PI3K/AKT信号通路相关基因拷贝数变异与甲状腺癌关系的研究进展

目前越来越多的研究表明基因拷贝数变异可参与甲状腺癌的发生、发展及转归等多个环节。脂酰肌醇-3羟基激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路相关基因拷贝数变异情况的研究,为进一步认识甲状腺癌各亚型的基因图谱,以及甲状腺癌的准确诊断和开展精准的分子靶向治疗提供了分子学基础。以下就近年来PI3K/AKT信号通路相关重要基因拷贝数变异与甲状腺癌相关性的研究进展作一综述。

甲状腺功能正常成人血清碘参考值范围初探

目的了解甲状腺功能（简称甲功）正常成人碘营养状况，探索其血清碘参考值范围，为个体碘营养评价提供依据。方法对黑龙江省哈尔滨市某大学新入学的硕士研究生224人．排除甲功异常的个体和患有其他疾病者，筛选甲功正常成人，砷铈催化光光度法（WS／T107．1-2016）测定其尿碘，高氯酸-氯酸钠消解法测定血清碘，化学发光免疫分析法测定血清中游离三碘甲状腺原氨酸（freetriiodothyronine，FT3）、游离甲状腺素（freethyroxin，FT4）、促甲状腺激素（thyroid—stimulatinghormone，TSH）、甲状腺球蛋白自身抗体（thyroglobulinantibody，TGAb）和甲状腺过氧化酶自身抗体（thyroidperoxidaseantibody，TPOAb）。并对其中的指标进行评估和相关性分析。结果共检测185例甲功正常成人，尿碘水平[中位数（四分位数），M（P25，p75）]为140．40（90．30，198．95）μg／L。血清碘平均水平为（66．32±15．46）μg／L，正常成人血清碘95％医学参考值范围（x±1．96s）初步定为36．02～96．62μg／L。FT3平均水平为（5．18±0．51）μmol／L，FT4平均水平为（18．04±2．06）pmol／L，TSH水平为1．57（1．14，2．04）mU／L。血清碘受试者工作特征（receiveroperatingcharacteristic，ROC）曲线下面积为0．781，明显大于尿碘ROC曲线下面积（0．524），二者比较差异有统计学意义（t=-12．22．P〈0．05）。血清碘与n、TSH均无相关性（r=-0．071、0．045，P均〉0．05），与n呈正相关（r=0．280，P〈0．05）。结论血清碘比尿碘相对稳定，能够较准确反映近期人体碘营养状况，甲功正常成人血清碘医学参考值范围可为我国成人个体碘营养判断提供依据．

哺乳期大鼠乳腺组织磷脂酰肌醇-3激酶-蛋白激酶B信号通路对摄碘功能的影响

目的观察不同碘营养水平下大鼠乳腺组织磷脂酰肌醇-3激酶（P13K）、蛋白激酶B（AKT）、钠碘转运体（NIS）mRNA和蛋白的表达，以及血清胰岛素样生长因子I（IGF-1）的变化，探讨该通路在哺乳期乳腺摄碘过程中所起到的作用。方法Wistar大鼠130只（雌鼠100只，雄鼠30只），按体质量采用随机数字表法将雌鼠分为5组：①对照组（NI组），普通饲料＋含碘50μg／L去离子水；②低碘1组（L11组），低碘饲料＋去离子水；⑧低碘2组（L12组），低碘饲料＋含碘5μg／L去离子水；④高碘1组（H11组），普通饲料＋含碘3000μg／L去离子水；⑤高碘2组（H12组），普通饲料＋含碘10000μg／L去离子水。每组20只，饲养3个月后，将雌鼠与雄鼠合笼，交配后，取出雄鼠，每只雌鼠单独喂养，在产后10d时，采集尿样，测定哺乳期大鼠尿碘，处死后取哺乳期大鼠的血液、乳腺组织。酶联免疫吸附法测定哺乳期大鼠血清IGF-1水平；实时荧光定量PCR法检测乳腺P13K、AKT、NISmRNA表达；蛋白印迹法检测乳腺P13K、总AKT、磷酸化AKT（p—AKT）和NIS蛋白表达。结果L11、L12组哺乳期大鼠尿碘中位数（3．16、6．36μg／L）明显低于NI组（162．59μg／L），H11、H12组（2356．27、11507．29μg／L）明显高于NI组，差异均有统计学意义（P均〈0．01）。与NI组[（8．84±2．12）μg／L]比较，L11、L12组哺乳期大鼠血清IGF-1含量[（13．30±2．37）、（10．90±1．92）μg／L]明显升高（P均〈0．01）。实时荧光定量PCR法检测结果显示．哺乳期大鼠乳腺组织NIS、AKT、P13KmRNA表达组间比较差异有统计学意义（F=14．916、36．477、14．994，P均〈0．01）。其中NISmRNA表达在L11、L12组（0．75±0．40、0．89±0．51）明显高于NI组（0．53±0.31），H12组（0．30±0．24）明显低于NI组（P〈0．05或〈0．01）；AKTmRNA表达在U1、U2组（0．90±0．19、0．64±0．22）均明显高于NI组（0．43±0．22），H12组（0．29±0．15）明显低于NI组（P〈0．05或〈0．01）；P13KmRNA表达在U1组（0．85±0．42）明显高于NI组（0．50±0．24），H12组（0．28±0．10）明显低于NI组（P均〈0．01）。蛋白印迹法检测结果显示，哺乳期大鼠乳腺NIS蛋白表达组间比较差异有统计学意义（F=4．510，P〈0．01），其中L11组（1．67±0．97）明显高于NI组（0．87±0．43，P〈0．05）；p-AKT蛋白表达组间比较差异有统计学意义（F：3．528，P〈0．05），其中H12组（1．10±0．30）明显高于NI组（0．75±0．23，P〈0．05）；总AKT、P13K蛋白表达组间比较差异无统计学意义（F=0．558、1．319，P均〉0．05）。结论P13K—AKT信号通路对乳腺NIS表达的抑制作用弱于碘摄入量本身的作用．而功能性p-AKT表达量随着碘浓度的逐渐增加呈上升趋势，表现出抑制哺乳期乳腺NIS表达的作用。

甲基乙基酮-细胞外信号调节蛋白激酶信号传导通路在哺乳期乳腺摄碘中的作用

目的观察不同浓度17β-雌二醇（17β-estradiol，E2）或甲基乙基酮（MEK）信号通路抑制剂U0126对小鼠哺乳期乳腺细胞MEK、细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）和钠／碘同向转运体（NIS）mRNA和蛋白表达，探讨MEK-ERK信号传导通路在哺乳期乳腺细胞摄碘中的作用。方法采用细胞体外培养的方法，对Balb／C小鼠哺乳期乳腺细胞进行传代培养，观察不同含量（0．0008、0．0040、0．0200、0．1000、0．5000mg／L）E2刺激后，小鼠哺乳期乳腺细胞MEK、ERK和NISmRNA表达；细胞分组为U0126＋E2组[加入MEK的抑制剂U0126（20μmmol／L）30min后，再加入E2（0．1mg／L）]、E2组和对照组，培养24h后，收集样本。用实时荧光定量PCR方法检测小鼠乳腺原代细胞中MEK、ERK和NISmRNA表达：蛋白质免疫印迹（Westernblot）方法检测小鼠乳腺原代细胞总ERK、磷酸化ERK和NIS蛋白表达。结果在E2刺激试验中，随着E2含量的不断升高，哺乳期乳腺细胞ERK、NISmRNA的表达量逐渐增加（F=28．23、18．37，P均〈0．05）。在MEK抑制实验中，E2组NISmRNA的表达量（1．90±1．36）较U0126＋E2组（0．90±0．39）和对照组（0．76±0．18）高．组间比较差异均有统计学意义（t=3．218、2．737，P均〈0．05）；在总ERK蛋白表达中，E2组（1．62±0．30）最高，与U0126＋E2组（1．19±0．32）和对照组（1．25±0．27）比较，差异均有统计学意义（t=2．401、2．246，P均〈0．05）；ERK磷酸化后．E2组磷酸化ERK蛋白表达（0．97±0．02）比U0126＋E2组（0．76±0．18）高，组间比较差异有统计学意义（t=-2．840，P〈0．05）；E2组NIS蛋白表达（0．49±0．08）比U0126＋E2抑制组（0．37±0．04）和对照组（0．41±0．03）高，组间比较差异均有统计学意义（t=3．286、2．294，P均〈0．05）。结论E2激活MEK-ERK信号通路，上调哺乳期乳腺细胞ERK、NISmRNA及蛋白的表达。抑制该通路后，ERK、NISmRNA与蛋白表达均呈明显降低的趋势：MEK—ERK可能是哺乳期乳腺摄碘的一条重要信号传导通路。

不同碘水平对哺乳期大鼠乳腺组织摄碘丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响

目的观察不同碘营养水平对哺乳期大鼠乳腺组织丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）激酶（mitogen extracellular kinase，MEK）、细胞外信号调节激酶（extracellular signal—regulated kinase，ERK）及钠碘转运体（Na＋-I^-Symporter,NIS）的表达及血清雌二醇（estradiol，E2）水平的影响，探讨在差异性碘饮食中哺乳期乳腺MEK—ERK信号通路的摄碘机制。方法Wistar大鼠130只（雌鼠100只、雄鼠30只），按体质量采用随机数字表法将雌鼠分为5组：①A组（低碘1组）：低碘饲料（碘含量为16．15μg／b）＋不加碘的去离子水；②B组（低碘2组）：低碘饲料＋碘含量为5．00μg／L的去离子水；③C组（适碘组）：普通饲料（碘含量为350．00μg／kg）＋碘含量为50．00μg／L的去离子水；④D组（高碘1组）：普通饲料＋碘含量为3000．00μg／L的去离子水；⑧E组（高碘2组）：普通饲料＋碘含量为10000．00μg／L的去离子水。每组20只大鼠，饲养90d后，将5组雌鼠与雄鼠合笼，交配后，将雄鼠取出，每只雌鼠单独喂养；在生育第10天，将母鼠处死，收集血液离心后获取血清，采用放射免疫法检测E2水平；取出乳腺组织，应用实时荧光定量PCR法、蛋白免疫印迹法（Western blot）法检测MEK、ERK及NISmRNA和蛋白的表达。结果哺乳期大鼠E2水平组间比较差异有统计学意义（r=12．765，P〈0．05）。其中A组[（1．22±0．46）ng／L]明显高于C组[（0．77±0．38）ng／L]，D组[（0．41±0．21）ng／L]、E组[（0．36±0．15）ng／L]均低于C组，差异均有统计学意义（P〈0．01或〈0．05）。哺乳期大鼠乳腺NIS、MEK、ERKmRNA表达组间比较差异均有统计学意义（F=14．916、10．757、45．172，P均〈0．05）。其中A组（0．75±0．40）、B组（0．89±0．51）NIS113RNA表达明显高于C组（0．53±0．31，P〈0．05或〈0．01），E组（0．30±0．24）NISmRNA表达明显低于C组（P〈0．05）；A组（1．61±0．48）、B组（1．46±0．67）MEKmRNA表达明显高于C组（0．85±0．51，P均〈0．01）；A组（1．45±0．31）ERKITIRNA表达明显高于C组（1．06±0．21，P〈0．01），D组（0．72±0．15）、E组（0．53±0．14）ERKmRNA表达明显低于C组（P均〈0．01）。哺乳期大鼠乳腺NIS、MEK、总ERK、磷酸化ERK（p—ERK）蛋白表达组间比较差异均有统计学意义（F=4．510、8．953、16．154、6．683，P均〈0．05）。其中A组（1．67±0．97）NIS蛋白表达明显高于C组（0．87±0．43，P〈0．05）；B组（1．17±0．35）MEK蛋白表达明显高于C组（0．74±0．15，P〈0．05），E组（0．54±0．12）MEK表达明显低于C组（P〈0．05）；A组（1．27±0．19）总ERK蛋白表达明显高于C组（0．90±0．24，P〈0．05），E组（0．58±0．12）总ERK蛋白表达明显低于C组（P〈0．05）；E组（0．55±0．19）p-ERK蛋白表达明显低于C组（0．86±0．20，P〈0．05）。结论哺乳期大鼠血清E2水平随着碘摄入水平的增加而降低，MEK、ERK的表达随之下降，进而使NIS的表达也相应下调。

富含碘的饮食与甲状腺癌关系的Meta分析

目的探讨富含碘的饮食与甲状腺癌的关系。方法计算机检索PubMed、ExcerptMedicaDatabase（EMbase）、中国知网、万方数据库、维普数据库和中国生物医学文献数据库，检索时间均从建库至2016年6月．查找富含碘的饮食与甲状腺癌发病关系的病例对照研究。按照纳入和排除标准进行资料提取和质量评价后。采用Stata12．0软件进行Meta分析。结果共纳入19个病例对照研究，病例和对照共计47316人（病例6662人，对照40654人）。19篇纳入研究文献质量均可靠（评分均在6分及以上）。Meta分析结果显示，鱼类共纳入13篇，较频繁的摄入（每周3次及以上）鱼类会降低甲状腺癌的发生风险[比值比（OR）=0．87，95％置信区间（a）：0．77～0．98，P〈0．05]；除海水鱼外的海产品共纳入16篇，较频繁摄入海产品（每周3次及以上）会增加甲状腺癌的发生风险（OR=1．48，95％CI：1．11～1．99，P〈0．05）。研究因素亚组分析显示，海鲜（OR=2．23，95％CI：1．45～3．45，P〈0．05）、海洋动物性食品（OR=9．48，95％CI：5．03～17．88，P〈0．05）和海菜类（OR=1．93，95％CI：1．39～2．69，P〈0．05）能够增加甲状腺癌患病风险，贝类（OR=1．21，95％CI：0．94～1．56，P〉O．05）对甲状腺癌的发生未见明显影响；海水鱼（OR=0．94，95％CI：0．50～1．77，P〉0．05）、淡水鱼（OR：0．90，95％CI：0．66～1．21，P〉0．05）对甲状腺癌的发生未见明显影响。结论海鲜、海洋动物性食品和海菜类会增加甲状腺癌患病风险。