实验性自身免疫性神经炎中NKR-P1+细胞对IL-12和IL-18协同作用的影响

目的探讨实验性自身免疫性神经炎(Experimental autoimmune neuritis,EAN)中IL-12和IL-18的协同作用以及NKR-P1+细胞对该作用的影响。方法用200μl免疫乳剂(含230μg特异性肽段P2 53-78、2 mg结核菌素、100μl PBS和100μl弗氏不完全佐剂)免疫Lewis大鼠,建立EAN动物模型,在发病高峰期取出大鼠淋巴结,制备单核细胞悬液,在NKR-P1+细胞存在或不存在的条件下,分别或同时与IL-12(20 ng/ml)、IL-18(25 ng/ml)共培养,同时加入20μg/ml P2 53-78刺激,孵育24 h后,以1×107个活细胞/只鼠回输至正常Lewis大鼠体内,每天观察发病情况,并进行临床评分以及组织病理学检测,采用ELISA法检测细胞培养上清中IFNγ、TNF-α和IL-4的分泌水平,淋巴细胞增殖试验检测P2 53-78特异性淋巴细胞的增殖反应。结果 P2 53-78特异性淋巴细胞在IL-12或IL-18单独刺激下,可引发中等发病程度的EAN;而在IL-12和IL-18共同刺激下,引发EAN的发病程度明显加重;当删除淋巴细胞中的NKR-P1+细胞后,可引发严重的EAN;而NKR-P1+细胞删除后的P2 53-78特异性淋巴细胞与IL-12和IL-18共培养,其自身反应活性得到了抑制,并低表达IFNγ,从而抑制Th1细胞的分化。结论IL-12和IL-18的共同刺激能够增强P2 53-78特异性淋巴细胞的自身反应性;IL-12和IL-18能够诱导出高水平的IFNγ,从而促进Th1细胞的分化,其作用部分是通过NKR-P1+细胞实现的。

大鼠脑缺血后IFN-γ mRNA的表达

目的:检测SD大鼠脑缺血后缺血脑组织和外周免疫淋巴细胞干扰素-γ(IFN-γ)mRNA的表达,探讨IFN-γ在脑缺血中的作用。方法:用线拴封闭大脑中动脉的方法制作脑缺血动物模型,采用原位杂交的方法检测缺血脑组织及外周淋巴组织中IFN-γmRNA动态的变化情况。采用免疫组织化学方法检测缺血脑组织中浸润的T淋巴细胞数量。结合免疫组化和寡核苷酸探针杂交方法,检测T细胞表达IFNγ-。结果:①缺血脑半球IFN-γmRNA含量较假手术组明显增高(P<0.001),且随着脑缺血时间延长其表达量增加;②IFN-γmRNA表达数量随损伤面积扩大而增加(R=0.978 0,P<0.001);③缺血组外周血单核细胞IFN-γmRNA水平较假手术组明显增高,12小时达高峰(P<0.001),而脾淋巴细胞、淋巴结细胞IFN-γmRNA水平也均比假手术组明显增高,且随着脑缺血时间延长表达量增加(P<0.05、P<0.01、P<0.001);④随着脑缺血时间的延长,脑内浸润的T细胞数量显著增加(P<0.05、P<0.01、P<0.001)。结论:IFN-γmRNA表达主要参与大脑损伤后期反应过程,可能加重脑缺血后期的炎症反应。