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外源性组织型纤溶酶原激活物信号肽突变体增强蛋白质在哺乳细胞中的表达及分泌
被引量:
3
1
作者
王甲业
陈文江
+3 位作者
李妍
魏国超
程德春
凌虹
《国际免疫学杂志》
CAS
北大核心
2010年第5期403-405,414,共4页
目的 比较不同tPA信号肽突变体对目的蛋白表达和分泌水平的影响,优化并筛选通用性外源信号肽序列.方法 通过定点突变技术将人类组织型纤溶酶原激活物(tPA)的信号肽第22位氨基酸由脯氨酸(P)突变为丙氨酸(tPA22P/A)或甘氨酸(tPA22...
目的 比较不同tPA信号肽突变体对目的蛋白表达和分泌水平的影响,优化并筛选通用性外源信号肽序列.方法 通过定点突变技术将人类组织型纤溶酶原激活物(tPA)的信号肽第22位氨基酸由脯氨酸(P)突变为丙氨酸(tPA22P/A)或甘氨酸(tPA22P/G),并将突变前后的3种信号肽序列分别插入HIV-1 p24基因的N末端,构建不同的p24蛋白表达载体,这些重组表达载体体外瞬时转染人胚肾HEK293T细胞,转染72 h后,通过SDS-PAGE与western blot检测并比较各组培养上清和细胞中p24蛋白的表达水平.结果 成功构建了3个p24蛋白的真核表达载体P24T.tPA、P24T.tPA22P/A和P24T.tPA22P/G,经序列测定证实基因序列和方向与预期相符;重组载体转染293T细胞72 h后均检测到分泌性p24的表达.与P24T.tPA组相比,P24T.tPA22P/A转染组培养上清中和细胞内p24蛋白表达水平分别提高62%和29%,P24T.tPA22P/G转染组分别提高8%和6%.结论 tPA信号肽22位由脯氨酸突变为丙氨酸或甘氨酸,这就提高了目的蛋白的表达和分泌水平,为优化外源蛋白在哺乳细胞中的表达和分泌提供了实验基础.
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关键词
组织型纤溶酶原激活物
信号肽
哺乳细胞
原文传递
题名
外源性组织型纤溶酶原激活物信号肽突变体增强蛋白质在哺乳细胞中的表达及分泌
被引量:
3
1
作者
王甲业
陈文江
李妍
魏国超
程德春
凌虹
机构
哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省病原生物学重点实验室
大庆医学高等专科学校临床医学部外科
教研室
出处
《国际免疫学杂志》
CAS
北大核心
2010年第5期403-405,414,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(30771910)
科技部“十一五”传染病重大专项(2008ZX10001-012)
+2 种基金
黑龙江省自然科学基金(ZJY0601-01)
黑龙江省教育厅重点项目(11531206)
黑龙江省研究生创新科研资金(YJSCX2009-222HLJ)
文摘
目的 比较不同tPA信号肽突变体对目的蛋白表达和分泌水平的影响,优化并筛选通用性外源信号肽序列.方法 通过定点突变技术将人类组织型纤溶酶原激活物(tPA)的信号肽第22位氨基酸由脯氨酸(P)突变为丙氨酸(tPA22P/A)或甘氨酸(tPA22P/G),并将突变前后的3种信号肽序列分别插入HIV-1 p24基因的N末端,构建不同的p24蛋白表达载体,这些重组表达载体体外瞬时转染人胚肾HEK293T细胞,转染72 h后,通过SDS-PAGE与western blot检测并比较各组培养上清和细胞中p24蛋白的表达水平.结果 成功构建了3个p24蛋白的真核表达载体P24T.tPA、P24T.tPA22P/A和P24T.tPA22P/G,经序列测定证实基因序列和方向与预期相符;重组载体转染293T细胞72 h后均检测到分泌性p24的表达.与P24T.tPA组相比,P24T.tPA22P/A转染组培养上清中和细胞内p24蛋白表达水平分别提高62%和29%,P24T.tPA22P/G转染组分别提高8%和6%.结论 tPA信号肽22位由脯氨酸突变为丙氨酸或甘氨酸,这就提高了目的蛋白的表达和分泌水平,为优化外源蛋白在哺乳细胞中的表达和分泌提供了实验基础.
关键词
组织型纤溶酶原激活物
信号肽
哺乳细胞
Keywords
Tissue plasminogen activator
Signal peptide
Mammalian cells
分类号
Q [生物学]
R3 [医药卫生—基础医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
外源性组织型纤溶酶原激活物信号肽突变体增强蛋白质在哺乳细胞中的表达及分泌
王甲业
陈文江
李妍
魏国超
程德春
凌虹
《国际免疫学杂志》
CAS
北大核心
2010
3
原文传递
已选择
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参考文献
引证文献
统计分析
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