牛乳头瘤病毒基因1型新疆南疆SY-12株全基因序列分析

为了掌握牛乳头瘤病毒基因1型(BPV-1)全长基因序列特征,提取已鉴定为牛乳头状瘤病毒基因1型病料的病毒基因组DNA,参照GenBank中参考序列设计扩增引物、测序引物,扩增各片段,纯化回收后送样测序,对得到序列进行全长序列分析。结果显示,新疆南疆SY-12株为BPV-1基因型,其全基因组长度为7946 bp,具有BPV-1基因型的结构特征,与GenBank中的BPV-1基因型参考株核苷酸同源性高达99.4%。与BPV-2、BPV-13基因型参考株的进化关系最近,同为Delta属。表明新疆南疆BPV-1基因型SY-12株为Delta属牛乳头瘤病毒。

新疆南疆地区牛乳头瘤病毒1型L1基因克隆及原核表达

本研究以构建牛乳头瘤病毒1型L1基因原核表达系统pET32a-L1及表达牛乳头瘤病毒1型L1蛋白为目的,为进一步制备基因工程疫苗奠定基础。从牛体表赘生瘤组织中提取DNA,PCR扩增L1基因片段,克隆至pGM-T载体。测序成功后将目的片段和表达载体经双酶切连接于表达载体pET32a中,并构建重组质粒pET32a-L1。重组质粒经双酶切、测序鉴定后转入表达宿主BL21中,IPTG诱导后表达融合蛋白L1,通过SDS-PAGE电泳和Westernblot进行鉴定。结果显示,pET32a-BPV-1-L1重组质粒构建成功。经SDS-PAGE鉴定,诱导后表达的重组蛋白L1相对分子量约为75 kD,与预期结果大小一致;经Western blot检测牛乳头瘤病毒1型L1蛋白能与Anti-HPVantibody[BPV-1/1H8+CAMVIR]单克隆抗体产生反应。pET32a-BPV-1-L1原核表达系统得以成功构建并能表达牛乳头瘤病毒1型L1蛋白。