组织化学方法 ,进行bax/bcl 2检测。结果bax/bcl 2的表达在烫伤后 2 4h阳性最强 ,以后随着时间延长而逐渐下降。结论细胞凋亡是大鼠严重烫伤后小肠肌间神经丛神经元丢失的重要原因 ,而bax/bcl 2是参与神经细胞凋亡的重要凋控基因。推测烫伤激活bcl 2蛋白的表达是体内最重要的抗凋亡机制之一。

健脑益智汤对海马神经元突触后致密物-95表达的影响

目的 观察健脑益智汤对慢性复合应激大鼠海马突触后致密物-95(PSD-95)表达的影响。方法 应用多因素的慢性复合应激制作Wistar大鼠学习记忆障碍的动物模型,应激组大鼠每天给予健脑益智汤灌胃共4周,然后用Y迷宫测定所有大鼠的学习记忆成绩,运用免疫组织化学方法观察海马的PSD-95的表达。结果 健脑益智汤能显著改善大鼠因慢性复合应激所致学习记忆障碍。结论 健脑益智汤可以防止大鼠海马PSD-95的丢失从而改善学习记忆能力。