我国猪流感研究最新概况

猪流感(Swine Influenza,SI)是由正粘病毒科猪流感病毒(SIV)引起的一种急性、高度接触传染性的猪呼吸道疾病,临床以突发、咳嗽、呼吸困难、发热、衰竭、迅速康复或死亡为特征.该病呈地方性流行,可发生于各年龄和各品种猪,发病率高达100%.

猪流感疫苗研究进展

有效的疫苗将会降低猪群中流感的发病率和猪作为人流感病毒储存库的可能性。本文综述了猪流感疫苗在激发体液免疫、细胞免疫、交叉保护以及避免母源抗体干扰和区分野毒感染等方面的研究进展,为优化猪流感疫苗提供参考。

两株H5N1亚型禽流感病毒NS1基因诱导细胞凋亡的研究

为了研究H5N1亚型禽流感病毒NS1基因诱导的细胞凋亡作用,我们将两株H5N1亚型禽流感病毒A/Duck/Guangdong/40/2000(H5N1)(简称DKGD/40/00)和A/Duck/Guangxi/35/2001(H5N1)(简称DKGX/35/01)的NS1基因克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP,转染Hela细胞后,应用荧光显微镜检测转染表达效率,应用TUNEL和流式细胞仪观察NS1基因产生的细胞凋亡作用。结果两株病毒NS1蛋白表达均能诱导Hela细胞凋亡,凋亡率无明显差异。表明单一的NS1并不能完全阐明凋亡的产生与病毒毒力强弱和病毒扩散之间的关系。

猪流感病毒A/Swine/Inner Mongolia/547/01分离株神经氨酸酶基因的克隆及真核表达

根据GenBank中登录的猪流感病毒参照序列设计了扩增神经氨酸酶 (NA)基因的特异性引物。从猪流感病毒A/Swine/InnerMongolia/5 4 7/0 1(H3N2 )株感染的鸡胚液中直接提取病毒RNA ,经RT_PCR扩增后将其克隆到pMD18_T载体上 ,进行序列测定和拼接。用HindⅢ酶切后 ,亚克隆到杆状病毒转移载体pMelBacB上 ,得到重组转移载体pMelBacNA ,然后与线性化杆状病毒DNA(Bac_N_BlueTMDNA)共转染于sf9昆虫细胞。经 3轮噬斑纯化 ,提取其DNA经PCR鉴定 ,获得重组杆状病毒株。SDS_PAGE结果显示 ,目的基因已获得表达 ,Westernblot和神经氨酸酶活性检测结果显示表达产物具有良好的免疫原性和神经氨酸酶活性 。

SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR法检测H5亚型禽流感病毒

用2株不同致病力的H5亚型禽流感病毒(AIV)感染Madin-Darby canine kidney(MDCK)细胞,收集感染后6,12,24,48,72 h的病毒,提取总RNA,利用Rotor Gene RG3 000实时定量PCR仪对H5亚型AIV的HA基因进行检测,试图建立快速检测H5亚型AIV的real-time RT-PCR方法,并用所建立的方法对来自全国各地的疑似H5亚型AIV的病料和咽喉拭子、泄殖腔拭子346份进行检测。结果表明：农业部动物流感重点开放实验室建立的HA基因的teal-time RT-PCR方法可以检测到细胞培养物中和临床样品中是否含有H5亚型AIV,与常规RT-PCR比较,该方法更加特异、准确、快速。