紫外线与砷化物对人胚胎皮肤上皮细胞联合作用的研究

目的探讨砷化物和紫外线是否具有联合作用。方法以紫外线(UV)照射启动人胚胎皮肤(HES)细胞后,加入砷化物(NaAsO2/DMA),采用彗星实验、电镜形态学观察及基因芯片技术,分析相应的变化。结果在彗星实验中,经UV与砷化物先后作用后,HES产生的拖尾率30.12%(UV和NaAsO2处理组)和22%(UV和DMA处理组),高于UV处理组(8%)分别与NaAsO2处理组(9.8%)与DMA处理组(12.9%)之和;细胞超微结构观察,有明显的细胞增长旺盛的形态学改变;基因芯片结果有旺盛的促细胞生长繁殖和细胞信号系统的蛋白基因表达。结论实验中UV和NaAsO2以及与DMA联合作用于HES细胞,显示具有统计学意义的协同作用。

地方性氟中毒监测指标的选择

地方性氟中毒在我国分布面广。除上海市外，各省（直辖市、自治区）均有地方性氟中毒病区，现有病区县１２９６个，占全国总县数的４６．８％，有病区村（屯）１４８１６８个。在饮水型病区完成改水降氟的村（屯）占病区改水任务的４６．０２％。在燃煤污染型病区完成改灶...

尿氟测定样品的采集时间及校正问题

目的探讨尿氟测定中尿样的采集时间及校正问题。方法采集了高氟区地氟病人和对照区健康人晨尿及当日２４ｈ尿样，用电极法测定。结果两组人群晨尿与２４ｈ尿氟含量及分别用晨尿和２４ｈ尿计算的日排氟量差异均无显著意义，而两者相关显著。晨尿与２４ｈ尿用肌酐的校正值，晨尿用比重校正后与２４ｈ尿氟含量比较差异也无显著意义，且均具有相关性。结论尿氟测定可采集晨尿代替２４ｈ尿，也无需任何繁琐的校正。

低剂量无机砷对人正常肝细胞L-02中Sirt1及细胞周期相关基因表达的影响

目的探讨低剂量无机砷对人正常肝细胞（L-02）中Sirt1及细胞周期相关基因表达的影响。方法0．0（对照）、0.1、0．2、0．4μmol／L三氧化二砷（As2O3）处理L-02细胞24、48、72h，CCK-8法检测砷剂对细胞增殖的影响；蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测砷对Sirt1蛋白表达及细胞内分布的影响；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测砷对Sirt1及细胞周期相关基因p16、p21和p53 mRNA表达的影响；染色质免疫共沉淀（CHIP）技术检测砷对细胞周期相关基因启动子区H3K9、H3K27乙酰化及Sirt1富集程度的影响。结果①不同剂量砷分别作用于L-02细胞24、48、72h，均可促进细胞的增殖（P均〈0．05），增幅在15％-40％。②染砷48h，0．1μmol／L砷处理组p16、p21、p53 mRNA表达（0．80±0．10、0．88±0．02、0．85±0．05）低于对照组（1．00±0．04、1.00±0．03、1．00±0．06，t=-3．22、-5．76、-3．23，P均〈0．05）；p16、p21、p53基因启动子区H3K9、H3K27乙酰化富集程度均低于对照组（t=-2．89、-9．50、-17．64、-2．88、-3．41、-3．73，P均〈0．05），降低幅度在20％-70％。③染砷48h，0．1μmol／L砷处理组Sirt1在细胞核内分布（1．04±0．02）高于对照组（1．00±0．01，t=3．10，P〈0．05），平均增加4％；p16、p53基因启动子区Sirt1的富集程度（1．33±0．04、4．28±0．12）高于对照组（1．00±0．13、1．00±0．13，t=4．20、32．11，P均〈0．05），至少增加30％。结论低剂量无机砷可能通过促进Sirt1的核内分布，降低p16、p21、p53细胞周期相关基因启动子区H3K9、H3K27乙酰化的富集水平，抑制p16、p21、p53细胞周期相关基因的表达，从而促进细胞的增殖。

亚甲基四氢叶酸还原酶基因677C〉T和5-甲基四氢叶酸高半胱氨酸甲基转移酶基因2756A〉G多态性与地方性砷中毒易感性的关系

目的探讨亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因SNP位点rs1801133（677C〉T）、5-甲基四氢叶酸高半胱氨酸甲基转移酶（MTR）基因SNP位点rs1805087（2756A〉G）多态性与地方性砷中毒易感性的关系。方法采用病例．对照研究方法，以内蒙古自治区地方性砷中毒病区140名出现砷性皮肤病变患者作为病例组，以同地区157名体检健康居民作为对照组，采集静脉血，乙二胺四乙酸二钠（EDTA）抗凝，采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法（PCR-PFLP法），检测分析MTHFR677C〉T位点和MTR2756A〉G位点多态性。单因素Logistic回归分析年龄、性别、居住年限以及MTHFR677C〉T、MTR2756A〉G基因型对地方病砷中毒患病的影响。结果MTHFR677C〉T位点等位基因C出现频率在病例组和对照组分别为56.43％、52．55％，等位基因T出现频率分别为43．57％、47．45％，等位基因C、T出现频率两组比较差异无统计学意义（χ^2=0．90，P〉0．05）；MTR2756A〉G位点等位基因A出现频率在病例组和对照组分别为93．93％、95．54％，等位基因G出现频率分别为6．07％、4．46％，等位基因A、G出现频率两组比较差异无统计学意义（χ^2=0．84，P〉0．05）。MTHFR677C〉T位点CC基因型出现频率在病例组和对照组分别为22．86％、18．47％,CT基因型分别为67．14％、67．52％，TT基因型分别为10．00％、14．01％；将杂合型CT、突变型TT、杂合型CT和突变型TT合并与野生型CC比较差异无统计学意义（χ^2=0．56、0．81、0．87，P均〉0．05）。MTR2756A〉G位点AA基因型出现频率在病例组和对照组分别为87．86％、91．72％，AG基因型分别为12．14％、7．64％，GG基因型分别为0．00％、0．64％；将杂合型AG、突变型GG、杂合型AG和突变型GG合并与野生型AA比较差异无统计学意义（χ^2=1．65、1．35、1．22，P均〉0．05）。单因素Logistic回归分析显示，≥60岁组患地方性砷中毒的危险性是440岁组的2．78倍，居住年限≥40年患地方性砷中毒的危险性是居住年限〈40年的1．85倍。二者比较差异均有统计学意义[比值比（OR）=2．78，1．85，P〈0．01或〈0．05]；男性和女性患病率比较，差异无统计学意义（OR=1．56，P〉0．05）。MTHFR677C〉T杂合型CT、突变型TT分别与野生型CC患病率比较，差异无统计学意义（OR=1．53、1．63，P均〉0．05）；MTR2756A〉G杂合型AG、突变型GG分别与野生型AA患病率比较，差异无统计学意义（OR=1．04、1．20，P均〉0．05）。结论研究人群样本中MTHFR677C〉T位点和MTR2756A〉G位点多态性与地方性砷中毒的易感性不存在相关关系。

亚砷酸钠对大鼠小脑颗粒细胞凋亡和神经球蛋白mRNA表达的影响

目的观察亚砷酸钠（NaAsO2）对原代培养大鼠小脑颗粒细胞凋亡和神经球蛋白mRNA表达的影响。方法选取出生后7～8d的Wistar大鼠20只，断头取小脑皮层，制备颗粒细胞悬液，以4×109个／m2的密度接种于培养液，采用不同浓度NaAsO：E0（对照）、2、5、10μmol／L]进行染毒。培养24h时，采用激光共聚焦法检测细胞内活性氧（ROS）和细胞凋亡：培养24、48h时，采用实时荧光定量PCR法检测细胞内神经球蛋白mRNA表达。结果培养24h时．对照和2、5、10μmol／L染砷组ROS荧光强度分别为421．32±53．52、1082．09±321．58、2223．02±1011．37、1366．87±102．14，组间比较差异有统计学意义（F=5．873，P〈0．05）；细胞凋亡率分别为（8．91±5．63）％、（26．46±1．77）％、（43．65±14．45）％、（56．04±6．95）％，组间比较差异有统计学意义（F=18．369，P〈0．05）。培养24h时，对照和2、5、10μmol／L染砷组神经球蛋白mRNA表达分别为1．00±0．06、0．77±0．22、O．43±0．18、0．42±0．14，组间比较差异有统计学意义（F=18．235，P〈0．05）；培养48h时，神经球蛋白mRNA表达分别为1．00±0．01、0．89±0．09、0．60±0．16、0．08±0．02，组间比较差异有统计学意义（F=80．843，P〈0．05）。结论随着NaAs02浓度升高，ROS和凋亡水平升高，而神经球蛋白mRNA表达明显降低，表明机体受到刺激后，产生的保护性蛋白可能被消耗，推测砷所诱导的神经球蛋白的表达在一定程度上与砷所导致的神经损伤有关。

饮水砷暴露与人外周血白细胞组蛋白H3K4me3、H3K79me3关系的探讨

目的 观察饮水砷暴露对人群外周血白细胞中组蛋白H3第4位赖氨酸三甲基化（H3K4me3）和H3第79位赖氨酸三甲基化（H3K79me3）修饰水平的影响，分析砷暴露与H3K4me3和H3K79me3修饰水平的关系。方法 采用整群抽样的调查方法，在山西省和吉林省饮水型地方性砷中毒典型病区开展现场调查，选择饮水年限≥10年的当地常住居民281人作为调查对象。受检人群按照饮用水砷含量分为对照组（水砷含量≤0.01 mg／L，60例）、低水砷暴露组（ 〉 0.01- 0.05 mg／L，61例）、中水砷暴露组（ 〉 0.05 - 0.10 mg／L，50例）、高水砷暴露组（ 〉 0.10 mg／L，110例）。采集调查对象的饮用水样、即时尿样和外周血样。采用原子荧光法检测饮水砷含量和尿砷含量；斑点杂交方法（Dot Blotting）检测外周血白细胞中组蛋白H3K4me3和H3K79me3的修饰水平。结果 对照组，低、中、高水砷暴露组间年龄（61.50、60.00、59.50、59.50岁）、性别（男：20、27、17、40例，女：40、34、33、70例）、体质指数（BMI）、吸烟及饮酒情况比较，差异无统计学意义（P均 〉 0.05）。对照组，低、中、高水砷暴露组水砷含量中位数分别为0.005、0.024、0.076、0.150 mg／L；尿砷含量中位数分别为0.011、0.018、0.061、0.134 mg／L；水砷累积暴露量中位数分别为0.342、1.641、5.273、7.716 mg，组间比较差异有统计学意义（H = 256.041、88.615、218.610，P均 〈 0.01）。对照组，低、中、高水砷暴露组人群外周血白细胞中H3K4me3（0.100、0.059、0.083、0.083）、H3K79me3（0.049、0.036、0.055、0.052）修饰水平比较，差异无统计学意义（H = 1.488、2.097，P均 〉 0.05）。外周血白细胞H3K4me3、H3K79me3修饰水平与水砷含量、尿砷含量、水砷累积暴露量呈正相关关系（r = 0.245、0.221，0.299、0.318，0.149、0.149，P 〈 0.01或 〈 0.05）；H3K4me3与H3K79me3修饰水平之间呈正相关关系（r = 0.811，P 〈 0.01）。结论 饮水砷暴露虽然与人群外周血白细胞中H3K4me3和H3K79me3修饰水平存在正相关关系，但仍需扩大样本量进一步研究。