鹅细小病毒HG5/82株的分离鉴定及生物学特性的研究

本研究通过对1982年黑龙江某鹅场发生的鹅细小病毒病疑似病例的肝病变组织病毒分离,进行回顾性研究。将肝脏加PBS研磨后,-70℃/37℃反复冻融三次,除菌过滤后接种12日龄鹅胚。发现病毒对鹅胚的致死时间为5～6d,胚体体表有轻微出血点。鹅胚尿囊液经磷钨酸染色,可见具有典型特征的细小病毒粒子。将该病毒尿囊液在12日龄鹅胚中连续传16代,随着传代次数的增加,胚体多集中在3～4d死亡。病毒传至第三代时死亡胚体头、颈、背部出现较为严重的出血点,体表有水肿。第五代病毒尿囊液(命名为HG5/82)对12日龄鹅胚的ELD50为10-5.92/0.1mL。将20只12日龄雏鹅分为三个试验组和一个阴性对照组,各组分别接种鹅胚尿囊液104.92ELD50、103.92ELD50、102.92ELD50及生理盐水,发现雏鹅接种HG5/82后4d出现轻微腹泻,随后恢复正常。用套式PCR检测雏鹅肛拭子病毒的体外排放情况。发现三个试验组在接种病毒后1～20d用套式PCR均可检测到病毒。对照组及试验组接种后20～56d没有检测到病毒。将套式PCR产物进行序列测定并于参考毒株进行比较,表明该序列具有GPV相应区域的共同分子特征,与GPV参考毒株B的相应序列同源性达93.6%。本研究结果表明,该分离毒株为典型的鹅细小病毒(GooseParvovirus,GPV),对雏鹅的致病力较弱。

猪瘟病毒研究进展与防控中的几项实用技术

猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种急性、发热性、接触性、高度传染性疾病,可引起各种年龄猪发病。世界动物卫生组织(OIE)将猪瘟列为A类16种法定传染病之一。我国早在1955年就研制成功了猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV),并在预防猪瘟的发生中起到了重要作用。近年来猪瘟的流行和发病出现了新的变化,如非典型性、持续性感染以及免疫失败等。当前,猪瘟仍是世界养猪业的一大威胁,造成了严重的经济损失。通过分析国内外猪瘟的发生特点,并结合国内外公开发表和学术会议交流的学术文献,总结了猪瘟病毒的分子特征、猪瘟的最新流行特点、诊断技术以及疫苗研究进展,并总结猪瘟防控中的几项实用技术,以期为猪瘟的研究与防控提供一定的参考。

重组布氏杆菌BP26蛋白和OMP31蛋白作为间接ELISA诊断抗原的研究

目的传统布氏杆菌病血清学方法因其抗原构成复杂,存在较严重的交叉免疫反应性,导致结果判定困难。BP26及OMP31分别为布氏杆菌细胞周质蛋白及外膜蛋白,在感染牛、绵羊、山羊、犬和人类均为优势免疫原,且在抗原性上具有较好的布氏杆菌种属特异性。方法以大肠杆菌表达、纯化的BP26和OMP31重组蛋白为包被抗原,初步建立了检测血清特异抗体的间接ELISA方法,并以现地牛布氏杆菌普查检测血清100份为样本,与传统的试管凝集试验进行了比较研究。结果试管凝集试验血清样本阳性率为15%(15/100);BP26包被抗原ELISA检测判为阳性的12个样本中有11为试管凝集反应阳性,相对阳性率为73.3%,二者阳性符合率为92%(11/12);而采用OMP31为包被抗原,阳性检出率为0(图5)。结论被检测区域阳性牛主要感染布氏杆菌为牛种布氏杆菌(B.abortus天然缺失OMP31基因);BP26作为间接ELISA包被抗原用于牛布氏杆菌血清学检测具有良好的特异性及较好的敏感性。

鸡传染性支气管炎病毒疫苗株和中国流行株鉴别诊断的研究

根据国外已发表的ＩＢＶ核蛋白基因序列设计一对特异性引物，引物跨度为１５Ｋｂ，包括整个开放阅读框架。由于疫苗株Ｍ４１在核蛋白基因３′末端非编码区缺失近０２Ｋｂ的基因片段，因此ＲＴＰＣＲ扩增将得到１３Ｋｂ的基因产物。我们应用这对引物扩增９株ＩＢＶ的核蛋白基因，结果表明，除８株ＩＢＶ扩增出１５Ｋｂ的预计大小的基因产物外，疫苗株Ｍ４１则扩增出１３Ｋｂ的基因产物，与实际设计相符。经酶切分析、分子杂交及序列分析鉴定证实我们获得的ＰＣＲ产物为ＩＢＶ的核蛋白基因。

13株新城疫病毒强毒株的分离鉴定及部分生物学特性

2004年-2005年从黑龙江省11个地区鸡场、鸽场、鹅场疑似新城疫(ND)病死鸡、鸽、鹅体内分离到24株具有血凝活性的病毒,经HA、HI试验和电镜观察证实了13株病毒为NDV。其鸡胚平均死亡时间(MDT)和1日龄雏鸡脑内接种致病指数(IC-PI)分别为36.8 h^73.6 h和1.51~2.00之间,属于NDV强毒株或中强毒株。除HLJ-12-04株外,强毒株的血凝素热稳定性较差,属快速或中速血凝解脱型;弱毒株的血凝素热稳定性好,属慢速血凝解脱型。所有毒株均可较好地凝集鸡和人(O型血)的红细胞,但对其他动物的红细胞凝集性差异较大,对马和兔的红细胞凝集无规律。

重组牛白细胞介素-2的高效表达及其生物学活性的测定

以ＰＣＲ方法扩增重组牛白细胞介素２基因，获得带有ＡＴＧ的完整牛白细胞介素２基因片段。以ｐＢＶ２２０为表达质粒，成功地构建了重组牛白细胞介素２的高效表达载体ｐＢＶｍＢｏＩＬ２，并转入Ｅ．ｃｏｌｉ。诱导表达结果表明，表达的重组牛白细胞介素２占总菌体蛋白的２２％以上，比原来提高２倍。活性测定结果表明，表达的重组牛白细胞介素２具有极显著的体外增殖活化淋巴细胞的活性，重组牛白细胞介素２的分子量约为１５４８８。

我国部分地区NDV的分子流行病学研究

新城疫（Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ，ＮＤ）是由新城疫病毒（ＮＤＶ）引起的禽类的一种以呼吸道、消化道粘膜出血为典型症状的急性传染病，其病原——ＮＤＶ是副粘病毒科、副粘病毒亚科、腮腺炎病毒属的成员，为有囊膜的负链ＲＮＡ病毒。ＮＤＶ基因组为单股不分节ＲＮＡ，编码六种病毒结构蛋白，其中融合蛋白（Ｆ）和血凝素－神经氨酸酶蛋白（ＨＮ）构成囊膜外表面的纤突，是ＮＤＶ的功能性糖蛋白，在致病和免疫应答过程中起重要作用［１］。由于ＮＤＶ只有一种血清型，对ＮＤＶ不同毒株的差异性分析只能采用毒力、蚀斑形成能力测定等功能性试验来进行，但分型要么太细，无规律可循；要么过于粗放，无流行病学意义，使得ＮＤＶ流行病学研究一直难以突破。 近年来，随着分子生物学技术的广泛应用，使得人们在分子水平上对病毒遗传变异机制的研究取得了长足进展，发现病毒的遗传变异与疾病的流行有着密不可分的联系，并形成了病毒分子流行病学这样一门崭新学科，也为ＮＤ的流行病学研究提供了一种先进技术。已有研究表明，ＮＤＶＦ基因的遗传变异与ＮＤＶ的变异和流行密切相关，是ＮＤＶ分子流行病学研究的首选基因。

病毒受体研究进展

病毒通过与宿主易感细胞表面的特异性受体结合而启动其复制过程。宿主的组织及细胞表面特定受体是决定病毒入侵途径、扩散方式及决定宿主发病特点的主要因素：因此，开展对病毒受体的研究具有重要意义。从受体角度阐明病毒入侵机制，是预防和治疗病毒性疾病的药物及疫苗研发重要领域。

利用噬菌体多肽库确定IBDV线性中和位点的研究

鸡传染性法氏囊炎（ＩＢＤ）是由鸡传染病性法氏囊炎病毒（ＩＢＤＶ）引起的一种急性、接触性传染病。ＩＢＤＶ侵害鸡的体液免疫中枢器官法氏囊，使鸡体的免疫系统处于抑制状态，往往使防疫注射收不到应有的效果，易于诱发疫病，造成较大经济损失。ＩＢ－ＤＶ由４种主要蛋...

DNA探针、粪检菌和ELISA三种方法在诊断副结核病中的比较研究

本研究在已构建的副结核分枝杆菌Ｃ２株ＤＮＡ基因文库的基础上，应用正、反向杂交试验从基因文库中筛选出特异性片段ＰＴＰ３１，以光敏生物素标记制成ＤＮＡ探针。用此ＤＮＡ探针以及粪检菌和ＥＬＩＳＡ三种方法分别对３２份副结核菌素（ＰＰＤ）变态反应阳性牛粪便及相应血清样品进行检测，其检出率分别为４７％（１５／３２）、５６％（１８／３２）和３４％（１１／３２）。对随机采集的２７６份牛粪便及血清样品，３种方法的检出率分别为１０％（２７／２７６）、１３％（３６／２７６）和７％（７９／２７６）。本研究结果表明，ＤＮＡ探针与粪检菌呈现正相关性，ＤＮＡ探针比ＥＬＩＳＡ方法能够检出更多的阳性数。

我国猪布鲁氏菌病流行现状及研究进展

布氏杆菌是重要的人兽共患病病原体。该病在世界各国流行广泛，严重危害人类健康和畜牧业发展，还是美国军方成功研发的第1个细菌战武器。布氏杆菌分为猪型，流产型，马耳他型，犬型，绵羊型，沙林鼠型和最近新发现的水生动物型。猪布氏杆菌在全世界多数国家的野猪和家猪中都有发生，对人也表现出高度易感性，危害也较为严重。

新城疫病毒F基因疫苗接种剂量的研究

以新城疫病毒F基因的cDNA与真核表达载体pcDNA3重组 ,构建了新城疫病毒F基因疫苗。采用不同剂量接种SPF鸡后 ,通过抗体监测和强毒攻击试验 ,分析了其诱导的体液免疫应答及免疫保护作用。结果表明 ,接种剂量为1 0 0 ,2 0 0ug时 ,试验鸡在免疫后第 2周出现较明显的抗体反应 ,接种剂量为 1 0ug时抗体变化不明显。以标准强毒F4 8E9攻击后 ,空白对照组及接种剂量为 1 0 ,1 0 0ug组的鸡只全部发病死亡 ,未获得免疫保护 ;而 2 0 0ug组鸡只 30 %存活 ,获得部分免疫保护。

应用套式PCR对恶性卡他热病毒在不同动物体内变异的研究

应用本实验建立的三组套式ＰＣＲ（ＰＣＲ１、２、３）和一组以前报道的套式ＰＣＲ（ＰＣＲ４），对５９份外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）ＤＮＡ样品进行了恶性卡他热病毒（Ｍａｌｉｇｎａｎｔｃａｔａｒｒｈａｌｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓ，ＭＣＦＶ）核酸序列的检测。这些样品来自５１只羊，以及与羊接触而发病的６头牛和２只鹿。除ＰＣＲ４外，其它三组ＰＣＲ都能扩增现有４个角马型ＭＣＦＶ分离株。有６只羊在４组ＰＣＲ中都呈阴性，其余５３份样品经ＰＣＲ４检测均呈阳性。ＰＣＲ１只能从４５只羊体检出ＭＣＦＶＤＮＡ，未能从牛和鹿体检出病毒ＤＮＡ。ＰＣＲ２检测的所有样品均呈阴性。在ＰＣＲ３扩增中，除２头牛外，其它５１份样品均呈阳性。通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和限制性酶切分析，对ＰＣＲ１－４产物的特异性进行了鉴定。此外，敏感性实验表明，四组ＰＣＲ的差异也不明显。因此，本实验结果说明ＭＣＦＶ基因组在不同种动物之间发生了变异。

马传染性贫血病毒免疫学研究进展

马传染性贫血病病毒(equine infctious anemiavirus EIAV)导致马持续性感染和反复病毒血症,与人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)同属反转录病毒科慢病毒属,二者有很多相似的特性[2].EIAV是遗传结构最简单的慢病毒,其感染的潜伏期只有几天至几周,而且在EIAV感染过程中新的抗原变异株的出现与疾病的反复发作相关,这使EIAV有可能作为研究HIV-1分子致病机理及免疫机制的动物模型[3].

鸡T淋巴细胞亚群及其表面分化抗原研究进展

本文综述了鸡Ｔ淋巴细胞表面分化抗原的研究进展，并从组织分布、个体发育以及结构特征等方面对荷抗原的各亚群Ｔ细胞进行了阐述。